目的:制備龍血竭羥丙基-β-環(huán)糊精包合物(HP-β-CD)溫敏凝膠,并對(duì)其進(jìn)行體外評(píng)價(jià)建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案,考察其對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠宮頸柱狀上皮異位模型的影響。方法:(1)采用HPLC法測(cè)定龍血竭藥材、龍血竭HP-β-CD、龍血竭HP-β-CD溫敏凝膠中龍血素A、B的含量。(2)采用水溶液攪拌法制備包合物,以包合率和包合物收率為評(píng)價(jià)指標(biāo),結(jié)合正交試驗(yàn)法,以包合時(shí)間、包合溫度及主客分子質(zhì)量比為影響因素,優(yōu)選龍血竭HP-β-CD的制備工藝,通過(guò)紫外掃描(UV)、差示掃描量熱法(DSC)、薄層色譜法(TLC)以及水溶性對(duì)包合物進(jìn)行鑒定和評(píng)價(jià)。(3)采用冷溶法制備龍血竭HP-β-CD包合物溫敏凝膠,以試管倒置法測(cè)定膠凝溫度及膠凝時(shí)間,以膠凝溫度和膠凝時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選基質(zhì)種類及用量,優(yōu)選龍血竭HP-β-CD溫敏凝膠的制備工藝,并進(jìn)行小試工藝的驗(yàn)證。(4)采用TLC法對(duì)龍血竭HP-β-CD溫敏凝膠中的龍血竭進(jìn)行鑒別,采用HPLC法測(cè)定其中龍血素A、B的量,并對(duì)其膠凝溫度、膠凝時(shí)間、粘度、pH值、密度、體外釋放度進(jìn)行考察。(5)以Eckstein刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為指標(biāo),進(jìn)行龍血竭HP-β-CD包合物溫敏凝膠對(duì)大鼠陰道刺激性的考察;采用陰道灌洗法對(duì)龍血竭HP-β-CD包合物溫敏凝膠在大鼠陰道內(nèi)滯留時(shí)間進(jìn)行考察;對(duì)宮頸柱狀上皮異位大鼠動(dòng)物模型的建立方法進(jìn)行考察;以陰道外觀、陰道病理形態(tài)學(xué)、子宮組織切片圖和子宮解剖圖為綜合指標(biāo),考察龍血竭HP-β-CD包合物溫敏凝膠對(duì)宮頸柱狀上皮異位大鼠動(dòng)物模型的影響。結(jié)果:(1)龍血素A、B在275nm處均有最大吸收;線性關(guān)系考察中,龍血素A、B的峰面積均與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系,其線性范圍分別為16.5~198.0μg/ml、15.0~180.0μg/ml,回歸方程分別為y_a=18.335x-13.171(r=0.99915)、y_b=15.662x-9.1581(r=0.99915),三種供試品龍血素A、B的回收率均合格(龍血竭藥材為99.2%,99.0%;龍血竭HP-β-CD為100.9%,100.2%;龍血竭HP-β-CD溫敏凝膠為100.7%,101.9%)。(2)龍血竭HP-β-CD包合物制備的最佳條件:包合時(shí)間2h,包合溫度40℃,龍血竭與HP-β-CD質(zhì)量比為1:10,紫外掃描、差示掃描量熱法的結(jié)果均得出龍血竭與HP-β-CD形成了包合物,且水溶性顯著高于龍血竭藥材的水溶性。(3)龍血竭HP-β-CD溫敏凝膠最佳成型條件:32%P407、4%P188和0.2%HPMC加適量水,攪勻,于4℃條件下放置24h使溶脹,攪拌使溶解,加入40%包合物,攪拌均勻,再加入0.05%尼伯金乙酯,5%甘油,攪勻,于105℃下殺菌30min,即得;小試工藝穩(wěn)定,重復(fù)性好。(4)所得溫敏凝膠液均勻細(xì)膩,為深紅棕色;龍血素A、B的平均含量分別為0.241mg/g和0.253mg/g;TLC法可鑒別出龍血竭;膠凝溫度穩(wěn)定在34±1.0℃范圍內(nèi);膠凝時(shí)間為93~111s;膠凝后粘度均在20000mPa?s以上;pH值為4.48~4.57;密度為1.1195~1.1267mg/g;以水為釋放介質(zhì),4h時(shí)體外釋放為81.4%~89.8%。(5)龍血竭HP-β-CD溫敏凝膠對(duì)大鼠陰道的刺激性評(píng)價(jià)結(jié)果與生理鹽水相似;在大鼠陰道內(nèi)的滯留時(shí)間大于4h;14天后,中劑量組(0.2ml/只/天)對(duì)宮頸柱狀上皮異位大鼠動(dòng)物模型的治療結(jié)果評(píng)分(評(píng)分越低,療效越好)遠(yuǎn)低于模型組和陽(yáng)性對(duì)照組。結(jié)論:所建立的龍血素A、B分析方法準(zhǔn)確可靠;龍血竭HP-β-CD包合物及其溫敏凝膠的制備工藝穩(wěn)定可靠,重復(fù)性好;體外評(píng)價(jià)中建立了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案;對(duì)宮頸柱狀上皮異位大鼠動(dòng)物模型有治療效果,中劑量(0.2ml/只/天)時(shí)治療效果最佳。
【學(xué)位單位】：云南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R283.6
【部分圖文】：

龍血素 A 龍血素 B圖 1-1 龍血素 A、B 紫外吸收光譜圖色譜條件[5]: 使用 Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm )色譜柱；乙腈 1 %冰醋酸（ 38 : 62 ）為流動(dòng)相；采用檢測(cè)波長(zhǎng) 275 nm；供試品進(jìn)樣量為 10μL；流速為 1.3 mL/min；柱溫為 40℃。結(jié)果表明，系統(tǒng)適應(yīng)性良好，結(jié)果見(jiàn)表 1-1。理論塔板數(shù)以龍血素 A 計(jì)算不低于 6000。表 1-1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果名稱 成分（龍血素 A/B） 理論塔板數(shù) 分離度 對(duì)稱因子對(duì)照品A 16384 2.4 0.99B 16639 2.3 0.98供試品藥材含量測(cè)定A 16023 2.8 0.97B 15394 2.6 0.96包合物含量測(cè)定A 15203 2.4 0.96B 15394 2.7 0.99

圖 1-3 龍血素 A、龍血素 B 線性與范圍2.7 儀器精密度試驗(yàn)精密取龍血素 A、B 的對(duì)照品溶液（第一章 2.6 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液中，龍血素 A 對(duì)照品濃度為 66.0μg/ml，龍血素 B 對(duì)照品濃度為 60.0μg/ml），按第一章“2.4”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，連續(xù)測(cè) 6 次，結(jié)果表明，龍血素 A、B 峰面積的RSD 值均小于 2%，儀器精密度合格。結(jié)果見(jiàn)表 1-3。表 1-3 精密度試驗(yàn)結(jié)果序號(hào) 1 2 3 4 5 6RSD（%）龍血素峰面積（mAU*s）A 1158 1174.3 1163.6 1165.8 1159.4 1173.6 0.59B 988.9 1003.5 996.8 1005.6 993.7 999.5 0.62

1.包合物；2.HP-β-CD；3.物理混合物；4.龍血竭圖 2-1 紫外掃描圖譜由紫外掃描圖譜可知，包合物在 285nm 左右有一個(gè)吸收峰，HP-β-CD、物理混合物、龍血竭在 285nm 處沒(méi)有吸收峰，故表明龍血竭與 HP-β-CD 形成了新的物相。2.3.2 差示掃描量熱法（DSC）精密稱取 HP-β-CD、龍血竭 HP-β-CD 的物理混合物、龍血竭 HP-β-CD 包合物、龍血竭粉末四個(gè)樣品各 5mg 進(jìn)行差示掃描熱分析：氧化鋁為參比物，量程為±100μV，升溫范圍為 30～350℃，升溫速率為 10℃/min，得 DSC 圖譜，結(jié)果如圖 2-2。

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3 羅見(jiàn)春;陳學(xué)梁;張景R

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