發(fā)布時(shí)間：2020-08-28 15:07

　　 布渣葉是廣東習(xí)用地產(chǎn)藥材,“藥食同源”性植物,一直被廣泛的用于臨床治療與民間茶飲。自清朝起,嶺南本草書籍中就有關(guān)于“破布葉”清熱、解毒等藥效的記載,其后《嶺南采藥錄》、《陸川本草》等也均有記載。2010年后,各版《中華人民共和國(guó)藥典》將其收錄,可見其藥用價(jià)值已獲得充分的肯定。遺憾的是,目前布渣葉的使用價(jià)值大部分局限于涼茶等飲料的配制,其藥用價(jià)值很少得到發(fā)展。為了進(jìn)一步的研究和開發(fā)布渣葉資源,本文參考其他中藥類文獻(xiàn)和產(chǎn)品,對(duì)總黃酮部位進(jìn)行提取、分離和純化,獲得MpTFF及碳苷黃酮單體;建立質(zhì)量規(guī)范,測(cè)定理化性質(zhì);研究MpTFF的抗氧化、降脂活性及其降脂機(jī)制。1.本文采用加熱、冷凝回流的方法提取布渣葉總黃酮部位,選用AB-8型樹脂進(jìn)行有效成分富集。隨后應(yīng)用凝膠柱層析(葡聚糖凝膠LH20)純化,使該部位的苷與苷元分離。最終,采用噴霧干燥技術(shù)(進(jìn)風(fēng)溫度210℃;噴霧空氣流量538L·h-1;抽氣機(jī)輸出85%;泵輸出10%)獲得MpTFF粉末。隨后,應(yīng)用LC-MS技術(shù)結(jié)合對(duì)照品的精確分子量、相對(duì)保留時(shí)間以及MS和MSE的裂解模式對(duì)MpTFF中所含有的8種黃酮苷進(jìn)行定性分析,分別為:維采寧-2、異夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荊苷、維采寧-1、異牡荊苷、紫云英苷和水仙苷。2.分別建立以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定總黃酮苷含量(55.73±0.65%)的比色法和同時(shí)測(cè)定8種黃酮苷成分的HPLC法—Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇(A)和水(含0.2%磷酸,B),流速為1 m L·min-1。梯度洗脫程序:0~12 min,82%→70%(B);12~45 min,70%→55%(B);45~60 min,55%→20%(B);檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm,柱溫為35℃。二者結(jié)合可以為MpTFF提供更加科學(xué)的質(zhì)量控制。隨后,以搖瓶法測(cè)定MpTFF在水、pH 6.8磷酸鹽緩沖液(PBS)和0.1moL·L-1鹽酸中的溶解度,分別為1.46±0.02(略溶)、7.48±0.07(溶解)和25.84±0.16 g·100m L-1(易溶)。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,MpTFF在三種介質(zhì)中的溶解度,分別為鹽酸PBS水;究其原因可能是由于MpTFF的組成復(fù)雜,在酸或堿的環(huán)境中,彼此發(fā)生相互作用,增大了其溶解度。因此為了更加準(zhǔn)確的測(cè)定中藥成分的溶解度,則需要更加科學(xué)的溶解度測(cè)定方法。3.采用體外清除DPPH自由基試驗(yàn)以及HLP小鼠的降脂試驗(yàn)對(duì)MpTFF的相關(guān)活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明其具有較好的清除自由基能力(EC50值為0.038 mg·m L-1),;以312 mg·(Kg·d)-1的劑量給藥,MpTFF能夠有效的降低HLP小鼠的體重增量,降低TC、TG和LDL-C水平,上升HDL-C水平。同時(shí),對(duì)于AST和ALT兩種轉(zhuǎn)氨酶的活性水平也具有降低的作用,上述實(shí)驗(yàn)證明MpTFF具有一定的抗氧化、保肝和降脂活性。4.采用計(jì)算機(jī)模擬分子對(duì)接的方法,對(duì)MpTFF降脂活性成分進(jìn)行了分析。首先,查閱相關(guān)文獻(xiàn),下載與降脂相關(guān)的受體;然后,依據(jù)MpTFF所含成分建立配體數(shù)據(jù)庫(kù),進(jìn)行CDOCKER模式的分子對(duì)接。結(jié)果表明,牡荊苷、異牡荊苷和紫云英苷等能夠與受體蛋白有較好的氫鍵連接。而該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相符,進(jìn)一步證明異牡荊苷、牡荊苷和紫云英苷等為MpTFF中主要的降脂活性成分。5.以MpTFF為基礎(chǔ)進(jìn)一步進(jìn)行水解,采用凝膠柱層析、反相ODS柱色譜和半制備型HPLC進(jìn)行了碳苷黃酮的分離、純化;1H-NMR,13C-NMR和HRMS進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征,最終鑒定了4種碳苷黃酮,分別為:維采寧-2、牡荊苷、異牡荊苷、異佛萊心苷。其中,維采寧-2是首次從布渣葉中分離出來,同時(shí)也是首次從破布葉屬植物中分離得到。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284.1
【部分圖文】：

可以看出 MpTFF 溶液具有較好的自由基清除能力，其FF 對(duì)高脂乳劑誘導(dǎo) HLP 小鼠的保護(hù)活性脂乳劑的配制[8]方為 4％膽固醇，20％豬油，1％丙基硫氧嘧啶，8%蔗糖，用至 100％制成脂肪乳；氧嘧啶、膽固醇于乳缽中研細(xì)，備用。將豬油加熱至 40℃使加入乳缽中研細(xì)的固體粉末，不斷攪拌，溶解。再加入吐溫 入溶有蔗糖的蒸餾水至 100%，加熱使完全溶解，分裝，冷圖 4-3 濃度梯度 MpTFF 的清除率. 4-3 The clearance rate of MpTFF with different concentration g

4-4 MpTFF 對(duì) HLP 小鼠體重增重量的影響（n=9, means ± -4 Effects of MpTFF on the body weight gain of hyperlipidem(n=9, means ± SD)統(tǒng)計(jì)軟件 SPSS 22.0，選擇 one-wayANOVA 顯著性分析。性差異，**p<0.01，與 MG 呈非常顯著差異）了各組小鼠給藥前后（2 周）的體重變化情況，結(jié)果顯示ZK 組和 MpTFF 組小鼠的體重增重量明顯降低。XZK 和 鼠的體重增量。P 小鼠肝臟指數(shù)的測(cè)定完畢后，解剖各組小鼠，取肝臟并稱其濕重，計(jì)算臟器指）。結(jié)果見下表 4-3 圖 4-5.表 4-3 MpTFF 對(duì) HLP 小鼠肝臟指數(shù)的影響(n=9, means ± Sfects of MpTFF on liver index of hyperlipidemic mice (n=9, m

4-5 MpTFF 對(duì) HLP 小鼠肝臟指數(shù)的影響（n=9, means ± Sfects of MpTFF on liver index of hyperlipidemic mice (n=9, m知，MG 組的肝臟指數(shù)略高于 NG 組，這可能是由于 MG致，但是，由于造模時(shí)間較短，肝臟組織還未產(chǎn)生顯著的病 組肝臟指數(shù)略低于 MG 組，說明 MpTFF 和血脂康具有一P 小鼠血脂常規(guī)四項(xiàng)測(cè)定續(xù)喂養(yǎng) 14d 后，禁食不禁水 12h，摘眼球取血，分裝于離10min），取血清，按試劑盒提示操作測(cè)定血清中 TC、TG果見表 4-4，圖 4-6。 4-4 MpTFF 改善 HLP 小鼠血脂常規(guī)四項(xiàng)水平(n=9, means ± Effect of MpTFF on improving four Indicators of Lipid in thehyperlipidemic mice (n=9, means ± SD)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2807734