【摘要】：推進(jìn)藥品質(zhì)量控制技術(shù)的創(chuàng)新發(fā)展是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化和國(guó)際化的關(guān)鍵,對(duì)于保障中藥產(chǎn)品的安全性、有效性和一致性具有重要意義。經(jīng)過(guò)多年努力,中藥質(zhì)量控制技術(shù)已取得巨大進(jìn)步,尤其是中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)發(fā)展迅速,形成了以化學(xué)檢測(cè)為核心的中藥質(zhì)檢技術(shù)體系。然而,中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)領(lǐng)域依然面臨著眾多難題,如檢測(cè)方法性能不佳、檢測(cè)成本較高、與臨床療效相關(guān)性較低等,制約了中藥產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步提升。中藥化學(xué)組成復(fù)雜且藥效成分往往未知,測(cè)定一個(gè)或少數(shù)幾個(gè)指標(biāo)性成分難以真實(shí)反映大部分中藥產(chǎn)品的質(zhì)量,這導(dǎo)致了化學(xué)檢測(cè)方法往往脫節(jié)于中藥的藥效和臨床療效。由于生物活性與藥品療效具有更直接的聯(lián)系,近年來(lái)生物活性檢測(cè)已成為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)的前沿研究方向。因此,如何突破化學(xué)檢測(cè)與中藥藥效脫節(jié)的難關(guān),將生物活性檢測(cè)與化學(xué)檢測(cè)相融合,建立符合中藥特點(diǎn)的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法已成為現(xiàn)代中藥研究中的關(guān)鍵科技問(wèn)題。生物標(biāo)志物是當(dāng)今生命科學(xué)領(lǐng)域的一大研究熱點(diǎn),在新藥研發(fā)、疾病診斷和治療等方面都表現(xiàn)出巨大應(yīng)用前景。生物標(biāo)志物研究中涌現(xiàn)的研究策略及檢測(cè)方法為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了嶄新理念和技術(shù)創(chuàng)新源泉,有望成為提升中藥質(zhì)量控制技術(shù)水平的重要路徑。據(jù)此,本文圍繞上述關(guān)鍵科技問(wèn)題,針對(duì)現(xiàn)有中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法存在的缺陷和不足,在中藥生物活性檢測(cè)、化學(xué)檢測(cè)以及化學(xué)-生物融合檢測(cè)三個(gè)方面開(kāi)展創(chuàng)新研究,提出了基于微流控芯片的中藥生物活性評(píng)價(jià)方法、基于衍生多反應(yīng)監(jiān)測(cè)指紋圖譜的中藥化學(xué)成分一致性評(píng)價(jià)方法,并構(gòu)思設(shè)計(jì)質(zhì)譜響應(yīng)探針,在實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜(DART-MS)上實(shí)現(xiàn)化學(xué)-生物融合檢測(cè)。本文主要研究?jī)?nèi)容及其學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)如下:1.為解決中藥生物活性檢測(cè)方法指標(biāo)單一、分析成本高、樣品消耗大等問(wèn)題,以芪參益氣滴丸為研究對(duì)象,提出一種基于微流控芯片的中藥生物活性評(píng)價(jià)方法,首次將微流控芯片應(yīng)用于中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)。本研究針對(duì)芪參益氣滴丸的兩個(gè)關(guān)鍵靶酶——凝血酶與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE),設(shè)計(jì)研制了多功能的微流控芯片。將其用于不同批次樣品的生物活性評(píng)價(jià),實(shí)現(xiàn)了正常與異常批次樣品的識(shí)別,并同時(shí)篩選出具有酶抑制活性的化合物。2.為解決色譜指紋圖譜耐用性差等問(wèn)題,提出一種基于衍生多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)的指紋圖譜分析方法用于中藥成分一致性評(píng)價(jià)。通過(guò)衍生MRM將四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(QTOF-MS)的MS2質(zhì)譜參數(shù)轉(zhuǎn)化為三重四級(jí)桿質(zhì)譜(QqQ-MS)的MRM質(zhì)譜參數(shù),無(wú)需對(duì)照品即可獲取MRM,從而建立中藥化學(xué)成分指紋圖譜,具有效率高、專屬性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。將其用于芪參益氣滴丸化學(xué)成分一致性評(píng)價(jià),研究結(jié)果表明基于衍生MRM的指紋圖譜具有良好的耐用性,并可準(zhǔn)確區(qū)分正常與異常批次的樣品。3.為探索創(chuàng)建中藥生物活性多重檢測(cè)(同時(shí)檢測(cè)多個(gè)生物指標(biāo))以及化學(xué)-生物融合檢測(cè)(在一個(gè)分析平臺(tái)同步完成生物活性檢測(cè)和化學(xué)檢測(cè))方法,本研究以丹參注射液為研究載體,從檢測(cè)原理層面進(jìn)行創(chuàng)新設(shè)計(jì),提出一種基于質(zhì)譜響應(yīng)探針的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,破解了化學(xué)-生物融合檢測(cè)難題。在能夠特異性識(shí)別生物靶標(biāo)的肽段上修飾易于離子化的標(biāo)簽分子,從而合成得到質(zhì)譜響應(yīng)探針,用于多靶標(biāo)高靈敏同步檢測(cè);進(jìn)而通過(guò)DART-MS實(shí)現(xiàn)中藥質(zhì)譜指紋圖譜與多靶酶活性的融合檢測(cè),可快速、靈敏、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)丹參注射液化學(xué)成分一致性與生物活性。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;O657.63
【圖文】：

藥效生物標(biāo)志物（ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ）以及替代終點(diǎn)（ｓｕｒｒｏｇａｔｅｅｎｄｐｏｉｎｔｓ／逡逑ｅｆｆｉｃａｃｙ－ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ邋）等［８３］。這些生物標(biāo)志物在在新藥開(kāi)發(fā)不同階段的作用逡逑及示例如圖１．１所示。逡逑如何從復(fù)雜的生物樣品中找出潛在的生物標(biāo)志物，如何準(zhǔn)確測(cè)定復(fù)雜基質(zhì)中逡逑微量、痕量的生物標(biāo)志物，如何快速、即時(shí)地檢測(cè)生物標(biāo)志物以滿足臨床需求，這逡逑些研究和應(yīng)用都離不開(kāi)檢測(cè)技術(shù)的支持。生物標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)在標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、篩選、逡逑驗(yàn)證和應(yīng)用等過(guò)程中均扮演著重要角色。由于生物標(biāo)志物涵蓋的范圍非常廣泛，其逡逑檢測(cè)技術(shù)也是多種多樣，幾乎所有基因、蛋白、小分子代謝物、糖類、脂類的分析逡逑技術(shù)都可用于生物標(biāo)志物檢測(cè)，包括基因／蛋白芯片、微流控芯片、質(zhì)譜、色譜、逡逑核磁共振、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ＰＣＲ）等。在生物標(biāo)志物研究中涌現(xiàn)的許多高通量、逡逑高內(nèi)涵、低損耗檢測(cè)技術(shù)和方法對(duì)中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法開(kāi)發(fā)具有重要的借鑒意義。因逡逑此，本節(jié)對(duì)生物標(biāo)志物檢測(cè)中兩個(gè)常用的技術(shù)——微流控芯片和質(zhì)譜進(jìn)行介紹，并逡逑簡(jiǎn)述其在生物標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用。逡逑１．３．１微流控芯片在生物標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用概況逡逑微流控芯片（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐ），又稱微全分析系統(tǒng)（ｊｉ－ＴＡＳ）或芯片實(shí)驗(yàn)室逡逑（ｌａｂ－ｏｎ－ａ－ｃｈｉｐ）

析化學(xué)、藥物分析學(xué)、藥物信息學(xué)和大數(shù)據(jù)科學(xué)等對(duì)中藥生物標(biāo)志物和化學(xué)標(biāo)志物逡逑開(kāi)展系統(tǒng)研究，推進(jìn)相關(guān)技術(shù)的集群創(chuàng)新和成果共享，實(shí)現(xiàn)中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法研究逡逑的標(biāo)準(zhǔn)化和高效化。生物方法研究平臺(tái)如圖１．２所示，與生物標(biāo)志物研究類似，我逡逑們將中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法的研究分為標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、確證和應(yīng)用三個(gè)階段：逡逑①

圖１．３論文研究框架逡逑針對(duì)中藥生物活性檢測(cè)研究中多重檢測(cè)（同時(shí)檢測(cè)多個(gè)生物指標(biāo)）及化學(xué)－生物融逡逑合檢測(cè)（在一個(gè)分析平臺(tái)同步完成生物活性檢測(cè)和化學(xué)檢測(cè)）兩個(gè)關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，逡逑本章提出了一種基于質(zhì)譜響應(yīng)探針和實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜（ＤＡＲＴ－ＭＳ）的中藥質(zhì)量逡逑評(píng)價(jià)方法。通過(guò)設(shè)計(jì)并合成一類嶄新的質(zhì)譜響應(yīng)探針，顯著提高了酶特異性底物的逡逑質(zhì)譜響應(yīng)，實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶酶的高靈敏度、高選擇性檢測(cè)。在此基礎(chǔ)上，采用ＤＡＲＴ－逡逑１７逡逑

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本文編號(hào)：2789131