【摘要】：黃檗(Phellodendron amurense Rupr.)系蕓香科黃檗屬植物,是孑遺種,是中國(guó)傳統(tǒng)中藥材關(guān)黃柏的基源植物,還是珍貴的用材樹種,全身是寶,集保護(hù)、藥用、經(jīng)濟(jì)等價(jià)值于一身。一直以來(lái)都是研究的熱點(diǎn),由于大量采伐和破壞,野生黃檗資源急劇衰減,現(xiàn)已成國(guó)家二級(jí)保護(hù)樹種。一直以來(lái)關(guān)于黃檗的研究很多,但對(duì)黃檗愈傷組織的開發(fā)利用鮮有報(bào)道,且研究誘導(dǎo)黃檗愈傷組織培養(yǎng)條件的影響和優(yōu)化以及愈傷組織中生物堿積累和其提取物抗氧化活性的研究,目前尚未報(bào)道。本文以黃檗愈傷組織為基礎(chǔ),探究了誘導(dǎo)愈傷的最優(yōu)培養(yǎng)條件、有效成分積累量及抗氧能力。為保護(hù)野生黃檗、解決小檗堿藥源供應(yīng)緊張問(wèn)題以及其抗氧化功能開發(fā)利用提供一些參考。1、通過(guò)單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)進(jìn)行分析與設(shè)計(jì),研究了誘導(dǎo)黃檗愈傷組織的最優(yōu)培養(yǎng)條件。針對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的多元回歸擬合之后所得回歸模型。通過(guò)對(duì)其模型的各項(xiàng)數(shù)據(jù)圖表分析,且為了方便進(jìn)行試驗(yàn),設(shè)置最優(yōu)條件:蔗糖18g/L、含氮量1.ON、6-BA1.4mg/L,在此條件下重復(fù)3次試驗(yàn),最終所得誘導(dǎo)率約為97%。2、利用超聲波法和高效液相色譜法對(duì)五種不同誘導(dǎo)培養(yǎng)因素下產(chǎn)出的黃檗愈傷組織中生物堿進(jìn)行提取和測(cè)定,探究不同因素對(duì)黃檗愈傷組織中的生物堿積累的影響。綜合結(jié)果,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)總體黃檗愈傷組織中小檗堿積累量大于藥根堿含量,且掌葉防己堿含量甚少,蔗糖和含氮量對(duì)有效成分積累量影響最大。其中光照條件下小檗堿和掌葉防己堿積累量最大,分別約為1.40%和0.18%,而含氮量為2N時(shí),藥根堿積累量最大,約為0.81%。在選取因素條件時(shí),為了使愈傷中能夠積累較多的次生代謝物時(shí),還應(yīng)綜合考慮此條件下的愈傷組織的生長(zhǎng)狀態(tài)、遺傳穩(wěn)定性、再生能力等。3、使用分光光度計(jì)法,以最優(yōu)條件誘導(dǎo)培養(yǎng)出的黃檗愈傷組織和黃檗樹皮為材料,測(cè)定了其各自的體外抗氧化活性,包括:DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力、ABTS自由基清除能力。通過(guò)研究,當(dāng)溶液體積分?jǐn)?shù)為100%時(shí),黃檗愈傷組織與黃檗樹皮的自由基清除率均為90%以上兩者幾乎相等,且還原能力均較強(qiáng),具有一定程度的抗氧化能力。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285;S567.19
【圖文】：

而在綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)之上，選取適宜的誘導(dǎo)條件和范圍，應(yīng)用響應(yīng)面逡逑的設(shè)計(jì)方法進(jìn)行試驗(yàn)，按照所得到的最優(yōu)的誘導(dǎo)條件培養(yǎng)出的黃檗愈傷組織（見(jiàn)逡逑圖２－４Ｄ），其繁殖速度較快、生長(zhǎng)旺盛，不易褐化，質(zhì)地疏松，更適合下一階段的逡逑增殖。逡逑（邋；逡逑ｆｔ邐－＃?邐！逡逑圖２－４黃檗愈傷組織逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｃａｌｌｕｓ邋ｏｆ邋Ｐ．ａｍｕｒｅｎｓｅ逡逑（Ａ：培養(yǎng)初始階段Ｂ：有光條件Ｃ：無(wú)光條件Ｄ：最優(yōu)條件）逡逑２．６本章小結(jié)逡逑本章對(duì)黃檗愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)進(jìn)行了大致兩部分的試驗(yàn)和探討，首先是對(duì)逡逑幾種主要影響因子的單因素試驗(yàn)，包括２，４－Ｄ和６－ＢＡ激素組合以及其他非激素因逡逑素（蔗糖濃度、含氮量、外植體、光照強(qiáng)度），其次，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，不同逡逑因素中蔗糖濃度、含氮量和激素組合對(duì)黃檗愈傷組織誘導(dǎo)及其生長(zhǎng)的影響較較明逡逑顯，因此，選取這三大影響因素及其適當(dāng)范圍進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，尋找最佳的逡逑誘導(dǎo)培養(yǎng)條件。通過(guò)研究，發(fā)現(xiàn)如下：逡逑Ｋ激素組合為２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ；蔗糖濃度為２０ｇ／Ｌ；含氮量為Ｎ；逡逑外植體為莖段；光照５５＾１0１0１邋ｍＡ＇上述條件對(duì)黃檗的愈傷組織誘導(dǎo)效果最好，逡逑－２２－逡逑

３）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制逡逑確稱量小檗堿、藥根堿、掌葉防己堿標(biāo)準(zhǔn)品分別約為５毫克、１．３毫克、４將上述流動(dòng)相溶液各自制成ｌ0ｍｌ作為它們各自的母液。分別吸取５ｍｌ三合并成１５ｍｌ，搖勻，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液。逡逑４）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制逡逑確吸量小檗堿、藥根堿、掌葉防己堿母液，依次吸０．５ｍｌ、ｌｍｌ、２ｍｌ、３ｍ于５ｍｌ容量瓶混成標(biāo)準(zhǔn)溶液，將流動(dòng)相溶液用作溶劑以制備恒定體積、搖至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)上述色譜條件，分析不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)量每個(gè)樣品三次，并取出峰面積的平均值。作為回歸計(jì)算，使用質(zhì)量ｇ／ｍｌ）小檗堿Ｘｌ、藥根堿ｘ２、掌葉防己堿ｘ３作為橫坐標(biāo)，峰面積值ｙ作，小檗堿ｙｉ、藥根堿ｙ２、掌葉防己堿ｙ３的回歸方程和相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)圖３－種標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖３－２、圖３－３、圖３－４）。逡逑ｉ＝邋１９６１．６ｘ１邋－邋１９８．９８邋Ｒ２邋＝邋０．９９８７逡逑２邋＝邋６５５．３２ｘ２邋－邋７８．０９７邋Ｒ２邋＝邋０．９９８９逡逑邋＝邋２０２８ｘ３邋－邋１９６．２２邋Ｒ２邋＝邋０．９９８８逡逑ｍＡＵ邐ｇ逡逑

藥根堿濃度（ｍｇ／ｍｌ）逡逑Ｔｈｅ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ（ｍｇ／ｍｌ）逡逑圖３－３藥根堿標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｔｈｅ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｊａｔｒｏｒｒｈｉｚｉｎｅ逡逑－２６－逡逑

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本文編號(hào)：2785142