【摘要】：太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根,是中醫(yī)臨床常用補虛藥,生津潤肺、益氣健脾是太子參的主要功效,用于治療脾虛體倦、氣陰不足、病后虛弱、食欲不振、自汗口渴、肺燥干咳等癥狀。糖尿病在中醫(yī)中被稱為消渴癥,氣陰雙補、益氣健脾是中醫(yī)治療消渴癥的重要途徑,因此,太子參在中醫(yī)治療糖尿病的處方中被廣泛應(yīng)用。本課題組前期,利用水提醇沉法對太子多糖進行分級醇沉,得到不同級別的太子參多糖,以1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)動物模型為基礎(chǔ),對不同級別的太子參多糖進行降糖考察,發(fā)現(xiàn)各級別太子參多糖對1型糖尿病動物模型只有微弱的降糖作用,而對2型糖尿病動物模型的降糖效果明顯,其中分子量為50kDa～200kDa范圍的太子參多糖(PF40)降糖效果尤為顯著。太子參PF40多糖能夠改善2型糖尿病動物模型的胰島素耐量和糖耐量,改善胰島素抵抗。太子參多糖具有降糖作用,但對太子參多糖降糖作用的研究僅停留在太子參粗多糖層面上,對其分離提純,結(jié)構(gòu)表征沒有深入的研究,而不同純度的太子參多糖、不同分子量的太子參多糖和不同結(jié)構(gòu)的太子參多糖其降糖活性也可能具有差異。因此,本實驗利用水提醇沉法、DEAE-纖維素和不同排阻范圍的葡聚糖凝膠柱聯(lián)用的方法對太子參多糖進行分離提純,得到太子參均一多糖,并對其結(jié)構(gòu)進行解析,使太子參多糖抗糖尿病研究突破了粗多糖層面,達到了均一多糖的水平。本課題利用不同濃度的乙醇對太子參多糖分級沉淀得到太子參PF40多糖,分離得到的太子參PF40多糖進一步的分離純化得到太子參均一多糖。并利用柱前衍生化法測定太子參均一多糖的單糖組成,利用比旋光儀、UV、IR、NMR等多種波譜分析技術(shù)對太子參均一多糖的結(jié)構(gòu)進行分析,對太子參均一多糖的空間結(jié)構(gòu)做了進一步的研究。Caco-2細(xì)胞是一種人克隆的結(jié)腸腺癌細(xì)胞(human colon carcinoma cell line),其生理結(jié)構(gòu)、功能和生化作用類似于人的小腸上皮細(xì)胞,Caco-2細(xì)胞模型是近年來國內(nèi)外研究藥物小腸吸收的體外模型。太子參均一多糖自身不含發(fā)色團,本課題利用異硫氰酸熒光素(FITC)對太子參均一多糖進行熒光標(biāo)記,使其具有熒光基團便于檢測與追蹤。并且利用Caco-2細(xì)胞模型模擬人小腸上皮細(xì)胞對太子參均一多糖的吸收,探索太子參多糖的吸收途徑。本實驗通過對太子參多糖的分離純化得到均一多糖,利用現(xiàn)代波譜技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進行分析,使太子參均一多糖的構(gòu)效關(guān)系更為明確,并且利用體外模型模擬小腸吸收,研究太子參均一多糖的吸收途徑,為太子參降糖藥的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284
【圖文】：

逑到Ｃ１－，樣品再次減壓濃縮至１０ｍＬ后，冷凍干燥，既得樣品命名為０．５Ｍ。逡逑綜合所檢測試管的吸光度值，得太子參ＰＦ４０多糖的洗脫曲線，如圖１－１所示。逡逑＇邐ｌ＼邐｜邐邋０．５逡逑２０－邐Ｉ邐ｉ逡逑１邐丨邐－０．４逡逑｜邋－邋Ｉ邐！邐１逡逑１０邋＿邐ｊ＼邋！邐１邐－邋０．２逡逑＿邋］丨邋Ａ邋，逡逑０邐５０邐１００邐１５０邐２００邐２５０邐３００邐３５０邐４００邐４５０逡逑管數(shù)逡逑圖１－１太子參ＰＦ４０多糖Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ邋ＤＥ－５２洗脫曲線逡逑太子參ＰＦ４０多糖以ＤＥＡＥ－５２為柱填料，用３種不同的流動相洗脫，得到了邋６種不逡逑同的組分，其重量分別為：Ｈ－１邋為邋１７５０ｍｇ，Ｈ－２邋為邋６７６．５６ｍｇ，Ｈ－３邋為邋３２４．４０ｍｇ，０．２Ｍ－１逡逑為邋２６８．００ｍｇ，０．２Ｍ－２邋為邋２４０．４．０ｍｇ，０．５Ｍ邋為邋１９８．４２ｍｇ。逡逑２．２＿２邋Ｓ－３００ＨＲ邋柱分離逡逑２．２．２．１填料預(yù)處理�。罚担埃恚体澹樱常埃埃龋业闹盍�，力口入３Ｌ超純水，混勻，靜置３０ｍｉｎ，逡逑期間每５ｍｉｎ搖勻一次，使其充分混勻。抽濾填料，再加入蒸餾水重復(fù)上述操作２次，逡逑以確保保存Ｓ－３００ＨＲ的乙醇除干凈。抽濾填料，加蒸餾水浸泡備用。逡逑２．２．２．２填料裝柱將蒸餾水浸泡的Ｓ－３００ＨＲ柱填料導(dǎo)入抽濾瓶中

溶液使標(biāo)準(zhǔn)品濃度為４ｍｇ／ｍＬ，過０．２２ｐｍ微孔濾膜。按“３．２．１項”下的色譜條件檢測，逡逑以標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間（＆）為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品分子量的對數(shù)值為縱坐標(biāo)（ＬｏｇＭ）。得逡逑線性回歸方程ＬｏｇＭ二－０．１９００９＆＋１１．２７２３，相關(guān)系數(shù)尸０．９９３０，結(jié)果見圖１－７。逡逑Ｉ逡逑４＿逡逑■逡逑３邋Ｊ邐１邐１邐邐邐［邐＇邐１邐＇逡逑３２邐３６邐４０逡逑圖１－７標(biāo)準(zhǔn)品分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑３．２．３樣品分析準(zhǔn)確稱取太子參均一多糖Ｈ－ｌ－ｌ、Ｈ－２－ｌ、Ｈ－３－ｌ、０．２Ｍ－ｌ－ｌ、０．２Ｍ－２－ｌ、逡逑０．５Ｍ各ｌ．ＯＯｍｇ，加入０．１ｍｏｌ／ＬＮａＮＯ３溶液使樣品多糖濃度為４ｍｇ／ｍＬ。過０．２２嘩微孔逡逑濾膜，按“３．２．１項”下的色譜條件檢測，結(jié)果見圖１－８。逡逑１７逡逑

３．邐１邋Ｈ－１－２太子參均一多糖結(jié)構(gòu)的分析逡逑３．１．１多糖的單糖組成測定通過ＰＭＰ衍生化及高效液相色譜聯(lián)用對多糖的單糖組逡逑成進行測定，結(jié)果如圖２－１所示。結(jié)果顯示樣品只出現(xiàn)了單一對稱峰，通過與對照品的逡逑比較可以得出此峰為Ｄ－葡萄糖。表明了樣品多糖是由Ｄ－葡萄糖組成的。逡逑□邋ＷＵ邋＊ｊｖｔｌｔｎｓｔｆｐ２５４邋ｎ邋？邋，ＴＪＵ２）１３0ｍａ２０１３－ｔ１－０１邋ｉＷ２－４Ｗｆｌ１３１０１ＳＯ）ＣＣ０Ｃ４邋Ｄ）逡逑２０００－邐Ｉ逡逑．逡逑１０００逡逑５００．邐ｌ逡逑0邐Ｊ邐Ｊ邋Ｖ邋，邐邐邐逡逑０邐Ｓ邐１０邐１５邐＇邐２０邐？邐３０邐逡逑圖２－１邐Ｈ－１－２多糖的單糖組成分子逡逑３．１．２多糖比旋光度的測定Ｄ－葡萄糖分為ａ－異構(gòu)體和Ｐ異構(gòu)體，它們是一對非對映逡逑體�？梢酝ㄟ^比旋光度來區(qū)分，雖然這對非對映體的比旋光度都為正值，但是ａ－異構(gòu)體逡逑有相對較大的比旋光度。通過檢測得出樣品比旋光度為［ａ］２５邋Ｄ＝＋１６８．１°是較大的正值，逡逑說明了樣品多糖可能是ａ－糖苷鍵構(gòu)型的大分子多糖。逡逑３．１．３多糖的紅外光譜分析紅外光譜根據(jù)峰位、峰型及峰強來確定官能團的存在。逡逑通過樣品多糖的紅外光譜圖２－２所示

【參考文獻】

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1 林守二;黃麗英;俞曉玲;;柱前衍生化HPLC法分析人工栽培金線蓮中多糖的單糖組成[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2016年03期

2 蘇穆;;太子參多糖提取工藝的研究[J];海峽藥學(xué);2016年04期

3 廖涌;;中國糖尿病的流行病學(xué)現(xiàn)狀及展望[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年07期

4 鄭書國;趙夢秋;吳元潔;任尤楠;;丹蛭降糖膠囊對波動高糖誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞凋亡和胰島素分泌的影響[J];中成藥;2015年04期

5 王琪;柴單單;吳曉華;任麗偉;劉永年;于志文;;太子參多糖減輕高脂誘導(dǎo)的小鼠肝臟胰島素抵抗[J];中國病理生理雜志;2015年04期

6 史文濤;龐文生;胡娟;;高效凝膠色譜法測定太子參均一多糖分子量[J];中國民族民間醫(yī)藥;2015年02期

7 都增強;王文娟;楊曉琴;;降糖通脈膠囊配合西藥治療糖尿病合并末梢神經(jīng)炎療效觀察[J];陜西中醫(yī);2014年08期

8 李石軍;王凱平;汪柳;辜明;曾芳;張玉;;香菇多糖LNT_2的提取分離純化、結(jié)構(gòu)及體外抗腫瘤活性研究[J];中草藥;2014年09期

9 劉修斌;馮利;;淺談糖尿病腎病辨治體會[J];光明中醫(yī);2013年09期

10 趙春華;;糖尿病足潰瘍期的換藥觀察與護理[J];河南科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

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1 史文濤;太子參抗T2DM多糖及遞藥軌跡研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 陳錦龍;閩產(chǎn)柘榮太子參多糖抗糖尿病藥效篩選及結(jié)構(gòu)表征[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2014年

3 丁濤;灰樹花多糖的FITC熒光標(biāo)記及Caco-2細(xì)胞模型對其的吸收與轉(zhuǎn)運研究[D];江蘇師范大學(xué);2014年

4 林峻丞;中藥結(jié)合八段錦治療2型糖尿病的療效觀察[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

本文編號：2788624