【摘要】：[目的]目前腦卒中仍是導致長期殘疾的主要原因,至今尚無特效的治療藥物。人參皂苷Rb1是目前發(fā)現(xiàn)能有效治療腦血管疾病的三七中重要的活性成分。大腦皮層是支配軀體感覺和運動的重要結構,對許多化學損害較為敏感尤其是缺血。通過研究人參皂苷Rb1對大鼠局造性腦缺血腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其前體腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的影響及可能的機制,探求人參皂苷Rb1對腦缺血的保護作用機制。[方法]將48只SD雄性大鼠隨機分為假手術組、模型組、人參皂苷組(100mg/kg)和尼莫地平組(1mg/kg),每組12只,每組又分為3天,7天,14天三個亞組。采用光化學誘導大鼠局灶性腦缺血的方法建立腦缺血模型,術后當日開始給藥,2次/日,各假手術組和模型組術后4 h腹腔注射等量生理鹽水。于術前、術后(當日,3 天、7 天、14 天)根據(jù) corner test,adhesive tape-removal test和改良神經(jīng)功能缺損評分(mNSS)檢測神經(jīng)功能缺損評分,樣本給藥3,7,14天后取腦組織,用western blotting和免疫組織化學方法檢測皮層的TrkB、sortilin,tPA,PAI-1和p75NTR的表達變化,ELISA檢測mBDNF和proBDNF的濃度變化。[結果]行為學檢測結果:腦缺血后大鼠出現(xiàn)不同程度感覺運動障礙,通過Corner test,Adhesive tape removal test和mNSS對大鼠進行神經(jīng)缺損評估。研究發(fā)現(xiàn),與模型組相比,人參皂苷Rb1組和尼莫地平組大鼠的感覺運動障礙均顯著改善(P0.05)。①Corner test:與假手術組比較,模型組偏好向右側轉身(P0.01);與模型組比較,人參皂苷Rb1組和尼莫地平組向右轉身次數(shù)減少(P0.05),并且隨用藥時間延長,呈現(xiàn)出時間依賴性。②Adhesive tape removal test:與假手術組比較,模型組大鼠接觸膠帶時間和撕除膠帶時間均延長(P0.05);與模型組比較,人參皂苷Rbl組和尼莫地平組接觸膠帶和撕除膠帶時間縮短(P0.05),尤其7天和14天時明顯縮短(P0.05)。③mNSS:假手術組未見神經(jīng)功能缺損(評分均為0);模型組mNSS評分高于假手術組(P0.01);與模型組相比,人參皂苷Rb1組和尼莫地平組神經(jīng)功能缺損程度評分降低(P0.05);與3天組比較,7天組和14天組神經(jīng)功能缺損評分降低但無顯著差異(P0.05)。Western blotting檢測結果可見:①與假手術組相比,模型組TrkB,sortilin,P75NTR,tPA和PAI-1蛋白表達明顯增加(P0.05);②與模型組相比,人參皂苷Rb1和尼莫地平治療明顯降低sortilin、P75NTR和PAI-1蛋白表達(P0.P5),尤其以給藥14天降低顯著(P0.05);③與模型組相比,人參皂苷Rb1和尼莫地平治療使TrkB和tPA表達顯著上調(P0.05),且呈現(xiàn)時間依賴性,尤其以用藥14天增加顯著(P0.05)④人參皂苷Rb1和尼莫地平組間比較無顯著差異(P0.05)。免疫組織化學法檢測結果可見:①假手術組幾乎未見P75陽性表達;腦缺血后3天、7天、14天均可見胞漿和胞膜內大量P75陽性表達(P0.05),隨時間延長表達稍有下降,光密度值升高(P0.05),光密度值隨時間延長稍有下降;給予人參皂苷Rb1和尼莫地平治療3天、7天、14天均可減少P75陽性表達(P0.05),且呈現(xiàn)時間依賴性;人參皂苷Rb1和尼莫地平組各時間點比較無顯著差異(P0.05)。②假手術組可見少量sortilin陽性表達細胞;與假手術組比較,缺血模型組出現(xiàn)大量胞漿著色的陽性細胞(P0.05),光密度值明顯升高(P0.05);PNS-Rb1和尼莫地平治療組在3天、7天、14天均見sortilin陽性表達明顯減少(P0.05),且呈現(xiàn)時間依賴性,用藥14天時sortilin陽性表達下降明顯,光密度值隨時間延長下降明顯(P0.05)。人參皂苷Rb1和尼莫地平組比較無顯著差異(P0.05)。③假手術組胞漿和胞膜區(qū)可見少量TrkB陽性表達,模型組胞漿著色的陽性細胞數(shù)目增加(P0.05),陽性表達的光密度值升高(P0.05);人參皂苷Rb1和尼莫地平治療組在3天、7天、14天均見TrkB陽性表達明顯增加(P0.05),且呈現(xiàn)時間依賴性,光密度值升高(P0.05)。人參皂苷Rb1和尼莫地平組各時間點比較無顯著差異(P0.05)。Elisa結果可見:與假手術組比較,模型組mBDNF/proBDNF表達水平均升高(P0.05);與模型組比較,人參皂苷Rb1和尼莫地平組mBDNF表達水平進一步升高(P0.05),而proBDNF表達水平下降(P0.05),且呈現(xiàn)時間依賴性。與3天組比較,人參皂苷Rb1和尼莫地平14天組BDNF/proBDNF表達水平差異顯著(P0.05)。[結論]人參皂苷Rb1能顯著改善缺血性卒中引起的感覺運動功能障礙,且時間依賴性的增加BDNF,TrkB以及其加工酶(組織纖溶酶原激活劑,TPA)的表達,同時,減少proBDNF,p75NTR,sortilin以及Ⅰ型纖溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)的表達,最終介導神經(jīng)元的保護作用。因此,人參皂苷Rb1可能是通過激活BDNF/TrkB信號通路和抑制proBDNF/sortilin/p75NTR信號通路改善腦缺血感覺運動障礙。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

動障礙的作用，通過Ｃｏｍｅｒ邋ｔｅｓｔ，Ａｄｈｅｓｉｖｅ邋ｔａｐｅ邋ｒｅｍｏｖａｌ邋ｔｅｓｔ和ｍＮＳＳ對大鼠進行逡逑評估。研究發(fā)現(xiàn)與模型組相比，ＰＮＳ－Ｒｂｌ組和尼莫地平組大鼠的感覺運動障礙均逡逑顯著改善（圖１，尸＜０．０５）。逡逑ｌ．ｌＣｏｒｎｅｒｔｅｓｔ：與假手術組比較，模型組偏好向右側轉身（圖１Ａ－Ｃ，Ｐ＜０．０１）；逡逑與模型組比較，ＰＮＳ－Ｒｂｌ組和尼莫地平組向右轉身次數(shù)減少（圖１Ａ－Ｃ，Ｐ＜ａ0５），逡逑并且隨用藥時間延長，呈現(xiàn)出時間依賴性。逡逑１．２邐Ａｄｈｅｓｉｖｅ邋ｔａｐｅ邋ｒｅｍｏｖａｌ邋ｔｅｓｔ：與假手術組比較，模型組大鼠接觸膠帶時間和撕逡逑除膠帶時間均延長（圖１Ｄ－Ｅ，與模型組比較，ＰＮＳ－Ｒｂｌ組和尼莫地平逡逑組接觸膠帶和撕除膠帶時間縮短（圖１Ｄ－Ｅ，Ｐ＜０．０５），尤其７天和１４天時明顯逡逑縮短（圖１Ｄ－Ｅ，尸＜ａｏ？）。逡逑１．３邐ｍＮＳＳ：假手術組未見神經(jīng)功能缺損（評分均為０）；模型組ｒｎＮＳＳ評分高于逡逑假手術組（圖ＩＦ

影響逡逑與假手術組相比，模型組ＴｒｋＢ，邋ｓｏｒｔｉｌｉｎ，邋Ｐ７５ＮＴＲ，ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ－１蛋白表達逡逑明顯增加（圖２，邋Ｐ＜ａ0５）；與模型組相比，ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平治療明顯降低逡逑ｓｏｒｔｉｌｉｎ，Ｐ７５ＮＴＲ邋和邋ＰＡＩ－１邋蛋白表達（圖邋２Ａ－Ｄ；邋Ｉ－Ｊ，戶＜０．０５），尤其以給藥邋１４逡逑天降低顯著（Ｐ＜ａ0５）。與模型組相比，ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平治療使ＴｒｋＢ和ｔＰＡ逡逑表達顯著上調（圖２Ｅ－Ｆ；邋Ｇ－Ｈ，Ｐ＜ｆｔ０５），且呈現(xiàn)時間依賴性，尤其以用藥１４天逡逑增加顯著（Ｐ＜ｆｔ０５）；邋ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平組間比較無顯著差異（Ｐ＞０．０５）。逡逑２４逡逑

４邋ＴｒｋＢ，邋Ｐ７５和Ｓｏｒｔｉｌｉｉｉ的免疫組織化學檢測逡逑４．１ＰＮＳ－Ｒｂｌ對腦缺血大鼠Ｐ７５ＮＴＲ表達的影響逡逑圖３顯示，假手術組幾乎未見Ｐ７５陽性表達（圖３Ａ）；腦缺血后３天、７天、逡逑１４天均可見胞漿和胞膜內大量Ｐ７５陽性表達（圖３Ａ，Ｐ＜ｆｔ０５），隨時間延長表逡逑達稍有下降，Ｐ７５光密度值升高（圖３Ｂ，邋Ｐ＜０．０５），隨時間延長稍有下降；給予逡逑ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平治療３天、７天、１４天均可減少Ｐ７５陽性表達（圖３Ａ，Ｐ＜０．０５），逡逑且呈現(xiàn)時間依賴性；ＰＮＳ－Ｒｂｌ和尼莫地平組各時間點比較無顯著差異（圖３，逡逑２６逡逑

【參考文獻】

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本文編號：2795105