【摘要】：缺血性心臟病是全人類發(fā)病率和死亡率最高的常見疾病之一,臨床表明及時恢復缺血心肌的血運供應(再灌注治療)可有效減少心肌梗塞面積、提高長期的心肌功能、降低死亡率。但研究發(fā)現(xiàn),再灌注療法可加重缺血區(qū)域組織的損傷,臨床上主要表現(xiàn)為心肌頓抑、心律失常、心臟微血管“無復流”現(xiàn)象的發(fā)生。其中,心臟微血管“無復流”的發(fā)生與內皮細胞功能障礙密切相關,內皮細胞功能障礙在心肌缺血的起始和發(fā)展階段均起著重要的作用。因此,保護內皮細胞功能對抗心肌缺血再灌注損傷有著重要的意義。中醫(yī)理論認為心肌缺血再灌注損傷“無復流”現(xiàn)象的發(fā)生與氣虛血瘀密切相關。其中心氣虛又是造成血瘀的重要原因,益氣活血法是中醫(yī)治療MIRI的主要手段。黃芪是傳統(tǒng)的補氣中藥,在臨床治療心肌缺血再灌注損傷療效確定。黃芪多糖是黃芪的主要成分之一,研究表明黃芪多糖具有抗氧化、抗炎、增加內皮細胞活性等作用。本實驗以人臍靜脈內皮細胞為靶細胞,探討黃芪多糖對缺氧復氧損傷內皮細胞氧化應激機制及線粒體的影響。目的:通過建立臍靜脈內皮細胞缺氧再復氧損傷模型,觀察黃芪多糖對缺氧再復氧損傷臍靜脈內皮細胞ROS、LDH、MDA含量、線粒體膜電位、線粒體形態(tài)、Drp1表達的影響。探討黃芪多糖對缺氧再復氧損傷內皮細胞氧化反應及線粒體的影響。方法:將培養(yǎng)至5代的臍靜脈內皮細胞分為正常對照組、模型組,模型+APS 25μg·ml-1組、模型+陽性藥物組。其中,模型及各給藥組細胞鋪板2h貼壁后,換無糖造模液,置于三氣培養(yǎng)箱(5%CO2、94%N2、1%02)中培養(yǎng)4h進行缺氧,之后更換為完全培養(yǎng)基放入正常培養(yǎng)箱(5%O2、95%O2)中培養(yǎng)16h進行再復氧;模型和各藥物組分別于缺氧和復氧的同時加入相應濃度的藥物;正常對照組始終在正常條件下培養(yǎng)24h。MTT法檢測APS對缺氧再復氧損傷臍靜脈內皮細胞活性的影響。觀察APS對缺氧再復氧損傷臍靜脈內皮細胞內活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)、乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量、線粒體膜電位(△m)、線粒體形態(tài)及線粒體分裂蛋白Drp1表達的影響。結果:與正常對照組相比,模型組細胞內ROS、MDA含量、LDH漏出率均顯著高于正常對照組(P0.05)、線粒體膜電位低于正常對照組(P0.05)、Drpl表達量增多,說明缺氧再復氧造成臍靜脈內皮細胞中自由基、脂質過氧化產物生成增多,發(fā)生氧化應激;線粒體分裂增加,線粒體分裂蛋白Drpl表達增多。其中模型+APS25μg·ml-1組、陽性藥物組細胞內ROS、MDA含量、LDH漏出率、Drpl表達均顯著低于模型組(P0.05)、線粒體膜電位高于模型組(P0.05),說明黃芪多糖能夠減少缺氧再復氧損傷臍靜脈內皮細胞中ROS、MDA生成、LDH漏出,減少線粒體分裂,提高缺氧再復氧損傷臍靜脈內皮細胞線粒體膜電位。結論:黃芪多糖對缺氧再復氧損傷臍靜脈內皮細胞具有保護作用,其機制可能與黃芪多糖抑制缺氧再復氧損傷血管內皮細胞自由基、脂質過氧化產物的生成、減少線粒體分裂,抗氧化應激、保護線粒體功能有關。
【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

統(tǒng)計學意義（Ｐ＜0．0５）。說明缺氧２ｈ即對細胞出現(xiàn)損傷，缺氧６型組的ＯＤ值最低，說明損傷最為明顯。結果見表一。逡逑下顯示，較正常對照組，缺氧２ｈ復氧１６ｈ組、缺氧４ｈ復氧１６ｈ組１６ｈ組細胞數(shù)目均減少，其中，缺氧６ｈ復氧１６ｈ組細胞數(shù)目最少。逡逑■邋正常對照組邐缺氧２ｈ復氧１６ｈ組逡逑

模型組細胞內ＭＤＡ平均含量為１．８３±０．３７，較正常對照組細胞內ＭＤＡ平均逡逑含量１．１６±０．１１顯著升高（Ｐ＜０．０５）；與模型組比較，模型＋ＡＰＳ組、模型＋Ｍｅｔｐｒｏｌｏｌ逡逑組ＭＤＡ含量分別為０．９０±０．０６、１．２±０．０７顯著減少（Ｐ＜０．０５）。結果見圖１、表逡逑４。逡逑２，５１邐Ｉ邋Ｉ正常對照組逡逑＊邐模型組逡逑■■模型＋ＡＰＳ逡逑模型＋ＭｅｔｏｐｒｏｌｏＩ逡逑１邋１．邋５邋－邐＊：邋？逡逑ｒＨ邋．邋１１逡逑丨，Ｉ邐■邋■逡逑圖１各組ＨＵＶＥＣ邋ＭＤＡ含量的比較逡逑注：與正常對照組比較，卞＜０．０５；與模型組比較，ＡＰ＜０．０５逡逑表４各組訊＾￡＃ⅲ鞍撕嘬康謀冉希ǎ怠潰擔嗑保保劍矗

本文編號：2788669