大腸癌(Colorectal cancer,CRC)也叫結(jié)直腸癌,是一類(lèi)由多因素引起的消化道惡性腫瘤。大多數(shù)結(jié)腸癌可以通過(guò)檢測(cè)和去除癌前結(jié)腸腺瘤來(lái)預(yù)防。同樣,通過(guò)在早期階段檢測(cè)結(jié)腸癌,可以通過(guò)手術(shù)切除治愈疾病,從而預(yù)測(cè)可觀的益處。目前,醫(yī)治大腸癌的方法主要是化療。但是,在診治大腸癌時(shí),部分化療藥品會(huì)給人體帶來(lái)不同程度的毒副作用,它們?cè)跉⑺腊┘?xì)胞的同時(shí),也有可能殺死正常細(xì)胞。除此之外,由于它的毒副作用會(huì)引起另外一類(lèi)疾病。研究表明,植物來(lái)源的抗腫瘤活性蛋白作用機(jī)制獨(dú)特,抵抗癌癥的效果明顯,是一種值得研究的抗腫瘤藥物。栝樓(Trichosanthes kirilowii)是葫蘆科的一種藤本植物。栝樓中含有多種生物活性的成分。我們課題組之前已從栝樓的果實(shí)中發(fā)現(xiàn)一種抗腫瘤活性蛋白TKP,實(shí)驗(yàn)研究表明,它可以顯著的誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞的凋亡,說(shuō)明它具有良好的抗腫瘤潛能。本文擬研究TKP對(duì)大腸癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和遷移的影響及機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾部分:第一部分:栝樓抗腫瘤活性蛋白TKP對(duì)大腸癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。分別采用終濃度為0、0.1、0.25和0.5μg/mL的TKP處理大腸癌細(xì)胞DLD1和HCT11624 h后,首先觀察細(xì)胞形狀的變化;采用qRT-RCR檢測(cè)細(xì)胞中EMT關(guān)鍵蛋白的表達(dá);通過(guò)相關(guān)試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞與基質(zhì)間的粘附能力;再通過(guò)MTT方法檢測(cè)TKP對(duì)細(xì)胞存活的影響。形態(tài)觀察結(jié)果表明,TKP的處理可以改變細(xì)胞的形態(tài),對(duì)照組細(xì)胞大多長(zhǎng)梭形,具有多個(gè)觸角,呈現(xiàn)出間質(zhì)細(xì)胞的特點(diǎn)。經(jīng)TKP處理以后,細(xì)胞的觸角減少,形態(tài)呈圓形,呈現(xiàn)出上皮細(xì)胞的特點(diǎn)。TKP處理大腸癌細(xì)胞24 h后,隨著TKP濃度的增加,細(xì)胞內(nèi)鈣黏著蛋白E-cadherin表達(dá)上調(diào),N-cadherin和波形蛋白Vimentin表達(dá)下調(diào)。粘附實(shí)驗(yàn)表明,TKP的處理導(dǎo)致了細(xì)胞與基質(zhì)間的粘附能力降低。MTT結(jié)果表明這些濃度TKP的處理對(duì)細(xì)胞存活沒(méi)有明顯影響。因此,這些結(jié)果表明TKP處理抑制大腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。第二部分:TKP通過(guò)PKM2調(diào)節(jié)STAT3/Snail1信號(hào)通路從而抑制大腸癌細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。分別采用終濃度為0、0.1、0.25和0.5μg/mL的TKP處理大腸癌細(xì)胞DLD1和HCT116 24 h后,采用western檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)STAT3和p-STAT3的蛋白水平。結(jié)果表明TKP處理減少大腸癌細(xì)胞中STAT3和p-STAT3的蛋白水平,同時(shí)核內(nèi)的p-STAT3水平和Snail1 mRNA表達(dá)水平也降低。這些結(jié)果表明TKP處理導(dǎo)致STAT3/Snail1信號(hào)通路被抑制。此外,TKP處理降低PKM2的表達(dá)和其核轉(zhuǎn)位。為了進(jìn)一步研究PKM2在STAT3/Sanil1信號(hào)通路介導(dǎo)EMT抑制過(guò)程中的作用,利用轉(zhuǎn)染技術(shù)過(guò)表達(dá)PKM2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過(guò)表達(dá)PKM2后逆轉(zhuǎn)了TKP誘導(dǎo)的p-STAT3下調(diào),并且TKP抑制的細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化被明顯逆轉(zhuǎn)。以上結(jié)果表明TKP能通過(guò)調(diào)控PKM2調(diào)節(jié)STAT3/Sanil1信號(hào)通路從而抑制大腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。第三部分:TKP通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)抑制大腸癌細(xì)胞的遷移。分別采用終濃度為0、0.1、0.25和0.5μg/mL的TKP處理大腸癌細(xì)胞DLD1和HCT116 24 h后,通過(guò)傷口愈合實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的遷移情況,結(jié)果表明,大腸癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)TKP處理,其遷移能力下降。Western印跡結(jié)果表明細(xì)胞內(nèi)的β-catenin和p-GSK3β蛋白表達(dá)水平下調(diào),而且與細(xì)胞遷移相關(guān)的基因MMP7和MMP9的mRNA表達(dá)水平也下降。在加入Wnt通路的激活劑LiCl后,由TKP處理誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移下降得到逆轉(zhuǎn),此外,細(xì)胞內(nèi)β-catenin和p-GSK3β蛋白水平也得到逆轉(zhuǎn)�？傊�,以上結(jié)果表明TKP通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制了大腸癌細(xì)胞的遷移。綜上所述,TKP通過(guò)調(diào)控PKM2抑制STAT3/Snail1信號(hào)通路,從而改變EMT關(guān)鍵因子E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表達(dá),最終抑制大腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。此外,TKP能通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin通路抑制大腸癌細(xì)胞遷移。
【學(xué)位單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R285
【部分圖文】：

圖 1.1 細(xì)胞 EMT 過(guò)程 EMT 的分子基礎(chǔ)EMT 是一個(gè)動(dòng)態(tài)的細(xì)胞行為，與多種生長(zhǎng)因子、蛋白質(zhì)分子、轉(zhuǎn)錄因子以調(diào)控的途徑密切相關(guān)[18,19]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β ( transforminggrowth factor-β，TGF-β) 是調(diào)節(jié) EMT 進(jìn)程的

栝樓果實(shí)抗腫瘤活性蛋白TKP的純化

圖 2.2 TKP 處理改變?nèi)四c癌細(xì)胞 DLD1 和 HCT116 的形態(tài)變化KP 處理抑制人腸癌細(xì)胞 DLD1 和 HCT116 的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化為了檢測(cè) TKP 處理對(duì) DLD1 和 HCT116 細(xì)胞 EMT 的影響，采用終濃度25和0.5 μg/mL的TKP處理細(xì)胞24 h后，分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)E-cadherin、N-c

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 吳麗霞;劉麗江;;Snail的結(jié)構(gòu)及功能與腫瘤生長(zhǎng)侵襲的研究進(jìn)展[J];江漢大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年01期

2 詹成;時(shí)雨;馬軍;王琳;王群;;丙酮酸激酶M2型(PKM2)入核機(jī)制和核內(nèi)作用的研究進(jìn)展[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

3 張華東;黃勇;李宏偉;熊正文;;上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年31期

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本文編號(hào)：2814831