胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like Peptide-1,GLP-1)主要由結(jié)腸和回腸的L細(xì)胞分泌,具有刺激胰島素分泌,刺激胰島?細(xì)胞增殖等作用,臨床上用于二型糖尿病的治療,其類似物作為治療藥物已上市,但其價(jià)格昂貴,用藥不便。因此尋找能顯著增強(qiáng)GLP-1的小分子調(diào)節(jié)劑,具有潛在的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。本研究利用前期建立的GLP1R/U2OS細(xì)胞系為模型,使用高內(nèi)涵檢測(cè)設(shè)備,建立了特異性高、快速、靈敏和可視化的體外活性檢測(cè)方法,對(duì)云南省藥物研究所提供的三七、七葉蓮、八角蓮和重樓等共40余種中藥的粗提取物和單體化合物進(jìn)行了活性篩查。首先,對(duì)165個(gè)不同的樣品進(jìn)行了篩查,包括124個(gè)粗提物E1~E124和41個(gè)單體化合物C1~C41。經(jīng)高內(nèi)涵細(xì)胞成像系統(tǒng)的初步篩選,共找到GLP-1調(diào)節(jié)劑共5個(gè),分別為提取物E95和E99,單體C1、C18和C23;初篩樣品除E99的R~2為66%外,其余可達(dá)94%以上,證明結(jié)果可靠,每個(gè)樣品的最低起效濃度分別為5.7μg/ml,24μg/ml,11μg/ml,3.9μg/ml和39μg/ml。篩選到抑制劑26個(gè),其中提取物18個(gè),單體6個(gè),平均抑制率在9%~57%,其中E6平均抑制率可達(dá)57%。其次,對(duì)調(diào)節(jié)劑進(jìn)行了復(fù)篩,結(jié)果表明調(diào)節(jié)劑E95,E99,C1,C18和C23自身不具有細(xì)胞激動(dòng)活性,但有明顯的起效濃度。復(fù)篩證明E95、E99和C23為調(diào)節(jié)劑,最低起效濃度分別為13.03μg/ml、49.37μg/ml和39.06μg/ml;最適濃度分別為22.8μg/ml,197.5μg/ml和39.06μg/ml時(shí),可提高激動(dòng)劑活性達(dá)43.4%,42.53%和31.30%。研究過程中發(fā)現(xiàn)提取物相比于單體,具有更好的調(diào)節(jié)效果�？傊�,本研究從165個(gè)天然產(chǎn)物經(jīng)本研究建立的細(xì)胞篩選模型篩選了5個(gè)GLP-1的調(diào)節(jié)劑,最終確認(rèn)三個(gè)能夠顯著增加GLP-1活性,為今后進(jìn)一步研究和開發(fā)新的糖尿病藥物提供了實(shí)踐基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

GLP-1R的七跨膜結(jié)構(gòu)

GLP-1R信號(hào)通路Figure2.ThesignalpathwayofGLP-1R[1]

圖 3. 胰高血糖素原基因Figure 3. Glucagon proglycemic gene內(nèi)源性的 GLP-1 在體內(nèi)有四種存在形式[23]，如圖 4 所示，GLP-1（1-37）和GLP-1(7-37) 在 C 末端具有延伸的甘氨酸殘基， GLP-1 （ 1-36 ） NH2和

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2828243