【摘要】：目的:研究青錢柳葉的化學(xué)成分,發(fā)掘先導(dǎo)化合物或活性化合物,進(jìn)一步完善青錢柳的物質(zhì)基礎(chǔ),為該珍稀資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。優(yōu)化雙水相法(ATPS)提取青錢柳葉總黃酮的工藝條件,使其總黃酮的提取率達(dá)到最大化。用雙水相最優(yōu)條件下獲得的青錢柳葉提取物進(jìn)行體內(nèi)降血糖試驗(yàn),研究其對(duì)糖尿病小鼠的降血糖作用。方法:以廣西百色市青錢柳葉為原料,甲醇作提取溶劑,浸提得到總提取物。采用硅膠柱色譜、反向柱色譜、Sephadex LH-20色譜等多種方法對(duì)青錢柳葉石油醚和乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化,對(duì)分離得到的單體化合物采用理化檢識(shí)、HPLC、EI-MS、~(13)C-NMR、~1H-NMR等方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。超聲波輔助雙水相法提取青錢柳葉總黃酮,響應(yīng)面Box-Behnken設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝,超高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)分析雙水相提取物中的黃酮成分。高脂飲食誘導(dǎo)、腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備2型糖尿病小鼠模型,隨機(jī)分組設(shè)置空白組、模型組、二甲雙胍組、青錢柳葉提取物高、中、低劑量組。測定小鼠空腹血糖,給藥兩周后測定小鼠血清胰島素(INS)、總膽固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、極低密度脂蛋白含量(VLDL-C),采用HE染色法觀察實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠肝臟和胰腺的病理學(xué)變化,評(píng)估青錢柳葉提取物對(duì)其病變的影響。結(jié)果:從青錢柳葉提取物中分離得10個(gè)化合物,鑒定了9個(gè)化合物,分別為:5-羥基-2-甲氧基-1,4萘醌,(5-hydroxy-2-methoxy-1,4-naphthoquinone)(1),β-香樹脂醇(β-amyrin)(2),D:B-frienoolean-5-en-3β-ol(3),β-谷甾醇(β-sitosterol)(4),齊墩果酸(olean-12en-28-oic acid)(5),2α-羥基齊墩果酸(maslinic acid)(6),熊果醇(uvaol)(7),3β,23-dihydroxy-1-oxo-olean-12-en-28-oic acid(8),阿江欖仁酸(arjunolic acid)(9)。化合物10結(jié)構(gòu)尚未確定,有待進(jìn)一步鑒定。超聲波輔助雙水相法提取青錢柳葉總黃酮的最優(yōu)工藝為:無水乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)33.00%,鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)15.00%,提取時(shí)間52min,液固比33:1,總黃酮提取率達(dá)3.00±0.10%。用超高效液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜分析青錢柳葉雙水相提取物,初步定性13種黃酮類化合物。青錢柳葉提取物中劑量能明顯改善2型糖尿病小鼠體重減輕的這一癥狀(P0.01),低劑量組降低糖尿病小鼠空腹血糖(P0.05),高劑量組顯示出降低血清胰島素的作用(P0.05),青錢柳提取物能降低糖尿病小鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的含量,增加高密度脂蛋白含量。糖尿病模型組小鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的水腫變性、匯管區(qū)和小葉內(nèi)出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤;胰島細(xì)胞數(shù)量變少且萎縮,形狀不規(guī)則。二甲雙胍組和青錢柳葉提取物治療組小鼠的肝臟和胰腺變化較模型組有不同程度的減輕。結(jié)論:鑒定得到的9個(gè)化合物,除化合物1為萘醌,化合物4為一個(gè)四環(huán)三萜,其余化合物都屬于五環(huán)三萜類化合物,其中化合物3、7、8為首次從該植物中分離�；衔�3和8屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜,化合物7為烏蘇烷型五環(huán)三萜。雙水相提取青錢柳葉總黃酮是一種高效綠色經(jīng)濟(jì)的提取方法,總黃酮提取物具有降低小鼠空腹血糖、降脂、改善胰島素抵抗、保護(hù)胰島細(xì)胞的作用,具有更廣泛應(yīng)用于藥品和食品的潛力,其降血糖的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284;R285.5
【圖文】：

1雙水相相圖

2單因素試驗(yàn)結(jié)果

3響應(yīng)曲面和等高線圖

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本文編號(hào)：2799335