【摘要】：鹿角脫盤(pán)作為可再生的生物資源,已有2000多年的用藥歷史,具有產(chǎn)量大容易獲得等優(yōu)點(diǎn),且抗腫瘤作用明確,但其抗腫瘤有效部位不清,作用機(jī)制不明;骨化程度高,質(zhì)地堅(jiān)硬不宜直接使用,極大限制了鹿角脫盤(pán)的開(kāi)發(fā)利用;傳統(tǒng)加工多以水煎煮法為主,方法單一,對(duì)鹿角脫盤(pán)加工方法和抗腫瘤作用的研究已勢(shì)在必行。本實(shí)驗(yàn),首先,利用酸、堿、鹽、醇和水5種具有代表性的溶液對(duì)鹿角脫盤(pán)進(jìn)行提取,優(yōu)化得到最佳工藝參數(shù)。其次,采用柱前衍生RP-HPLC法對(duì)5種提取物的21種氨基酸組成以及含量進(jìn)行比較分析,初步探索其抗腫瘤作用物質(zhì)基礎(chǔ)。最后,采用肝癌H22荷瘤小鼠模型比較5種提取物中抗肝癌活性,初步篩選抗肝癌活性部位;從免疫學(xué)角度闡釋作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1、鹿角脫盤(pán)酸溶液、堿溶液、鹽液液、醇溶液及水溶液提取物最佳工藝參數(shù)分別為:提取溫度90℃、提取時(shí)間130min、料液比1:25;提取溫度90℃、提取時(shí)間130min、料液比1:20;提取溫度80℃、提取時(shí)間130min、料液比1:25;提取溫度70℃、提取時(shí)間150min、料液比1:25;提取溫度100℃、提取時(shí)間130min、料液比1:26。鹿角脫盤(pán)5種不同提取物提取率由大到小排列順序?yàn)?酸提取物㧐堿提取物㧐水提取物㧐鹽提取物㧐醇提取物,其中鹽提取物和醇提取物提取率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。2、鹿角脫盤(pán)及其5種提取物中9種藥用氨基酸占總氨基酸的比例均在60%以上,其中,堿提取物中Tyr、Leu、Lys、Asp、Phe、Met和Glu 7種氨基酸含量最高(P㩳0.05);水提取物中Asp、Gly、Met、Glu和Arg 5種氨基酸含量最高(P㩳0.05);醇提取物中Gly、Arg、Phe、Met和Glu 5種氨基酸含量最高(P㩳0.05);鹿角脫盤(pán)堿提取物的E/T值和E/N值高于同類(lèi)型的阿膠以及海參膠原。鹿角脫盤(pán)5種提取物氨基酸含量由高到低依次為:水提取物㧐堿提取物㧐醇提取物㧐酸提取物㧐鹽提取物㧐鹿角脫盤(pán)超微粉,其中水提取物、堿提取物和醇提取物差異不顯著(P㧐0.05)。3、相較模型組,鹿角脫盤(pán)及其5種提取物均能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡(P㩳0.05);保護(hù)脾臟組織結(jié)構(gòu),誘導(dǎo)腫瘤組織壞死;提高免疫器官指數(shù)和脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(P㩳0.05);提高脾臟和外周血中CD4+/CD8+比值(P㩳0.05),提高血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-γ的含量(P㩳0.05),同時(shí)降低免疫抑制細(xì)胞因子TGF-β的含量(P㩳0.05),提高肝癌H22荷瘤小鼠的細(xì)胞免疫水平;提高血清中三種免疫球蛋白IgE、IgG、IgM的含量(P㩳0.05),提高荷瘤小鼠體液免疫水平。不同提取物抗腫瘤作用不同,其中堿提取物效果最好。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R284
【圖文】：

圖 1-1 酸溶液提取物各因素交互作用的響應(yīng)曲面與等高線(xiàn)圖Fig. 1-1 Response surface and contour plots for the pair-wise ineractive effect of three variables1.2.2.2 鹿角脫盤(pán)堿溶液提取物提取工藝優(yōu)化采用 Design Expert 8.0.6 軟件以提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行 3 因素 3 水平的 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 1-14 所示。表 1-14 堿提取物響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（x ±SD, n=3）Tab. 1-14 Design and results of response surface experiment of alkaline（x ±SD, n=3）編號(hào) 溫度代碼 時(shí)間代碼 料液比代碼 提取率（%）1 -1 -1 0 18.98±1.122 1 -1 0 20.32±1.083 -1 1 0 21.34±1.034 1 1 0 23.83±1.285 -1 0 -1 20.01±1.126 1 0 -1 21.59±1.277 -1 0 1 22.07±1.308 1 0 1 23.04±1.12

圖 1-2 堿溶液提取物各因素交互作用的響應(yīng)曲面與等高線(xiàn)圖Fig. 1-2 Response surface and contour plots for the pair-wise ineractive effect of three variables1.2.2.3 鹿角脫盤(pán)鹽溶液提取物提取工藝優(yōu)化采用 Design Expert 8.0.6 軟件以提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行 3 因素 3 水平的 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 1-16 所示。表 1-16 鹽提取物響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（x ±SD, n=3）Tab. 1-16 Design and results of response surface experiment of NaCl（x ±SD, n=3）編號(hào) 溫度代碼 時(shí)間代碼 料液比代碼 提取率（%）1 -1 -1 0 6.36±0.962 1 -1 0 7.75±1.063 -1 1 0 8.43±0.994 1 1 0 9.01±1.225 -1 0 -1 6.53±1.106 1 0 -1 7.43±1.217 -1 0 1 7.76±1.16

圖 1-3 鹽溶液提取物各因素交互作用的響應(yīng)曲面與等高線(xiàn)圖Fig. 1-3 Response surface and contour plots for the pair-wise ineractive effect of three variables1.2.2.4 鹿角脫盤(pán)醇溶液提取物提取工藝優(yōu)化采用 Design Expert 8.0.6 軟件以提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行 3 因素 3 水平的 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 1-18 所示。表 1-18 醇提取物響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（x ±SD, n=3）Tab. 1-18 Design and results of response surface experiment of ethanol（x ±SD, n=3）編號(hào) 溫度代碼 時(shí)間代碼 料液比代碼 提取率（%）1 -1 -1 0 5.79±1.212 1 -1 0 7.25±1.023 -1 1 0 7.32±0.934 1 1 0 7.90±1.145 -1 0 -1 5.91±1.126 1 0 -1 7.20±1.177 -1 0 1 7.06±1.128 1 0 1 7.98±1.05

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本文編號(hào)：2785256