【摘要】：目的:研究山枝子莖葉水提取物(SZZJYA)對小鼠化學性和藥物性急性肝損傷的作用及可能機制。方法:(1)SZZJYA對四氯化碳(CCl_4)致小鼠急性肝損傷保護作用:采用CCl_4腹腔注射(i.p.)小鼠,建立化學性急性肝損傷模型。把昆明種小鼠隨機分為6組,每組10只,即正常對照組(NC)、模型對照組(MC)、陽性對照組(聯(lián)苯雙酯,DDB)、SZZJYA高劑量組(SZZJYA_H)、SZZJYA中劑量組(SZZJYA_M)、SZZJYA低劑量組(SZZJYA_L)。SZZJYA各劑量組和陽性對照組分別給予SZZJYA(5.00、2.50、1.25g/kg)和DDB(150mg/kg),其余2組給予花生油經口灌胃(i.g.),每天1次,連續(xù)7天。末次給藥1h后,除NC組外,其余五組用0.18%CCl_4花生油溶液(0.18%CCl_4,0.018ml/kg)對小鼠進行腹腔注射,誘導急性肝損傷模型。20h后采集小鼠的血清及肝組織并稱重,測定肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù);檢測血清中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(TBIL)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、白球比(A/G);檢測肝組織中丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力;HE染色觀察肝組織的病理形態(tài)改變;免疫組化法檢測肝組織中PCNA蛋白表達量。(2)SZZJYA對D-氨基半乳糖(D-GalN)致小鼠急性肝損傷保護作用:采用D-GalN腹腔注射小鼠,建立化學性急性肝損傷模型。把昆明種小鼠隨機分為6組,每組10只,即NC組、模型組、陽性對照組(DDB)、SZZJYA_H組、SZZJYA_M組、SZZJYA_L組。NC組和模型組采用生理鹽水(NS)經口灌胃,其余四組給予相應藥物進行干預,每天灌胃1次,連續(xù)7天。末次給藥1h后,除NC組外,其余五組用D-GalN溶液(700mg/kg)對小鼠進行腹腔注射,誘導急性肝損傷模型。20h后采集小鼠的血清及肝組織并稱重,測定肝臟、脾臟、胸腺的系數(shù);檢測血清中ALT、AST、ALP、TBIL、TP、ALB、GLB、A/G;檢測肝組織中MDA、GSH含量和SOD、GSH-PX活力;HE染色觀察肝組織病理形態(tài)改變;免疫組化法檢測肝組織中Bax和Bcl-2蛋白表達量。(2)SZZJYA對對乙酰氨基酚(APAP)致小鼠急性肝損傷保護作用:采用APAP腹腔注射小鼠,建立藥物性急性肝損傷模型。把昆明種小鼠隨機分為6組,每組10只,即正常對照組、APAP模型組、陽性對照組(DDB)、SZZJYA_H組、SZZJYA_M組、SZZJYA_L組。正常對照組和模型組采用生理鹽水(NS)經口灌胃,其余四組給予相應藥物進行干預,每天灌胃1次,連續(xù)7天。末次給藥1h后,除正常對照組外,其余五組用APAP溶液(120mg/kg)對小鼠進行腹腔注射,誘導急性肝損傷模型。20h后采集小鼠血清及肝組織并稱重,測定肝臟、脾臟、胸腺的系數(shù);檢測血清中ALT、AST、ALP、TBIL、TP、ALB、GLB、A/G;檢測肝組織中MDA、GSH含量和SOD、GSH-PX活力;HE染色觀察肝組織病理形態(tài)改變;免疫組化法檢測肝組織中TNF-α和iNOS蛋白表達量。結果:(1)CCl_4誘導的化學性急性肝損傷中,與模型組相比,SZZJYA各劑量組均能增加小鼠體重,降低肝臟、脾臟、胸腺的系數(shù)(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高劑量組能顯著降低肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)(P0.01);SZZJYA各劑量組均能降低血清中ALT、AST、ALP的活性和TBIL含量,提高TP、ALB、GLB含量和A/G比值(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高劑量能顯著的降低AST、ALP活性(P0.01);SZZJYA各劑量組能不同程度升高SOD、GSH-PX活力和GSH含量,同時降低MDA含量(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高劑量組的效果最顯著(P0.01);在光學顯微鏡下觀察,SZZJYA各劑量組均能不同程度的減輕小鼠肝臟損傷(P0.01或P0.05);免疫組化圖像分析結果顯示,SZZJYA各劑量組均能顯著上調PCNA蛋白表達量(P0.01)。(2)D-GalN誘導的化學性急性肝損傷中,與模型組相比,SZZJYA各劑量組及均能顯著增加小鼠體重,降低肝臟、脾臟、胸腺的系數(shù)(P0.01);SZZJYA各劑量組均能不同程度降低小鼠血清中ALT、AST、ALP活性和TBIL含量,提高TP、ALB、GLB含量和A/G比值(P0.01或P0.05),其中SZZJYA的中、高劑量能顯著的降低ALP活性和TBIL含量,并升高A/G比值(P0.01);SZZJYA的中、高劑量組均能顯著提高肝組織中GSH的含量,降低MDA含量(P0.01);光學顯微鏡下觀察,SZZJYA各劑量組均能不同程度的減輕小鼠肝臟損傷(P0.01或P0.05);免疫組化圖像分析結果顯示,SZZJYA各劑量組均能顯著上調Bcl-2和下調Bax的蛋白表達量(P0.01)。(3)APAP誘導的藥物性急性肝損傷中,與模型組相比,SZZJYA各劑量組均能不同程度的增加小鼠體重,降低肝臟、脾臟、胸腺系數(shù)(P0.01或P0.05),其中SZZJYA的中、高劑量對小鼠體重、肝臟系數(shù)、胸腺系數(shù)效果最明顯(P0.01);SZZJYA各劑量組均能降低小鼠血清中ALT、AST、ALP活性和TBIL含量,同時升高TP、ALB、GLB含量和A/G比值(P0.01或P0.05),其中SZZJYA中、高劑量效果最好;SZZJYA各劑量均能不同程度提高肝組織中GSH含量和SOD、GSH-PX活力,降低肝組織中MDA含量(P0.01或P0.05)。光學顯微鏡下觀察,SZZJYA各劑量組均能不同程度的減輕小鼠肝臟損傷(P0.01或P0.05)。免疫組織化學結果得出SZZJYA各劑量組均能顯著降低TNF-α和i NOS的蛋白表達量(P0.01)。結論:(1)SZZJYA對CCl_4誘導的化學性急性肝損傷小鼠具有一定保護作用,其機制可能與抑制脂質過氧化、清除氧自由基有關;(2)SZZJYA對D-GalN誘導的化學性急性肝損傷小鼠有一定保護作用,其機制可能與修復蛋白和DNA合成功能、抑制細胞凋亡有關;(3)SZZJYA對APAP誘導的藥物性急性肝損傷小鼠有一定保護作用,其機制可能抑制促炎因子過表達,修復肝細胞的再生功能有關。
【學位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1-1 SZZJYA 對 CCl4致急性肝損傷小鼠體重的影響(-x±s，n=10)：與正常對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與CCl4模型組比較，*P<0.05，**P<0.

圖 1-2 SZZJYA 對 CCl4致急性肝損傷小鼠肝臟系數(shù)的影響(-x±s，n=10)注：與正常對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與 CCl4模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

11圖 1-3 SZZJYA對 CCl4致急性肝損傷小鼠脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)的影響(-x±s，n=10)注：與正常對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與 CCl4模型組比較，*P<0.05，**P<0.

【參考文獻】

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本文編號：2805501