本實(shí)驗(yàn)以桑根皮素為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)20種癌細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)桑根皮素對(duì)大多數(shù)癌細(xì)胞有生長(zhǎng)抑制作用,因此作者深入研究了桑根皮素對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453、人肺癌細(xì)胞H1299和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的增殖抑制作用,抗侵襲、浸潤(rùn)作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,并初步探討其作用機(jī)制,為蠶桑業(yè)廢物資源循環(huán)利用、蠶桑業(yè)可持續(xù)發(fā)展以及中藥抗腫瘤作用奠定了基礎(chǔ),為桑枝皮中生物活性物質(zhì)——一桑根皮素的藥用研發(fā)以及臨床應(yīng)用提供了有用的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本文的研究主要涉及以下內(nèi)容:(1)本文以桑根皮素為藥物,對(duì)20種癌細(xì)胞進(jìn)行了藥物篩選實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組為對(duì)照組(0.5%DMSO)和不同濃度桑根皮素處理組(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,桑根皮素對(duì)20種癌細(xì)胞均有抑制作用,其中高濃度處理組(20μg/ml)的腫瘤抑制率均可達(dá)到84%以上,均呈現(xiàn)濃度依賴。IC50結(jié)果顯示,20種癌細(xì)胞的IC50平均值為6.211μg/ml,其中有80%的細(xì)胞IC50值小于等于6.45μg/ml。由此可以得出桑根皮素對(duì)大多數(shù)癌細(xì)胞有很好的抑制作用。(2)本文針對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453、人肺癌細(xì)胞H1299和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用不同濃度桑根皮素溶液(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)處理以上三種細(xì)胞,處理時(shí)間分別為24h,48h,72h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,桑根皮素對(duì)以上三種細(xì)胞均有生長(zhǎng)抑制作用,并呈現(xiàn)時(shí)間—濃度依賴性,其中20μg/ml桑根皮素溶液處理以上細(xì)胞48h后,腫瘤抑制率分別高達(dá)94.02%、97.9%和 91.9%。(3)不同濃度桑根皮素溶液(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)處理乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116,Western blotting結(jié)果顯示,桑根皮素可上調(diào)上皮標(biāo)志物E-鈣粘蛋白(E-cadherin),下調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N-鈣粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin),并且均呈現(xiàn)劑量效應(yīng)。說(shuō)明桑根皮素可逆轉(zhuǎn)EMT,抑制這三種腫瘤的遷移、侵襲和浸潤(rùn)。(4)不同濃度桑根皮素溶液(5μg/ml、1Oμg/ml、20μg/ml)作用于乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453、人肺癌細(xì)胞H1299和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116,48h后,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)胞均發(fā)生凋亡,并呈現(xiàn)劑量依賴,其中MDA-MB-453細(xì)胞在高濃度(20μg/ml)桑根皮素溶液處理后,凋亡率高達(dá)77.73%,差異極顯著(P0.01)。Western blotting結(jié)果顯示,桑根皮素可上調(diào)Bax和cleaved caspase-3,下調(diào)Bcl-2和caspase-3,說(shuō)明桑根皮素可誘導(dǎo)乳腺癌、人肺癌和結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。(5)不同濃度桑根皮素溶液(2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)作用于乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),桑根皮素濃度為10μμg/ml時(shí),MDA-MB-453細(xì)胞被阻滯于G2期,HCT116細(xì)胞被阻滯于S期。因此說(shuō)明桑根皮素可擾亂乳腺癌和結(jié)腸癌細(xì)胞的周期。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

．Ｆｉｇ邋３．邋ＩＣ５０邋ｖａｌｕｅ邋ｏｆ邋Ｍｏｒｕｓｉｎ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｏｎ邋２０邋ｃａｎｃｅｒ邋ｃｅｌｌｓ逡逑桑根皮素處理２０種癌細(xì)胞４８ｈ后，由圖２ＭＴＴ、ＣＣＫ８結(jié)果可以看出，素對(duì)所測(cè)２０種癌細(xì)胞均有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，高濃度組的腫瘤抑制率８４％以上，并呈現(xiàn)濃度依賴性。ＩＣ５Ｃ結(jié)果顯示，２０種癌細(xì)胞的ＩＣ５0平１／ｍｌ0逡逑

桑根皮素對(duì)ＭＤＡ－ＭＢ－４５３、ＨＣＴ１１６和Ｈ１２９９癌細(xì)胞的抑制瘤抑制率已達(dá)到８３．５７％，４８小時(shí)時(shí)腫瘤抑制率達(dá)到９４．０２°／。；在桑根皮素濃度為２０ｐｇ／ｍｌ，處理時(shí)間為１２ｈ時(shí)，細(xì)胞抑制率抑制生長(zhǎng)作用。逡逑桑根皮素對(duì)癌細(xì)胞凋亡的影響逡逑？邐．ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ邋ＰＲＯＦＩＬＥ邐ＡＰＯＰＴＯＳＩＳ邋ＰＲＯＦＩＬＥ逡逑＊＊＇

ＭＤＡ－ＭＢ－４５３細(xì)胞經(jīng)ＡｎｎｅｘｉｎＶ／７－ＡＡＤ染色后流式細(xì)抱檢測(cè)細(xì)胞凋亡；（Ｂ）－４５３細(xì)胞４８ｈ后的凋亡率。（＊表示與正常對(duì)照組相比０．０１＜ｐ＜０．０５，差異顯對(duì)照組相比ｐ＜０．０１，差異極顯著）逡逑ＭＤＡ－ＭＢ－４５３ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ｖ／７－ＡＡＤ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ａｎｄ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｗａｓ；邋（Ｂ）邋Ｔｈｅ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ＭＤＡ－ＭＢ－４５３邋ｃｅｌｌｓ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（＊０．０１邋＜邋ｐ邋＜邋０．０５．邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ；邋＊＊邋ｐ邋＜邋０．０１．邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｃｏｎ３７逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2834041