目的:通過建立風寒濕痹證膠原誘導性關節(jié)炎（CIA）小鼠模型、大鼠模型,培養(yǎng)風寒濕痹證CIA模型大鼠膝關節(jié)滑膜組織中成纖維樣滑膜細胞（FLS）,應用近紅外熒光活體成像技術,圍繞TLR4/NF-κB信號通路,從“滑膜組織-滑膜細胞-信號通路-靶向基因”角度,多層次地整體探究風濕寧治療類風濕關節(jié)炎（RA）的藥效作用機制。方法:第一部分,不同外感致病因素對病證結(jié)合CIA模型建立的比較研究。將110只SPF級雌性Wistar大鼠隨機分為4組:空白對照組（10只）、CIA模型組（40只）、風寒濕痹證CIA模型組（30只）、風濕熱痹證CIA模型組（30只）。采用風寒濕、風濕熱外感致病因素刺激,結(jié)合牛II型膠原乳化劑誘導的方法,建立CIA模型、風寒濕痹證CIA模型、風濕熱痹證CIA模型。分別采用療效確切的驗方風濕寧(18.24g·kg^-1)與治痹經(jīng)方烏頭湯(4.9g·kg^-1)、白虎加桂枝湯(10.15g·kg^-1),對這三種RA模型加以治療。運用以方測證的反證法和比較醫(yī)學手段的正證法,觀察模型大鼠的足掌溫度、關節(jié)炎指數(shù)、關節(jié)腫脹度、血... 

【文章來源】：成都中醫(yī)藥大學四川省

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略詞表
引言
第一部分 不同外感致病因素對病證結(jié)合CIA模型建立的比較研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗藥物及試劑
            1.2.1 治痹經(jīng)方
            1.2.2 風濕寧
            1.2.3 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 RA大鼠模型的建立
        2.2 RA大鼠模型的分組及給藥
        2.3 標本采集及指標檢測
            2.3.1 大鼠一般狀態(tài)觀察
            2.3.2 大鼠關節(jié)炎指數(shù)評分
            2.3.3 大鼠關節(jié)腫脹度檢測
            2.3.4 大鼠血清RF、ACPA含量檢測
            2.3.5 大鼠踝關節(jié)組織病理學觀察
        2.4 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 各組大鼠一般狀態(tài)的觀察結(jié)果
            3.1.1 各組大鼠造模后一般狀態(tài)變化
            3.1.2 各組大鼠用藥治療后一般狀態(tài)變化
        3.2 各組大鼠實驗期間體質(zhì)量變化
        3.3 各組大鼠實驗期間足掌溫度變化
        3.4 各組大鼠實驗期間關節(jié)炎指數(shù)變化
        3.5 各組大鼠實驗期間關節(jié)腫脹度變化
        3.6 各組大鼠實驗期間血清RF、ACPA含量變化
        3.7 各組大鼠踝關節(jié)組織病理學觀察結(jié)果
    4 實驗小結(jié)
    5 討論
        5.1 治痹經(jīng)方的選擇及意義
        5.2 病證結(jié)合CIA模型的建立及評價
        5.3 風濕寧對三種CIA模型的影響
            5.3.1 風濕寧對CIA模型大鼠體質(zhì)量的影響
            5.3.2 風濕寧對CIA模型大鼠足掌溫度的影響
            5.3.3 風濕寧對CIA模型大鼠關節(jié)炎指數(shù)與關節(jié)腫脹度的影響
            5.3.4 風濕寧對CIA模型大鼠血清RF、ACPA的影響
            5.3.5 風濕寧對CIA模型大鼠踝關節(jié)組織病理學的影響
第二部分 近紅外熒光探針在風寒濕痹證CIA小鼠模型中成像的應用研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗藥物及試劑
            1.2.1 風濕寧與來氟米特
            1.2.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 風寒濕痹證CIA小鼠模型的建立及給藥
            2.1.1 小鼠熱板反應篩選
            2.1.2 動物分組
            2.1.3 模型制備
            2.1.4 給藥方法
        2.2 指標檢測
            2.2.1 小鼠一般狀態(tài)觀察
            2.2.2 小鼠足掌疼痛閾值檢測
            2.2.3 小鼠關節(jié)炎指數(shù)評分
            2.2.4 小鼠關節(jié)腫脹度檢測
            2.2.5 近紅外熒光小鼠活體成像觀察
        2.3 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 風濕寧對風寒濕痹證CIA小鼠模型一般狀態(tài)的影響
        3.2 風濕寧對風寒濕痹證CIA小鼠模型足掌疼痛閾值的影響
        3.3 風濕寧對風寒濕痹證CIA小鼠模型關節(jié)炎指數(shù)的影響
        3.4 風濕寧對風寒濕痹證CIA小鼠模型踝關節(jié)寬度的影響
        3.5 風濕寧對風寒濕痹證CIA小鼠模型近紅外熒光活體成像的影響
    4 實驗小結(jié)
    5 討論
        5.1 陽性藥物的選擇
        5.2 風濕寧對模型小鼠足掌疼痛閾值的影響
        5.3 風濕寧對模型小鼠關節(jié)炎指數(shù)與踝關節(jié)寬度的影響
        5.4 風濕寧對模型小鼠近紅外熒光活體成像的影響
第三部分 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4/NF-κB信號通路的作用機制研究
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗藥物及試劑
            1.2.1 風濕寧與來氟米特
            1.2.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 風寒濕痹證CIA大鼠模型的建立及篩選
        2.2 風寒濕痹證CIA大鼠模型的分組及給藥
        2.3 標本采集及指標檢測
            2.3.1 大鼠一般情況觀察
            2.3.2 大鼠血清RF、ACPA、IL-1β、IL-4、IL-10與TNF-α含量檢測
            2.3.3 大鼠脾臟與胸腺指數(shù)檢測
            2.3.4 大鼠膝、踝關節(jié)組織病理學觀察及評分
            2.3.5 大鼠滑膜組織中細胞凋亡檢測
            2.3.6 大鼠滑膜組織中c-IAP1、XIAP、Caspase-3與Caspase-9免疫組化檢測
            2.3.7 大鼠滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κBmRNA表達檢測
            2.3.8 大鼠滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達檢測
        2.4 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型一般狀態(tài)的影響
        3.2 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型關節(jié)炎指數(shù)的影響
        3.3 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型關節(jié)腫脹度的影響
        3.4 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型血清RF、ACPA含量的影響
        3.5 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型血清炎性細胞因子含量的影響
        3.6 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型血清抗炎細胞因子含量的影響
        3.7 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型脾臟與胸腺指數(shù)的影響
        3.8 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型膝、踝關節(jié)組織病理學及評分的影響
            3.8.1 各組大鼠膝關節(jié)組織病理學觀察及評分結(jié)果
            3.8.2 各組大鼠踝關節(jié)組織病理學觀察及評分結(jié)果
        3.9 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織細胞凋亡的影響
        3.10 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中c-IAP1、XIAP、Caspase-3與Caspase-9免疫組化表達的影響
        3.11 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κBmRNA相對表達量的影響
        3.12 風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達的影響
    4 實驗小結(jié)
    5 討論
        5.1 風濕寧的來源及方析
        5.2 風濕寧通過下調(diào)炎性細胞因子表達,上調(diào)抗炎細胞因子活性,是發(fā)揮其治療作用的機制之一
        5.3 風濕寧通過調(diào)節(jié)免疫功能,是發(fā)揮其治療作用的機制之一
        5.4 風濕寧可誘導滑膜細胞調(diào)亡,抑制滑膜細胞異常增殖,是發(fā)揮其治療作用的主要機制之一
        5.5 風濕寧可抑制TLR4/NF-κB信號通路異常活化,是發(fā)揮其治療作用的主要機制之一
第四部分 風濕寧含藥血清對風寒濕痹證CIA-FLS增殖、凋亡和TLR4/NF-κB信號通路的作用機制研究
    1 實驗材料
        1.1 滑膜組織來源
        1.2 制備含藥血清的實驗動物
        1.3 實驗藥物及試劑
            1.3.1 風濕寧與來氟米特
            1.3.2 實驗試劑
        1.4 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 風寒濕痹證CIA模型大鼠滑膜細胞體外分離培養(yǎng)
            2.1.1 CIA-FLS細胞原代培養(yǎng)
            2.1.2 CIA-FLS細胞傳代
            2.1.3 CIA-FLS細胞計數(shù)
            2.1.4 CIA-FLS細胞凍存
            2.1.5 CIA-FLS細胞復蘇
        2.2 CIA-FLS細胞免疫熒光鑒定
        2.3 含藥血清的制備
        2.4 CIA-FLS細胞分組及給藥
        2.5 CCK-8法檢測CIA-FLS細胞增殖
        2.6 TUNEL法檢測CIA-FLS細胞凋亡
        2.7 ELISA法檢測CIA-FLS細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子含量
        2.8 Real-time PCR法檢測CIA-FLS細胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κBmRNA表達
        2.9 Western Blot法檢測CIA-FLS細胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達
        2.10 統(tǒng)計學方法
    3 結(jié)果
        3.1 CIA-FLS細胞原代培養(yǎng)及形態(tài)學觀察
        3.2 CIA-FLS細胞免疫熒光鑒定
        3.3 風濕寧含藥血清對CIA-FLS細胞增殖的影響
        3.4 風濕寧含藥血清對CIA-FLS細胞凋亡的影響
        3.5 風濕寧含藥血清對CIA-FLS細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子含量的影響
        3.6 風濕寧含藥血清對CIA-FLS細胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB mRNA相對表達量的影響
        3.7 風濕寧含藥血清對CIA-FLS細胞中TLR4、MyD88、IκB-α與NF-κB蛋白表達的影響
    4 實驗小結(jié)
    5 討論
        5.1 CIA-FLS細胞的原代培養(yǎng)及鑒定
        5.2 風濕寧含藥血清通過抑制CIA-FLS細胞增殖,促進其凋亡,是發(fā)揮其治療作用的機制之一
        5.3 風濕寧含藥血清通過下調(diào)CIA-FLS細胞上清液中炎性細胞因子表達,上調(diào)抗炎細胞因子活性,是發(fā)揮其治療作用的機制之一
        5.4 風濕寧含藥血清通過抑制CIA-FLS細胞中TLR4/NF-κB信號通路異�；罨�,是發(fā)揮其治療作用的主要機制之一
結(jié)論
創(chuàng)新性與特色
問題與展望
致謝
參考文獻
綜述 TLRs/NF-κB信號通路與類風濕關節(jié)炎相關研究進展
    參考文獻
附件1：在讀期間公開發(fā)表的學術論文、專著及科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]姜黃素對類風濕關節(jié)炎破骨細胞分化中NF-κB p65和NFATc1表達的影響[J]. 商瑋,徐子涵,郭郡浩,董曉蕾,趙智明,蔡輝.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2018(04)
[2]風濕寧對風寒濕痹證CIA大鼠模型滑膜組織中TLR4/NF-κB信號通路的影響[J]. 董小君,王永輝,侯淵,張晨曦,趙樂,周然.  中國實驗方劑學雜志. 2018(10)
[3]熱原誘導的Toll樣受體信號傳導通路研究進展[J]. 王鳴人,王燦,陳鋼.  中國藥師. 2018(03)
[4]NF-κB信號與類風濕關節(jié)炎患者甲氨蝶呤耐藥的研究進展[J]. 姚血明,馬武開,黃穎,寧喬怡,唐芳,安陽.  貴陽中醫(yī)學院學報. 2017(06)
[5]新雷公藤衍生物雷藤舒對類風濕關節(jié)炎滑膜細胞基因表達的影響[J]. 劉佳,童萍,何東儀.  上海中醫(yī)藥大學學報. 2017(06)
[6]超聲導入復方三七消痛軟膏對兔膝骨性關節(jié)炎滑膜形態(tài)和軟骨細胞caspase-9、XIAP表達的影響[J]. 樊思琴,李珊,梁杰,林如輝,羅慶祿.  北京中醫(yī)藥大學學報. 2017(09)
[7]基于JAK2/STAT3信號通路探討風濕寧膠囊對寒濕痹阻型類風濕關節(jié)炎的作用機制[J]. 王永輝,張曉園,李艷彥,周然.  中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志. 2017(07)
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[9]黃芪桂枝五物湯對CIA模型大鼠關節(jié)滑膜細胞凋亡的影響[J]. 劉佳維,王永輝,李艷彥,張永剛,趙樂,張若楠.  中國實驗方劑學雜志. 2017(14)
[10]黃芩苷對人成纖維細胞樣滑膜細胞(類風濕關節(jié)炎)的影響研究[J]. 王宏志,葛存興,王廣志,趙晶,姜楠.  齊齊哈爾醫(yī)學院學報. 2017(02)

博士論文
[1]益母草堿對類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞活化、遷移和侵襲的調(diào)控及其機制研究[D]. 李楠.廣州中醫(yī)藥大學 2017
[2]新痹痛靈對CIA大鼠及RSC-364細胞中HMGB1/NF-κB信號通路的影響研究[D]. 景嶸月.南京中醫(yī)藥大學 2015
[3]風濕寧膠囊對膠原誘導性關節(jié)炎大鼠的治療作用及機制研究[D]. 馬艷苗.湖北中醫(yī)藥大學 2013
[4]細胞凋亡抑制蛋白2在胰腺癌中的表達及其與胰腺癌吉西他濱化療的關系[D]. 張帆.福建醫(yī)科大學 2009

碩士論文
[1]烏龍丹對類風濕關節(jié)炎患者NF-κB信號通路相關因子的影響[D]. 陳鑫.黑龍江中醫(yī)藥大學 2017
[2]壯藥龍鉆通痹方對RA模型大鼠IL-6、TLR4及MYD88的調(diào)節(jié)作用機制研究[D]. 陳筱悅.廣西中醫(yī)藥大學 2017
[3]祛風清熱、活血通絡法對人滑膜細胞增殖和凋亡的影響[D]. 周義輝.湖北民族學院 2014



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