馬齒莧(Portulaca oleracea L)又名馬莧菜,是藥食兩用植物,全草可供藥用,野生生長,遍布全國各地。馬齒莧含有多種有效成分,如多糖、酮類、氨基酸等。多糖作為其主要成分之一具有抗炎、抗腫瘤、降血糖等多種活性。目前已有的研究表明,大多集中于水溶液提取馬齒莧多糖的探討,而對其堿溶液提取的馬齒莧多糖的尚未見報(bào)道。本論文在分別對水溶液和堿溶液提取的馬齒莧多糖進(jìn)行分離純化的基礎(chǔ)上,建立了馬齒莧多糖分離純化的方法;并對其中的部分多糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步的分析,以期為進(jìn)一步研究該多糖的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系奠定基礎(chǔ)。本論文以干燥的馬齒莧為實(shí)驗(yàn)原料,首先采用熱水煮提法得到水提馬齒莧多糖POPW,得率為5.0%。經(jīng)測定POPW的多糖含量為40.6%,蛋白質(zhì)含量為5.5%。接下來以水提馬齒莧的殘?jiān)鼮閷?shí)驗(yàn)原料,采用堿溶液提取法得到堿提馬齒莧多糖POPA,得率是20.0%。POPA的多糖含量為48.7%,蛋白含量為21.0%。由此可見,馬齒莧中POPA的含量高于POPW。POPW和POPA經(jīng)過反復(fù)凍融、分級醇沉后,采用DEAE-Cellulose離子交換層析和Sepharose CL-6B凝膠層析進(jìn)一步分離純化得到不同多糖組分。分離純化結(jié)果表明,POPW分離出2種中性糖POPW50-N、POPW75-N;3種酸性糖POPW30-A、POPW50-A、POPW75-A,其中組分POPW30-A-b(30%乙醇沉淀后的酸性雜多糖經(jīng)凝膠層析后獲得)是POPW的主要成分,得率是18.6%,分子量為41.2 KDa,其糖醛酸含量大約90%。POPA經(jīng)上述分離純化后,得到不同分子量大小的2種中性糖POPA-N-a(52.6 KDa)、POPA-N-b(24.8 KDa);主要的酸性糖有5種,即POPA-A-1a(185.2 KDa)、POPA-A-1b(68.7 KDa);POPA-A-2a(134.3 KDa)、POPA-A-2b(49.6 KDa);POPA-A-3b(155.5 KDa),其中POPA-A-1a、POPA-A-1b為主要組分。已有的研究結(jié)果表明,POPW30-A-b具有良好的佐劑效應(yīng),因此,本論文對POPW30-A-b多糖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析;同時(shí)也初步解析了與POPW30-A-b分子量相似的中性多糖POPA-N-a的結(jié)構(gòu),為進(jìn)一步探討POPW30-A-b和POPA-N-a的構(gòu)效關(guān)系奠定基礎(chǔ)。采用高效液相色譜、甲基化分析、紅外光譜以及核磁共振分析對POPW30-A-b和POPA-N-a進(jìn)行了初步的結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果表明POPW30-A-b是α-1,4-GalAp聚糖,為未酯化的果膠多糖HG結(jié)構(gòu)域;POPA-N-a是以1,4-Gal為主鏈的阿拉伯半乳聚糖,可能的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)在Gal的O-6上有分支,且含有Gal和Ara末端。
【學(xué)位單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

圖 1-1 高碘酸氧化原理圖[57]2. 酶解法酶解法是研究植物多糖結(jié)構(gòu)的一種常用手段，具有專一性、高效性的優(yōu)點(diǎn)，可特異性水解特定的糖苷鍵，且可得到寡糖或不同分子量大小的多糖片段，常用于寡糖的精細(xì)結(jié)構(gòu)分析。主要的酶有淀粉酶、果膠酶、與纖維素酶，果膠酶中包括外切多聚半乳糖醛酸酶和內(nèi)切多聚半乳糖醛酸酶、PME 等[58]，可特異性水解半乳糖醛酸位點(diǎn)。滕賀[59]利用半乳糖醛酸內(nèi)切酶（Endo-PG）水解人參果膠多糖，將 HG 結(jié)構(gòu)域酶解去除后成功制得 RG-I 結(jié)構(gòu)（I 型聚鼠李半乳糖醛酸）。3.儀器分析法（1）紫外光譜（UV）和紅外光譜（FI-IR）紫外光譜一般用于多糖的純度鑒定，可鑒定多糖中是否含有蛋白質(zhì)和核酸，紫外吸收分別在 280nm 和 260nm 處。紅外光譜是利用連續(xù)波長的紅外光源照射樣品，樣品中的分子會(huì)吸收某些波長的光，沒有被吸收的光會(huì)到達(dá)檢測器上而得到單光束光譜。在被吸收的光的波長或波束位置會(huì)出現(xiàn)吸收峰。與分子振動(dòng)直接相關(guān)，包括彎曲振動(dòng)、對稱伸縮振動(dòng)、反對稱伸縮振動(dòng)，根據(jù)不同的分子振動(dòng)頻

提取的馬齒莧多糖 POPW 和堿溶液提取的多糖樣品 PO OD 值的平均值帶入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，經(jīng)計(jì)算得出5%，POPA 多糖含量是 48.7%。PW 和 POPA 蛋白質(zhì)含量的測定白質(zhì)濃度 μg/μL 作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)，OD 值（595 n，繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2-4 所示：其回歸方程為 yR2 = 0.9981。圖 2-3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

溶液提取的馬齒莧多糖 POPW 和堿溶液提取的多糖樣品 P的 OD 值的平均值帶入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，經(jīng)計(jì)算得出 40.5%，POPA 多糖含量是 48.7%。 POPW 和 POPA 蛋白質(zhì)含量的測定含蛋白質(zhì)濃度 μg/μL 作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)，OD 值（595 n坐標(biāo)，繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2-4 所示：其回歸方程為 26，R2 = 0.9981。圖 2-3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

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本文編號：2831929