【摘要】：川續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asper Wall.ex Henry的干燥根。其主要分布為中國的江西、湖北、湖南、廣西、四川等地。因續(xù)斷可以“續(xù)折接骨”而得名。續(xù)斷性微溫,味苦辛,入肝、腎經(jīng)。秋季采挖,去掉根頭和須根,用微火烘至半干,堆置“發(fā)汗”至內(nèi)部變墨綠色時,再烘至近干。川續(xù)斷化學(xué)成分復(fù)雜而多樣化,主要包括皂苷類(三萜皂苷類)、環(huán)烯醚萜類、生物堿類、揮發(fā)油類等其他成分。川續(xù)斷做為骨傷科和婦科常用中藥,臨床上主要應(yīng)用于腰膝酸軟,風(fēng)濕痹痛,跌打損傷,崩漏,胎漏。現(xiàn)代藥理學(xué)證明,川續(xù)斷具抗骨質(zhì)疏松、促進骨傷愈合、有抗炎、抗衰老、抗早產(chǎn)、流產(chǎn)、等藥理作用。本文以川續(xù)斷總皂苷和川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量為評價指標,首先建立兩個指標含量測定的方法。供試品加入新配制的5%香草醛-冰醋酸0.4ml,高氯酸1.6ml,密塞搖勻。置于60℃水浴20min后停止反應(yīng),取出后立即放入冰水浴中冷卻,然后精密加入冰醋酸10ml,搖勻。于540nm處測定其吸光度從而計算川續(xù)斷總皂苷的含量。實驗選定甲醇濃度、超聲時間、溶媒比為三個主要因素,以川續(xù)斷總皂苷的含量與川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量的綜合評分為最終評價指標,設(shè)計正交試驗,優(yōu)選了川續(xù)斷總皂苷的提取工藝,即為加10倍量75%的甲醇超聲提取兩次,每次30min。驗證試驗顯示三批川續(xù)斷總皂苷的含量RSD值為1.12%,川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量RSD值為0.62%,結(jié)果表明所得最佳提取工藝簡便可行。實驗將提取的總皂苷粗提液首先依次用石油醚和水飽和正丁醇萃取,然后考察了D101大孔樹脂對總皂苷的純化工藝,最終確定最佳純化工藝為:上樣濃度0.2g/ml(生藥)按2BV/h濕法上樣,上樣量為1BV,最終用6BV、70%乙醇以1BV/h的流速洗脫。三批驗證試驗結(jié)果總皂苷純度平均值為59.86%,RSD值0.64%;總皂苷轉(zhuǎn)移率平均值為83.35%,RSD值1.05%,表明確定的最佳工藝穩(wěn)定,能用于川續(xù)斷總皂苷的分離純化。本實驗測定了川續(xù)斷藥材中4中目標成分含量,結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ、馬錢苷、齊墩果酸和熊果酸的含量平均值依次為66.327、2.240、0.157、0.564 mg/g。實驗還建立了70%乙醇洗脫部位的HPLC指紋圖譜,結(jié)果匹配的峰中有13個共有峰,所有共有峰在20~50min內(nèi)出峰,峰型基線平穩(wěn),各峰能實現(xiàn)良好的分離,10批川續(xù)斷總皂苷純化液相似度均大于0.9,表明10批川續(xù)斷總皂苷純化液指紋圖譜相似度良好,在川續(xù)斷總皂苷純化液的質(zhì)量控制方面具有一定的參考意義。實驗考察了川續(xù)斷總皂苷的抗骨質(zhì)疏松作用,考察了川續(xù)斷總皂苷對成骨細胞增值的影響、對ALP活性的影響和OPG及RANKL mRNA表達的影響,結(jié)果低中高劑量組對三個指標均表現(xiàn)出一定程度的促進作用。續(xù)斷總皂苷作用于成骨細胞24、48h,中高劑量組對成骨細胞增殖均有顯著性作用(P0.05,P0.01),72h時,中劑量組續(xù)斷總皂苷對成骨細胞有顯著性增殖作用(P0.05);各時間段的低劑量組對成骨細胞也表現(xiàn)出一定的增值作用但并沒有顯著性差異;與對照組比較,低中高濃度的續(xù)斷總皂苷對大鼠成骨細胞ALP活性均有促進作用,隨著濃度的增加,促進作用增強。其中中高劑量組促進作用具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,P0.01);續(xù)斷總皂苷對OPGmRNA的表達有促進作用,低中劑量組促進作用有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);同時續(xù)斷總皂苷可抑制RANKLmRNA的表達,隨著濃度增加其抑制作用增強,且低中高劑量組的抑制作用均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),OPG/RANKL值升高。實驗以總皂苷純化液干粉為主藥,以微晶纖維素、乙基纖維素和硬脂酸為骨架材料,設(shè)計了緩釋骨架微丸。正交試驗優(yōu)選處方組成為MCC的含量為10%,乙基纖維素與硬脂酸的比例為2:1,釋藥調(diào)節(jié)劑乳糖的用量為3%;最佳工藝為:擠出速度為25r/min,滾圓速度為950 r/min,滾圓時間為3min。驗證三批微丸的粉體學(xué)和體外釋放度具有較好的一致性。微丸釋藥動力學(xué)模型擬合結(jié)果顯示續(xù)斷總皂苷緩釋骨架微丸的釋藥機制最符合Higuchi方程,說明其釋藥主要以擴散機制進行。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R283.6
【圖文】：

圖 1 川續(xù)斷總皂苷含量測定全波長掃描圖2.1.4 標準曲線的制備用移液管精密移取 1.0ml 一系列不同濃度的續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品溶（0.1395、0.279、0.4185、0.6975、0.837、1.116、1.395mg/ml）至 2具塞試管中，以不加續(xù)斷皂苷Ⅵ的試管為對照，按“2.1.3 項下”方法作，于 540nm 波長處測定吸光度，結(jié)果如表 1。以濃度為橫坐標，吸光為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程。表 1 川續(xù)斷總皂苷含量測定標準曲線編號 1 2 3 4 5 6 7濃度（mg/ml） 0.1395 0.279 0.4185 0.6975 0.837 1.116 1.39吸光度 0.216 0.358 0.491 0.815 0.987 1.303 1.62由上表計算得回歸方程為：Y=1.1336X+0.0377，R2=0.9993，表明川斷總皂苷在 0.1395～1.395mg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖 2 泄露曲線2.4.2.7 洗脫劑用量的考察稱取經(jīng)抽干的 D101 大孔樹脂 10g，以一定流速濕法上樣，上樣量 20ml，上樣濃度 0.2g/ml（生藥），先用蒸餾水沖洗至無顏色后用 70%的乙醇洗脫，每 10ml 收集一份洗脫液，共收集 20 份。取 1ml 測定各洗脫液的吸光度，計算其總皂苷含量。結(jié)果如下表 20，由表中數(shù)據(jù)可知第 12 份洗脫液以后洗脫液中總皂苷含量極低，確定此時洗脫劑用量為最終洗脫劑用量即120ml。表 20 洗脫劑用量的考察洗脫液編號 吸光度/A 川續(xù)斷總皂苷濃度（mg/ml）1#0.434 3.502#1.077 18.34

取“2.6.2 項下”10 批川續(xù)斷總皂苷純化液，按“2.6.1 項下”色譜條件分別進樣，采集 10 批總皂苷純化液色譜圖。將 10 批色譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2004A 版）”進行分析處理。對照圖譜以平均數(shù)的方法生成，結(jié)果匹配的峰中有 13 個共有峰，以 8 號峰為參照峰（用對照品進行標定知 8 號峰為川續(xù)斷皂苷Ⅵ），S1 為對照圖譜 R。1批總皂苷純化液指紋圖譜、共有峰相對峰面積和相對保留時間及相識度評價結(jié)果如下圖 3、4，表 26、27、28。結(jié)果所有共有峰在 20～50min 內(nèi)出峰，峰型基線平穩(wěn)，各峰能實現(xiàn)良好的分離，10 批川續(xù)斷總皂苷純化液相似度均大于 0.9，表明 10 批川續(xù)斷總皂苷純化液指紋圖譜相似度良好在川續(xù)斷總皂苷純化液的質(zhì)量控制方面具有一定的參考意義。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王云華;劉繼華;陳凡波;孫丹丹;王春紅;楊苗;;川續(xù)斷中三萜皂苷類成分的研究概況[J];特產(chǎn)研究;2015年02期

2 范茜茜;葛慶;彭翠香;許漢林;;高效液相色譜法測定川續(xù)斷中熊果酸、齊墩果酸、馬錢苷和川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2015年10期

3 鐘文婕;柳占彪;王安紅;田文全;;壯骨1號方鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J];天津中醫(yī)藥;2014年12期

4 朱海琳;程寧波;孟兆青;丁崗;王振中;蕭偉;;正交試驗優(yōu)選續(xù)斷的水提工藝[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2014年17期

5 孫欣光;黃文華;郭寶林;;續(xù)斷的化學(xué)成分研究[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2014年05期

6 張雪峰;歐燕;;擠出滾圓法制備天山雪蓮提取物骨架微丸[J];中南藥學(xué);2014年01期

7 王丹;馬萍;劉麗宏;雷寧;藍苑元;遲小華;;用大孔樹脂純化川續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的工藝研究[J];藥學(xué)服務(wù)與研究;2013年05期

8 謝英花;胡易;馬燕山;陳卉;侯東岳;孫勇軍;;鹽酸二甲雙胍緩釋骨架微丸的研制[J];河北科技大學(xué)學(xué)報;2013年03期

9 牛銀波;潘亞磊;李晨睿;翟遠坤;王碩;梅其炳;;續(xù)斷防治骨質(zhì)疏松的研究進展[J];中國藥理學(xué)通報;2013年07期

10 劉丹;賈曉斌;蕭偉;;質(zhì)量分數(shù)權(quán)重系數(shù)法表征銀杏內(nèi)酯組分溶解性及表觀油水分配系數(shù)的探討[J];中國中藥雜志;2013年12期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 唐清;滋陰調(diào)經(jīng)顆粒的研制及其對大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響[D];西南大學(xué);2014年

2 馬強;紅車軸草和川續(xù)斷的化學(xué)成分及質(zhì)量研究[D];大連理工大學(xué);2005年

3 張彥青;中藥燈盞花素骨架緩釋微丸的設(shè)計與評價[D];沈陽藥科大學(xué);2002年

本文編號：2799305