發(fā)布時(shí)間：2022-02-12 07:50

　　目的評(píng)價(jià)黃芩苷PEG-PCL納米膠束的細(xì)胞內(nèi)分布及抗心肌細(xì)胞凋亡作用。方法采用薄膜水化法制備黃芩苷PEG-PCL納米膠束,以香豆素-6作為熒光探針,評(píng)價(jià)PEG-PCL納米膠束在細(xì)胞內(nèi)的攝取及細(xì)胞內(nèi)分布;采用10μmol·L^-1異丙腎上腺素誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞凋亡進(jìn)行造模,將等劑量黃芩苷和黃芩苷PEG-PCL納米膠束在造模前預(yù)處理1h,測(cè)定細(xì)胞凋亡相關(guān)的caspase 3活性、ROS水平,Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果黃芩苷PEG-PCL納米膠束具有粒徑小,釋藥緩慢等優(yōu)良特點(diǎn);熒光試驗(yàn)表明,PEG-PCL納米膠束能促進(jìn)藥物的細(xì)胞攝取,還能將藥物聚集在線粒體部位,細(xì)胞凋亡試驗(yàn)結(jié)果表明,黃芩苷PEG-PCL能顯著降低凋亡相關(guān)的caspase 3活性、ROS水平,降低促凋亡Bax的表達(dá),明顯提高抗凋亡Bcl-2的表達(dá),這些結(jié)果均與等劑量的黃芩苷存在顯著性差異。結(jié)論黃芩苷PEG-PCL納米膠束能促進(jìn)黃芩苷被心肌細(xì)胞攝取,有助于將藥物聚集在線粒體部位,從而很大程度上提高藥物抗心肌細(xì)胞凋亡作用。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué). 2020,37(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

黃芩苷PEG-PCL納米膠束的粒徑(a)、Zeta電位(b)和電鏡圖(c)(n=3)

C6進(jìn)入細(xì)胞后呈現(xiàn)零散狀，與線粒體質(zhì)量合現(xiàn)象不顯著，而C6@PEG-PCL納米膠束進(jìn)入細(xì)胞后，大部分聚集在線粒體部位，具有很好的時(shí)間依耐性，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，線粒體部位蓄積的藥物量增加，由此可知，PEG-PCL納米膠束有助于將藥物聚集在心肌細(xì)胞線粒體。結(jié)果見圖4。3.5 心肌細(xì)胞凋亡

PEG-PCL屬于雙親性嵌段共聚物，由聚乙二醇-聚己內(nèi)酯聚合而成，溶于水后可自組裝形成納米膠束，外周的PEG具有很好的水溶性，內(nèi)核PCL具有很好的脂溶性，因此，內(nèi)核PCL可以很好地與脂肪性成分融合在一起，顯著提高脂溶性成分的水溶性。另外，PEG-PCL納米膠束的粒徑較小，較小的納米粒子很容易被細(xì)胞攝取，從而可以攜帶活性小分子藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞，有助于提高藥物在細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)部位的藥理作用[11]。本研究采用帶綠色熒光的C6代替黃芩苷，承載于PEG-PCL納米膠束內(nèi)核，熒光試驗(yàn)結(jié)果表明，C6@PEG-PCL納米膠束跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)明顯高于C6，恰好驗(yàn)證了以上的推測(cè)。納米膠束進(jìn)入細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)具有大量的溶酶體，溶酶體對(duì)于外源性成分具有吞噬、降解和清除作用，鑒于PEG-PCL納米膠束外周的PEG，具有很好的生物相容性和無(wú)免疫原性，故能逃逸溶酶體的識(shí)別和吞噬[12-13]，因此，黃芩苷被PEG-PCL納米膠束包裹后，PEG-PCL納米膠束在外圍可以起到保護(hù)作用，減少藥物的降解，有利于藥物盡量向線粒體部位遞送。激光共聚焦試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，C6@PEG-PCL納米膠束組與線粒體重合越明顯，由此推斷，PEG-PCL納米膠束有助于將藥物遞送到線粒體。查閱相應(yīng)的文獻(xiàn)，PEG-PCL納米膠束在藥物的細(xì)胞內(nèi)遞送過(guò)程中，不僅能通過(guò)細(xì)胞膜表面小窩蛋白和網(wǎng)格蛋白的介導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，還能細(xì)胞膜形成臨時(shí)性的孔道，促進(jìn)藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)[14]；另外線粒體膜也具有類似細(xì)胞膜的屏障功能，納米膠束也具有相似的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能，因此，PEG-PCL納米膠束在藥物的線粒體遞送過(guò)程中，比游離藥物明顯具有優(yōu)勢(shì)。隨著線粒體部位藥物的濃度增加，抗心肌細(xì)胞凋亡效果也相應(yīng)增強(qiáng)。本研究結(jié)果顯示，黃芩苷PEG-PCL納米膠束可以明顯減少caspase 3活性、ROS水平，降低促凋亡蛋白Bax表達(dá)，顯著升高抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，進(jìn)一步推測(cè)PEG-PCL納米膠束可以增加黃芩苷在細(xì)胞內(nèi)的攝取量，促使細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度增多，進(jìn)入線粒體部位的藥物量也相應(yīng)增加，從而更好地發(fā)揮抗心肌細(xì)胞凋亡作用。圖4 香豆素-6 PEG-PCL納米膠束和香豆素-6與H9c2心肌細(xì)胞共同孵育的激光共聚焦圖像


本文編號(hào)：3621328