目的:探討自噬在紅景天甙誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制。方法:紅景天甙處理人胃癌AGS細(xì)胞,Hoechst33342染色觀察凋亡形態(tài)學(xué)變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡細(xì)胞數(shù);透射電鏡觀察自噬體形成,mRFP-GFP-LC3轉(zhuǎn)染觀察熒光自噬斑點(diǎn);Western blot觀察凋亡蛋白、自噬蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表達(dá);自噬抑制劑氯喹(CQ)預(yù)處理AGS細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡細(xì)胞數(shù),Western blot觀察凋亡相關(guān)蛋白變化,Hoechst33342染色觀察凋亡形態(tài)學(xué)變化;PI3K/AKT激動(dòng)劑胰島素樣生長因子(IGF-1)預(yù)處理AGS細(xì)胞,mRFP-GFP-LC3轉(zhuǎn)染和Western blot分別觀察自噬變化。結(jié)果:紅景天甙誘導(dǎo)人胃癌AGS細(xì)胞自噬體形成,熒光自噬斑點(diǎn)增多,抑制PI3K/AKT/mTOR通路蛋白活化;CQ預(yù)處理胃癌細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增加,細(xì)胞核固縮現(xiàn)象增強(qiáng),抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào),促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase9表達(dá)上調(diào);IGF-1預(yù)處理胃癌細(xì)胞明顯減弱紅景天甙誘導(dǎo)的自噬現(xiàn)象。結(jié)論:中藥紅景天甙可...

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圖1 透射電鏡觀察紅景天甙誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞形成雙膜自噬囊泡

Hoechst33342染色結(jié)果顯示,紅景天甙處理細(xì)胞后細(xì)胞核染色質(zhì)固縮增加,自噬抑制劑氯喹預(yù)處理后,紅景天甙誘導(dǎo)的核固縮顯著增加,表明抑制自噬可促進(jìn)紅景天甙誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(圖3)。2.4氯喹促進(jìn)紅景天甙誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡

圖2 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察紅景天甙對(duì)熒光自噬斑點(diǎn)的影響

流式細(xì)胞分析結(jié)果表明,與對(duì)照組(4.5±0.7)%相比,紅景天甙組細(xì)胞凋亡率(13.7±0.9)%明顯提高,自噬抑制劑氯喹預(yù)處理后,紅景天甙的促凋亡效應(yīng)顯著增強(qiáng)(圖4),凋亡率由(13.7±0.9)%上升為(25.2±1.2)%。表明抑制自噬可增強(qiáng)紅景天甙的促凋亡作用。圖3Ho....

圖3 Hoechst33342染色觀察AGS細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化

圖2激光掃描共聚焦顯微鏡觀察紅景天甙對(duì)熒光自噬斑點(diǎn)的影響圖4流式細(xì)胞檢測胃癌細(xì)胞凋亡數(shù)量

圖4 流式細(xì)胞檢測胃癌細(xì)胞凋亡數(shù)量

圖3Hoechst33342染色觀察AGS細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化2.5氯喹紅景天甙對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)影響

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