發(fā)布時(shí)間：2020-08-10 09:41

【摘要】：目的:構(gòu)建缺氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,并以此模型驗(yàn)證蜘蛛香有效部位對(duì)抗缺氧的療效,同時(shí)動(dòng)態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行為學(xué)和組織形態(tài)學(xué)改變,并考察其表觀遺傳改變,以期探索表觀遺傳與缺氧及蜘蛛香有效部位療效相關(guān)性。方法:1.缺氧動(dòng)物模型的構(gòu)建20只SD雌性發(fā)情期大鼠,按照2:1的比例隨機(jī)與4月齡性成熟SD雄鼠同籠交配,24小時(shí)后,分別對(duì)每只雌性大鼠進(jìn)行陰道涂片檢測(cè),確定已經(jīng)交配成功,將孕鼠隨機(jī)分成4組:空白組、模型組、蜘蛛香治療組、紅景天組;當(dāng)日計(jì)為孕1天,此后進(jìn)行缺氧處理,即將蜘蛛香組、紅景天組、模型組孕鼠每日定時(shí)放入三氣孵箱6小時(shí),設(shè)置孵箱氧氣濃度在8%,二氧化碳濃度4%,其余為氮?dú)?期間不間斷觀察大鼠生命體征;空白組放置于同樣濕度和溫度的環(huán)境中,期間不間斷觀察大鼠生命體征;造模持續(xù)7天,造模期間,每日觀察大鼠精神狀態(tài)、體重、食量、大便性狀、睡眠情況等一般情況。2.蜘蛛香治療缺氧的行為學(xué)觀察與組織病理學(xué)評(píng)價(jià)20只SD大鼠隨機(jī)分為4組,空白組、模型組、紅景天組及蜘蛛香治療組。除空白組外各組按上述方法進(jìn)行缺氧模型復(fù)制,模型復(fù)制成功后,紅景天組灌胃諾迪康膠囊CMC-Na溶液,蜘蛛香組灌胃蜘蛛香環(huán)烯醚萜CMC-Na溶液,空白組與模型組灌胃CMC-Na溶液,各組灌胃連續(xù)7天。治療期間每日觀察大鼠體重、食量、大便性狀、活動(dòng)度、睡眠等一般情況,進(jìn)行疾病指數(shù)評(píng)價(jià);治療結(jié)束等待至孕鼠生產(chǎn),期間每日觀察孕鼠體重、食量、大便性狀、睡眠情況等一般情況;觀察子一代大鼠大腦出生后大體情況,分別對(duì)7日齡和30日齡子一代大鼠進(jìn)行大腦組織大體損傷指數(shù),大腦組織病理切片HE染色觀察分級(jí)評(píng)分;對(duì)30日齡子一代大鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),測(cè)定鼠的定位航行和空間搜索能力,以推斷子一代鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,檢測(cè)空間學(xué)習(xí)記憶功能。3.Me DIP-seq(Methylated DNA Immunoprecipitation Sequencing甲基化DNA免疫共沉淀測(cè)序)法差異甲基化分析動(dòng)物分組,模型復(fù)制及治療同上。分別取子一代30天大鼠大腦組織,提取大腦總DNA進(jìn)行Me DIP-seq法差異甲基化分析,在全基因組水平上進(jìn)行高精度的Cp G密集的高甲基化區(qū)域研究,快速有效地尋找基因組上的甲基化區(qū)域,從而比較不同樣本間的DNA甲基化修飾模式的差異。結(jié)果:造模中,模型組、蜘蛛香組、紅景天組大鼠出現(xiàn)精神萎靡,嗜睡懶動(dòng),仰面呼吸,呼吸急促,飲食體重明顯下降,活動(dòng)耐力降低,體毛枯槁雜亂,大便減少等符合大鼠低張缺氧的表現(xiàn);空白組無上述異常表現(xiàn)。蜘蛛香治療組實(shí)驗(yàn)大鼠食量增加,與空白組大鼠相比無顯著差異(P0.05),體重在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前尚未達(dá)到空白組大鼠體重,但較模型組增加顯著(P0.05),大鼠反應(yīng)較靈敏,活動(dòng)度增加,Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果與空白組無顯著差異,但與模型組有顯著差異;病理切片HE染色鏡下觀察大腦海馬細(xì)胞損傷不明顯,與模型組相比差異顯著(P0.05)。與紅景天組比較,蜘蛛香治療組實(shí)驗(yàn)大鼠一般狀態(tài)情況明顯好轉(zhuǎn),體重食量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果二者無明顯差異,病理切片HE染色鏡下觀察無明顯差異。Me DIP-seq法差異甲基化分析我們發(fā)現(xiàn)缺氧環(huán)境可以引起機(jī)體發(fā)生甲基化修飾,且蜘蛛香環(huán)烯醚萜治療后具有與疾病模型和紅景天苷治療組不同的甲基化修飾。蜘蛛香環(huán)烯醚萜對(duì)缺氧的干預(yù)機(jī)制可能和紅景天不同。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)選擇造模方法合理,成功復(fù)制出符合缺氧病變特征的模型。蜘蛛香環(huán)烯醚萜治療效果肯定,與紅景天苷相似,也能顯著改善缺氧模型大鼠恢復(fù)精神和體質(zhì)狀態(tài),缺氧可以引起機(jī)體發(fā)生甲基化修飾的改變,蜘蛛香環(huán)烯醚萜治療后的缺氧大鼠與紅景天苷治療組及疾病模型組發(fā)生的甲基化修飾在基因和信號(hào)通路上的改變不同。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1-1 SD 大鼠精子涂片（X400）圖 1-2 SD 大鼠精子涂片（X100）般情況及體征白對(duì)照組大鼠食欲良好，進(jìn)食飲水正常，體重增加明顯，全身活動(dòng)度良好，反應(yīng)靈敏。

各組體重

各組食量

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

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本文編號(hào)：2787912