【摘要】：背景疼痛是目前臨床中最為常見的癥狀之一,令患者的身心受到極大的創(chuàng)傷,影響患者的正常生活。神經(jīng)病理性疼痛(Neuropathic Pain,NP)及炎性疼痛(Inflammatory Pain,IP)更是疼痛中極具代表性的疼痛類型。本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)元胡止痛方可能的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),明確了元胡止痛方治療疼痛的藥效,并通過藥代動力學(xué)發(fā)現(xiàn)元胡、白芷可能的配伍機(jī)制為增加血藥濃度。但元胡、白芷配伍鎮(zhèn)痛的具體分子機(jī)制尚不明晰。基于以上思考,本研究從元胡、白芷配伍治療神經(jīng)病理性疼痛及炎性痛的藥效評價、分子機(jī)制這兩方面出發(fā)進(jìn)行探究,為元胡止痛方臨床應(yīng)用提供理論及實驗依據(jù)。研究內(nèi)容本研究從元胡止痛方及其組方單藥元胡、白芷配伍鎮(zhèn)痛藥效評價和分子機(jī)制這兩部分展開。第一部分,元胡止痛方及單味藥元胡、白芷對疼痛模型行為學(xué)研究本部分使用坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷模型(Chronic constriction injury,CCI)及完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的炎性疼痛模型(Complete Freund's adjuvant,CFA)進(jìn)行藥效學(xué)評價。并且根據(jù)兩種疼痛的特點,設(shè)置給藥時間,觀察復(fù)方及拆方后單味藥對這兩種模型的機(jī)械痛閾值及熱痛閾值影響。CCI組分別給予醋元胡提取物(YH)、白芷提取物(BZ)及元胡止痛方(YZP),造模后第6天開始給藥,連續(xù)給藥5天�？疾齑笫驝CI造模前1天,造模后1、3、5、7、9天患側(cè)的熱痛閾值(Thermal withdrawal latency,TWL)和機(jī)械痛閾值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)變化。CFA模型組給藥設(shè)置與CCI組一致,造模后30min后給藥,連續(xù)給藥9天。考察大鼠CFA造模前1天,造模后1、3、5、7天患側(cè)的熱痛閾值(TWL)和機(jī)械痛閾值(MWT)變化。第二部分,元胡止痛方及單味藥元胡、白芷治療疼痛分子機(jī)制探索本部分根據(jù)前期實驗及文獻(xiàn)調(diào)研結(jié)果,CCI模型選取術(shù)后第10天(給藥第5天)的患側(cè)脊髓組織;CFA模型選取術(shù)后第8天(給藥第9天)的患側(cè)脊髓組織進(jìn)對mRNA進(jìn)行RNA-seq二代測序。分別篩選兩種模型給藥后回調(diào)的差異基因,并對此部分差異mRNA進(jìn)行GO功能富集分析。探索元胡、白芷協(xié)同鎮(zhèn)痛可能起到作用的候選mRNA及其參與的生物過程。并通過對元胡止痛方中14種入血成分進(jìn)行反向找靶,探究其可能的直接作用位點及參與的通路。研究結(jié)果第一部分,元胡止痛方及單味藥元胡、白芷對疼痛模型行為學(xué)研究CCI模型造模后,除Sham組外均出現(xiàn)患側(cè)足蜷縮或外翻等異樣形態(tài),MWT及TWL造模后呈現(xiàn)下降趨勢,明顯低于術(shù)前,與Sham組相比具有顯著性差異至少滿足P0.05,術(shù)后第7天(給藥第2天)YZP組及YH組MWT及TWL與CCI組相比具有顯著性差異至少滿足P0.05。BZ組給藥后,MWT及TWL無明顯差異。但YZP組整體痛閾值與YH組相比處在略高的水平。CFA造模后,除Sham組均出現(xiàn)患側(cè)足腫脹等異樣形態(tài),MWT及TWL造模后呈現(xiàn)下降趨勢,CFA模型組與Sham組相比具有顯著性差異至少滿足P0.05,給藥組中YZP組及YH組的MWT及TWL與CFA模型組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異至少滿足P0.05,BZ組的MWT及TWL實驗全程與CFA模型組相近。但YZP組整體痛閾值與YH組相比處在略高的水平。第二部分,元胡止痛方及單味藥元胡、白芷治療疼痛分子機(jī)制探索元胡止痛方及單味藥元胡、白芷對CCI模型共同回調(diào)mRNA共12個,分別為 Bst2、Car4、Ccdc69、Cdkn1c、Dpt、Fam64a、Mki67、Mst1r、Siglec1、Tagln、Tmem14c、Tom112,GO富集分析結(jié)果顯示復(fù)方與單味藥共同參與生物過程為炎癥反應(yīng)過程、機(jī)體防御過程、損傷響應(yīng)過程以及金屬離子傳輸,另有免疫調(diào)節(jié)相關(guān)和血管調(diào)節(jié)相關(guān)的生物過程。元胡止痛方及單味藥元胡、白芷共同回調(diào)mRNA共11個,分別為Aatf、Alad、Ate1、Cntnap5c、Fam122b、LOC102723236、Myb12、Myg1、Pknox1、Tmem14c、Tmod2,GO富集分析結(jié)果顯示復(fù)方與單味藥共同參與生物過程大多集中在蛋白水解、代謝、血管調(diào)節(jié)等相關(guān)過程。元胡、白芷協(xié)同作用疼痛可能是通過直接作用cAMP、PI3K-Akt、MAPK這三條信號通路上的部分靶點實現(xiàn)的,元胡可能作用于GCPR、JNK及p38,白芷可作用于BRAF,二者又可能共同作用于PI3K、PDE4、RTK。給藥元胡止痛方后,CCI 回調(diào) mRNA 中 T1r8、Dcn、Comp、Bmmp6、Igf2、I11rn 等;CFA 回調(diào) mRNA中Wnt16、Wnt5b、Hif1an、Itgb4,Co12a1、Thbs3等均與這三條通路有著直接或間接的關(guān)系。結(jié)論本研究證明元胡止痛方及其組成元胡可改善CCI模型及CFA模型誘導(dǎo)的機(jī)械痛敏及熱痛敏。拆方劑量下白芷對這兩種模型無鎮(zhèn)痛作用。復(fù)方效果在一定程度上優(yōu)于單味藥。元胡止痛方中單味藥組成元胡、白芷協(xié)同干預(yù)神經(jīng)病理性疼痛可能是通過作用于脊髓組織的 Bst2、Car4、Ccdc69、Cdkn1c、Dpt、Fam64a、Mki67、Mst1r、Siglec1、Tagln、Tmem14c、Tom112及干預(yù)炎癥反應(yīng)、機(jī)體防御、損傷響應(yīng)、金屬離子傳輸以及免疫調(diào)節(jié)相關(guān)和血管調(diào)節(jié)相關(guān)的生物過程。干預(yù)炎性疼痛能是通過作用于脊髓組織的 Aatf、A1ad、Ate1、Cntnap5c、Fam122b、LOC102723236、Myb12、Myg1、Pknox1、Tmem14c、Tmod2及干預(yù)蛋白水解、代謝、血管調(diào)節(jié)等相關(guān)過程。元胡止痛方中元胡生物堿類成分可能直接作用于GCPR、JNK及p38,白芷香豆素類成分可能直接作用于BRAF,二者又可能共同作用于PI3K、PDE4、RTK。從而通過cAMP、PI3K-Akt、MAPK通路達(dá)到協(xié)同鎮(zhèn)痛的效果。
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖１－１邋ＣＣＩ造模后３天ＳＤ大鼠足部形態(tài)圖逡逑３．２機(jī)械痛閾的變化逡逑

圖１－２元胡止痛方及單味藥元胡、白芷對大鼠ＣＣＩ模型機(jī)械痛的影響逡逑

圖１－３元胡止痛方及單味藥元胡、白芷對大鼠ＣＣＩ模型熱痛痛閾的影響逡逑

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本文編號：2788575