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疏肝理氣、清熱利濕對CS豚鼠膽固醇代謝影響的機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2020-08-10 07:34
【摘要】:目的:運(yùn)用高膽固醇致石飼料誘發(fā)法制備膽囊膽固醇結(jié)石(Cholesterol stone,CS)豚鼠模型,以柴胡疏肝散、龍膽瀉肝湯、柴胡疏肝散合龍膽瀉肝湯對其進(jìn)行干預(yù)。觀察干預(yù)后結(jié)石的生成情況、肝臟的組織形態(tài),檢測血清總膽固醇(Total Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、膽汁膽固醇(Cholesterol,T-CHO)、膽汁酸(Total bile acid,TBA)含量以及測定肝臟膽固醇7α-羥化酶(Cholestrol 7-alpha hydroxyl-lase,CYP7A1)、膽汁酸鹽輸出泵(Bile salt pump,BSEP)mRNA表達(dá)量。從血脂及肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因角度,探討疏肝理氣、清熱利濕對CS豚鼠膽固醇代謝的影響及其作用機(jī)制。方法:普通級豚鼠50只,雌雄各半,按隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)分為空白組8只,實(shí)驗(yàn)組42只,空白組予普通飼料喂養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組予高膽固醇致石飼料喂養(yǎng)以制備CS模型,造模8周后實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)取材10只以檢測造模是否成功。造模成功后,將實(shí)驗(yàn)組豚鼠隨機(jī)分為模型組、柴胡疏肝散組、龍膽瀉肝湯組、聯(lián)合用藥組,每組8只,連續(xù)灌胃4周(空白組及模型組予生理鹽水、藥物干預(yù)組分別予柴胡疏肝散、龍膽瀉肝湯、柴胡疏肝散加龍膽瀉肝湯)。末次給藥24h后,稱量各組豚鼠體重,水合氯醛麻醉后,予心間采血,采肝臟及膽囊組織,觀察結(jié)石生成情況;用蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)觀察肝臟的組織形態(tài);用終點(diǎn)法測TC、TG含量,消除法測LDL-C含量,單試劑比色法測T-CHO含量,用酶比色法測TBA含量,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)法檢測肝臟CYP7A1、BSEPmRNA表達(dá)量。結(jié)果:1.體重比較:與空白組相比,模型組、柴胡疏肝散組、龍膽瀉肝湯組、聯(lián)合用藥組豚鼠體重均有顯著下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,柴胡疏肝散組、龍膽瀉肝湯組、聯(lián)合用藥組豚鼠體重均有升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);藥物干預(yù)各組豚鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.成石情況比較:空白組、模型組、柴胡疏肝散組、龍膽瀉肝湯組、聯(lián)合用藥組成石率分別是0、100%、25.0%、37.5%、50.0%。3.肝臟HE染色顯示:模型組豚鼠肝細(xì)胞脂肪變性明顯,并伴有不同程度炎癥細(xì)胞浸潤,胞漿疏松,內(nèi)含大的脂肪滴;藥物干預(yù)各組豚鼠肝細(xì)胞脂肪變性和炎癥壞死情況明顯改善;空白組肝細(xì)胞形態(tài)正常,胞漿內(nèi)無脂滴蓄積。4.血清TC、TG、LDL-C含量比較:與空白組相比,模型組血清TC、TG、LDL-C含量顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,柴胡疏肝散組、龍膽瀉肝湯組血清TC、TG、LDL-C含量顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,聯(lián)合用藥組血清TC、TG降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與模型組相比,聯(lián)合用藥組血清LDL-C含量降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);藥物干預(yù)各組三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.膽汁T-CHO、TBA含量比較:與空白組相比,模型組膽汁T-CHO含量顯著升高,TBA含量顯著降低,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,柴胡疏肝散組、龍膽瀉肝湯組、聯(lián)合用藥組膽汁T-CHO含量顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,柴胡疏肝散組膽汁TBA含量顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),龍膽瀉肝湯組、聯(lián)合用藥組膽汁TBA含量升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);藥物干預(yù)各組三組之間膽汁T-CHO、TBA含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。6.肝臟CYP7A1、BSEPmRNA表達(dá)量比較:與空白組相比,模型組豚鼠肝臟CYP7A1、BSEP mRNA表達(dá)量顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);與模型組相比,柴胡疏肝散組豚鼠肝臟CYP7A1、BSEP mRNA表達(dá)量顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),龍膽瀉肝湯組豚鼠肝臟CYP7A1mRNA表達(dá)量升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),龍膽瀉肝湯組豚鼠肝臟BSEPmRNA表達(dá)量顯著升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),聯(lián)合用藥組豚鼠肝臟BSEPmRNA表達(dá)量升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),聯(lián)合用藥組豚鼠肝臟CYP7A1mRNA表達(dá)量升高,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);藥物干預(yù)各組三組之間肝臟CYP7A1、BSEPmRNA表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1.疏肝理氣、清熱利濕法可以通過降低血脂濃度,調(diào)節(jié)膽固醇代謝來發(fā)揮其利膽排石作用。2.疏肝理氣、清熱利濕法可以通過上調(diào)肝臟CYP7A1、BSEPmRNA表達(dá)量,調(diào)節(jié)膽固醇代謝來發(fā)揮其利膽排石作用。
【學(xué)位授予單位】:福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R285.5

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