目的堿蓬(Suaeda salsa(Bunge))是一種一年生草本植物,其含有多種具有生物功能的大分子。本實(shí)驗(yàn)旨在優(yōu)化堿蓬多糖(Suaeda salsa polysaccharide)的純化工藝,建立其分離純化方法,對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,并驗(yàn)證堿蓬多糖可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。方法以堿蓬為原料,采用水提醇沉法提取粗多糖。經(jīng)Sevag法去除蛋白質(zhì)以及活性炭吸附脫色后,通過DEAE-52纖維素柱和Sephadex G-75凝膠柱進(jìn)一步分離純化堿蓬粗多糖,得均一組分SSP2-2。采用高效凝膠滲透色譜法(HPGPC,High-performance gel permeation chromatography)、PMP-柱前衍生高效液相色譜法(PMP-HPLC,PMP precolumn derivatization HPLC)、紅外吸收分光光度法(IR,Infrared absorption spectrophotometry)、核磁共振波譜法(NMR,Nuclear Magnetic Resonance)對(duì)SSP2-2進(jìn)行純度驗(yàn)證及結(jié)構(gòu)表征。通過MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)檢測(cè)法、Hoechst33342染色法、流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry)、線粒體膜電位檢測(cè)法(MMP,Mitochondrial membrane potential)及蛋白質(zhì)分子印跡法(Western blot)對(duì)SSP2-2誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡進(jìn)行研究。結(jié)果SSP2-2重均分子量(M_w,Weight-average Molecular Weight)為53.8 kDa;PMP-HPLC顯示SSP2-2主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖六種單糖組成,摩爾比為0.6:8.0:1.0:83.6:5.0:7.2;IR表明SSP2-2中含有糖醛酸、β-糖苷鍵等特征吸收。NMR表明SSP2-2為吡喃糖,并存在C-1連接。MTT提示SSP2-2對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7具有顯著的抑制作用;Hoechst 33342染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察到SSP2-2引起MCF-7的細(xì)胞核出現(xiàn)皺縮、碎裂等特征;流式細(xì)胞儀結(jié)合Annexin V-FITC/PI染色法顯示SSP2-2可以誘導(dǎo)MCF-7凋亡;線粒體膜電位檢測(cè)顯示SSP2-2導(dǎo)致MCF-7細(xì)胞線粒體跨膜電位降低,Western blot結(jié)果顯示Bcl-2的蛋白表達(dá)降低,Bax、cytochrome C、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)增加,表明SSP2-2通過線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論本研究從堿蓬中提取分離純化得到一種均一多糖組分SSP2-2。SSP2-2的分子量約為53.8 kDa,主要由半乳糖醛酸組成,SSP2-2通過線粒體途徑誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284.2;R285.5
【部分圖文】：

圖 1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線素實(shí)驗(yàn)用量對(duì)脫色效果的影響變情況下，設(shè)定活性炭用量為 1、2、2.5、3、3.5、色率呈先增加后降低的趨勢(shì)，當(dāng)活性炭加入量為 3性炭加入量超過 3%時(shí)，多糖脫色率明顯下降，損失活性炭加入量過多而導(dǎo)致部分多糖被吸附，使脫碳不因此試驗(yàn)選擇活性炭的添加量為 3%。651821

[32]。如圖6-8所示，各圖響應(yīng)曲面坡度較陡峭，說明AD、BC和CD之間交互作用較強(qiáng)。通過圖6可以看出，活性炭用量上升的幅度較pH稍陡峭，說明活性炭用量對(duì)多糖脫色率的影響較pH稍大。由圖7可知，等高線圖接近圓形，說明它們的交互作用并不明顯。多糖脫色率隨脫色溫度和脫色時(shí)間的增加，先上升后緩慢下降，脫色溫度的上升幅度明顯比脫色時(shí)間的上升幅度陡峭，說明脫色溫度對(duì)多糖脫色率的影響較大。圖8可以看出脫色時(shí)間和pH對(duì)脫色率的影響均明顯，鑒于曲面比較陡峭，等高線圖是橢圓形，所以證明它們的交互作用也是明顯的。固定pH不變時(shí)

如圖6-8所示，各圖響應(yīng)曲面坡度較陡峭，說明AD、BC和CD之間交互作用較強(qiáng)。通過圖6可以看出，活性炭用量上升的幅度較pH稍陡峭，說明活性炭用量對(duì)多糖脫色率的影響較pH稍大。由圖7可知，等高線圖接近圓形，說明它們的交互作用并不明顯。多糖脫色率隨脫色溫度和脫色時(shí)間的增加，先上升后緩慢下降，脫色溫度的上升幅度明顯比脫色時(shí)間的上升幅度陡峭，說明脫色溫度對(duì)多糖脫色率的影響較大。圖8可以看出脫色時(shí)間和pH對(duì)脫色率的影響均明顯，鑒于曲面比較陡峭，等高線圖是橢圓形，所以證明它們的交互作用也是明顯的。固定pH不變時(shí)，多糖脫色率隨脫色時(shí)間的增加呈先上升后平緩下降的趨勢(shì)。綜合圖8分析可知，脫色時(shí)間上升的幅度較pH稍陡峭，說明脫色時(shí)間對(duì)多糖脫色率的影響較大。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2830542