目的評價黃芩苷PEG-PCL納米膠束的細胞內分布及抗心肌細胞凋亡作用。方法采用薄膜水化法制備黃芩苷PEG-PCL納米膠束,以香豆素-6作為熒光探針,評價PEG-PCL納米膠束在細胞內的攝取及細胞內分布;采用10μmol·L^-1異丙腎上腺素誘導H9c2心肌細胞凋亡進行造模,將等劑量黃芩苷和黃芩苷PEG-PCL納米膠束在造模前預處理1h,測定細胞凋亡相關的caspase 3活性、ROS水平,Bcl-2和Bax蛋白的表達水平。結果黃芩苷PEG-PCL納米膠束具有粒徑小,釋藥緩慢等優(yōu)良特點;熒光試驗表明,PEG-PCL納米膠束能促進藥物的細胞攝取,還能將藥物聚集在線粒體部位,細胞凋亡試驗結果表明,黃芩苷PEG-PCL能顯著降低凋亡相關的caspase 3活性、ROS水平,降低促凋亡Bax的表達,明顯提高抗凋亡Bcl-2的表達,這些結果均與等劑量的黃芩苷存在顯著性差異。結論黃芩苷PEG-PCL納米膠束能促進黃芩苷被心肌細胞攝取,有助于將藥物聚集在線粒體部位,從而很大程度上提高藥物抗心肌細胞凋亡作用。 

【文章來源】：中國現(xiàn)代應用藥學. 2020,37(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

黃芩苷PEG-PCL納米膠束的粒徑(a)、Zeta電位(b)和電鏡圖(c)(n=3)

C6進入細胞后呈現(xiàn)零散狀，與線粒體質量合現(xiàn)象不顯著，而C6@PEG-PCL納米膠束進入細胞后，大部分聚集在線粒體部位，具有很好的時間依耐性，隨著時間的延長，線粒體部位蓄積的藥物量增加，由此可知，PEG-PCL納米膠束有助于將藥物聚集在心肌細胞線粒體。結果見圖4。3.5 心肌細胞凋亡

PEG-PCL屬于雙親性嵌段共聚物，由聚乙二醇-聚己內酯聚合而成，溶于水后可自組裝形成納米膠束，外周的PEG具有很好的水溶性，內核PCL具有很好的脂溶性，因此，內核PCL可以很好地與脂肪性成分融合在一起，顯著提高脂溶性成分的水溶性。另外，PEG-PCL納米膠束的粒徑較小，較小的納米粒子很容易被細胞攝取，從而可以攜帶活性小分子藥物跨膜轉運進入細胞，有助于提高藥物在細胞內效應部位的藥理作用[11]。本研究采用帶綠色熒光的C6代替黃芩苷，承載于PEG-PCL納米膠束內核，熒光試驗結果表明，C6@PEG-PCL納米膠束跨膜轉運進入細胞內明顯高于C6，恰好驗證了以上的推測。納米膠束進入細胞后，細胞內具有大量的溶酶體，溶酶體對于外源性成分具有吞噬、降解和清除作用，鑒于PEG-PCL納米膠束外周的PEG，具有很好的生物相容性和無免疫原性，故能逃逸溶酶體的識別和吞噬[12-13]，因此，黃芩苷被PEG-PCL納米膠束包裹后，PEG-PCL納米膠束在外圍可以起到保護作用，減少藥物的降解，有利于藥物盡量向線粒體部位遞送。激光共聚焦試驗結果顯示，隨著時間的延長，C6@PEG-PCL納米膠束組與線粒體重合越明顯，由此推斷，PEG-PCL納米膠束有助于將藥物遞送到線粒體。查閱相應的文獻，PEG-PCL納米膠束在藥物的細胞內遞送過程中，不僅能通過細胞膜表面小窩蛋白和網(wǎng)格蛋白的介導進入細胞內，還能細胞膜形成臨時性的孔道，促進藥物的跨膜轉運[14]；另外線粒體膜也具有類似細胞膜的屏障功能，納米膠束也具有相似的跨膜轉運功能，因此，PEG-PCL納米膠束在藥物的線粒體遞送過程中，比游離藥物明顯具有優(yōu)勢。隨著線粒體部位藥物的濃度增加，抗心肌細胞凋亡效果也相應增強。本研究結果顯示，黃芩苷PEG-PCL納米膠束可以明顯減少caspase 3活性、ROS水平，降低促凋亡蛋白Bax表達，顯著升高抗凋亡蛋白Bcl-2表達，進一步推測PEG-PCL納米膠束可以增加黃芩苷在細胞內的攝取量，促使細胞內的藥物濃度增多，進入線粒體部位的藥物量也相應增加，從而更好地發(fā)揮抗心肌細胞凋亡作用。圖4 香豆素-6 PEG-PCL納米膠束和香豆素-6與H9c2心肌細胞共同孵育的激光共聚焦圖像


本文編號：3621328