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陽(yáng)和湯影響木瓜蛋白酶誘導(dǎo)的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型滑膜炎癥的實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間:2020-09-27 19:08
   目的探討陽(yáng)和湯對(duì)木瓜蛋白酶誘導(dǎo)的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型滑膜組織炎癥因子的影響,以進(jìn)一步明確陽(yáng)和湯治療骨性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。方法將42只4-6月齡健康新西蘭兔按照隨機(jī)數(shù)字表法,隨機(jī)分成空白對(duì)照組(9只)和模型組(33只)。空白對(duì)照組不造模,其余動(dòng)物造模,采用關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射4%木瓜蛋白酶溶液制備膝骨關(guān)節(jié)炎模型。2周后從空白對(duì)照組和模型組各自隨機(jī)選取3只進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的新西蘭大白兔隨機(jī)分為模型組,陽(yáng)和湯低劑量組,陽(yáng)和湯中劑量組,陽(yáng)和湯高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組,每組各6只。造模成功后開始干預(yù)治療,分別給予陽(yáng)和湯組低、中、高劑量組的每只兔分別給予3 g/kg·d、6 g/kg·d、12 g/kg·d陽(yáng)和湯灌胃,陽(yáng)性對(duì)照組的每只兔給予24mg/kg·d西樂葆灌胃。空白對(duì)照組與模型組分別給予等量生理鹽水灌胃。每日一次,連續(xù)灌胃治療2周。治療2周后,觀察兔膝關(guān)節(jié)腫脹度,測(cè)量膝關(guān)節(jié)周徑及局部皮溫,麻醉后取材,膝關(guān)節(jié)大體觀察,取兔膝關(guān)節(jié)滑膜,常規(guī)固定包埋及切片,對(duì)切片進(jìn)行蘇木素-伊紅染色。Lequesne評(píng)分評(píng)估動(dòng)物行為學(xué),酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清、關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、NO含量,光鏡觀察各組滑膜組織病理;免疫組化與圖像定量分析IL-1β、TNF-α、COX-2、iNOS蛋白表達(dá)。結(jié)果1.膝關(guān)節(jié)皮溫、關(guān)節(jié)周徑結(jié)果:與空白組比較,模型組膝關(guān)節(jié)皮溫升高(P0.05),關(guān)節(jié)周徑明顯增大(P0.05);與模型組比較,各治療組膝關(guān)節(jié)皮溫降低(P0.05),關(guān)節(jié)周徑減小(P0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組比較,陽(yáng)和湯中劑量組局部皮溫較低(P0.05),關(guān)節(jié)周徑較小(P0.05)。2.Lequesne評(píng)分結(jié)果:造模結(jié)束后,與空白對(duì)照組比較,模型組評(píng)分升高(P0.05);與模型組比較,陽(yáng)和湯中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組Lequesne評(píng)分均降低(P0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組比較,陽(yáng)和湯評(píng)分較低,但二者無明顯差異(P0.05)。3.ELISA檢測(cè)結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,模型組血清、關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、NO含量增加(P0.05);與模型組比較,陽(yáng)和湯中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組血清、關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、NO含量降低(P0.05)。4.HE染色結(jié)果:與空白組相比,模型組可見內(nèi)層滑膜細(xì)胞增生顯著,細(xì)胞排列紊亂,可見較多淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和少量的中性粒細(xì)胞,血管增生,充血,纖維組織增生;治療后與模型組比較,各治療組滑膜增生層數(shù)、淋巴細(xì)胞中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)以及血管增生情況有所改善,其中,陽(yáng)和湯中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組增生明顯減少,炎性細(xì)胞減少。5.免疫組化結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,模型組滑膜IL-1β、TNF-α、COX-2、iNOS免疫組化表達(dá)增加,IOD值升高(P0.05);與模型組比較,陽(yáng)和湯中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組滑膜IL-1β、TNF-α、COX-2、iNOS免疫組化表達(dá)減少,IOD值降低(P0.05)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)陽(yáng)和湯方能減輕兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)腫脹,皮溫升高等癥狀,改善兔膝關(guān)節(jié)功能,并通過抑制COX-2炎癥途徑和iNOS炎癥途徑,減少IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、iNOS的表達(dá),減輕兔膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜炎癥狀,延緩膝骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。
【學(xué)位單位】:福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:R285.5
【文章目錄】:
縮略詞表
中文摘要
Abstract
引言
實(shí)驗(yàn)材料
    1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)主要儀器及耗材
    3 實(shí)驗(yàn)主要試劑
    4 實(shí)驗(yàn)藥物及配制
實(shí)驗(yàn)方法
    1 骨關(guān)節(jié)炎模型的建立及模型鑒定
    2 藥物干預(yù)
    3 一般情況觀察與局部皮溫、關(guān)節(jié)周徑的測(cè)量
    4 動(dòng)物行為學(xué)評(píng)分
    5 取材
    6 ELISA檢測(cè)關(guān)節(jié)液、血清中IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、NO濃度
    7 滑膜組織形態(tài)學(xué)觀察
    8 滑膜組織免疫組化檢測(cè)IL-1β、TNF-α、COX-2、i NOS蛋白表達(dá)
    9 統(tǒng)計(jì)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 動(dòng)物基本情況
    2 各組膝關(guān)節(jié)皮溫、關(guān)節(jié)周徑及Lequesne評(píng)分
    3 各組關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、NO含量
    4 各組血清中IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE2、NO含量
    5 滑膜組織形態(tài)學(xué)觀察
    6 免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組滑膜IL-1β、TNF-α、COX-2、i NOS表達(dá)及IOD值比較
討論
    1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎的認(rèn)識(shí)
    2 中醫(yī)學(xué)對(duì)本病的認(rèn)識(shí)
    3 陽(yáng)和湯治療KOA的理論依據(jù)
    4 膝骨關(guān)節(jié)炎模型的建立與評(píng)價(jià)
    5 指標(biāo)的選擇
    6 陽(yáng)和湯對(duì)KOA動(dòng)物模型作用機(jī)制探討
結(jié)論
不足與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷

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