發(fā)布時(shí)間：2020-08-07 23:42

【摘要】：決明子來源于豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥成熟種子,具有清熱明目,潤腸通便的功效。是衛(wèi)計(jì)委公布的101種藥食同源中藥材之一,常用作水煎服或代茶飲的保健品,在減肥、降脂、明目、保肝等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。然而近年來以何首烏為代表的含蒽醌類中藥保健品副作用的報(bào)道頻繁,其潛在的安全問題越來越受到人們的重視。由于決明子作為保健食品原料藥食用時(shí)的安全與功效方面技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)與基礎(chǔ)研究不足,迄今未形成相關(guān)使用規(guī)范和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。其作為保健食品原料的常用劑量為《中國藥典》正常人體推薦劑量的1/3(3g),服用時(shí)間長短不一存在較大的隨意性,因此在上述劑量下服用是否能夠發(fā)揮相應(yīng)保健功效,同時(shí)有無安全隱患,尚無定論,同時(shí)現(xiàn)有研究結(jié)果提示兩種決明子化學(xué)成分存在差異,作為兩基原藥材,二者等同入藥,是否能夠保證臨床療效,有待于進(jìn)一步深入研究。論文將對(duì)決明小決明藥效物質(zhì)基礎(chǔ)含量進(jìn)行系統(tǒng)的對(duì)比研究,為二者等同入藥提供科學(xué)依據(jù),以決明子降血脂功效為研究背景,進(jìn)行安全性初步研究,為安全、合理的使用決明子提供依據(jù)。研究內(nèi)容如下:1兩基原決明子藥效物質(zhì)基礎(chǔ)對(duì)比研究1.1蒽醌類成分蒽醌為決明子主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ),研究結(jié)果表明兩個(gè)基原之間蒽醌成分存在差異,目前關(guān)于兩基原蒽醌含量比較研究報(bào)道較少,因此論文對(duì)二者的蒽醌含量進(jìn)行對(duì)比研究。結(jié)果首次建立“一測多評(píng)(QAMS)”測定決明子中7種蒽醌含量的分析方法,以大黃素為參照的相對(duì)校正因子分別為f橙黃決明素/大黃素=1.403、f蘆薈大黃素/大黃素=0.521、f大黃酸/大黃素=0.434、f黃決明素/大黃素=1.749、f大黃酚/大黃素=0.562、f大黃素甲醚/大黃素=0.895。采用UV法測定決明子中總蒽醌、總游離蒽醌與結(jié)合蒽醌。兩種方法所測結(jié)果表明兩基原之間蒽醌含量差異顯著,決明蒽醌含量均高于小決明。采用最小偏二乘法(PLS)分析二者蒽醌含量的差異,根據(jù)分組變量的貢獻(xiàn)值(VIP1),選取大黃素、橙黃決明素、大黃酚、蘆薈大黃素為標(biāo)志物,說明上述4種蒽醌或其對(duì)應(yīng)的蒽醌苷是造成不同基原決明子蒽醌含量存在差異的主要因素。1.2萘并吡喃酮類成分決明子萘并吡喃酮類成分具有保肝,抗肝病毒的藥理活性,論文對(duì)決明子中紅鏈霉素-6-O-β-龍膽二糖苷的含量進(jìn)行對(duì)比研究。建立的方法以甲醇為提取溶媒,采用水浴回流的提取方式,HPLC法測定決明子中紅鏈霉素-6-O-β-龍膽二糖苷的含量,結(jié)果10批次決明的含量在2.48%~4.42%之間,平均值為3.12%,產(chǎn)自內(nèi)蒙的含量最高。10批次小決明含量在2.38%~4.37%之間,平均值為2.92%,產(chǎn)自河南鶴壁的含量最高,結(jié)果兩基原決明子中紅鏈霉素-6-O-β-龍膽二糖苷含量無明顯差異。1.3脂肪酸類成分決明子脂肪酸含有豐富的亞油酸、亞麻酸,具有降血脂、降低膽固醇的藥理活性,目前未有關(guān)于二者脂肪酸類成分含量比較研究,論文以石油醚回流提取并測定二者的含量,結(jié)果不同基原的兩種決明子脂肪酸含量無明顯差異。將脂肪酸甲酯化后采用GC-MS-AMDIS結(jié)合保留指數(shù)定性定量分析不同基原決明子脂肪酸組分差異。結(jié)果決明中化合物種類較小決明豐富,花生酸甲酯含量較小決明高,cis-15-十四酸甲酯不及小決明。主要共有的脂肪酸為棕櫚酸、十七酸、順-9-十八碳烯酸、亞油酸、亞麻酸、二十二烷酸等,上述6種化合物相對(duì)含量總和在65%~80%之間,表明二者不飽和脂肪酸類成分組成具有很高的相似性。1.4 UPLC指紋圖譜對(duì)比研究目前文獻(xiàn)報(bào)道決明子指紋圖譜均為水解后的蒽醌類成分,操作繁瑣、專屬性差,同時(shí)未見有對(duì)其他成分的指紋圖譜的研究報(bào)道。論文首次建立了決明子萘并吡喃酮類成分與蒽醌類成分的UPLC指紋圖譜方法,并對(duì)二者化學(xué)成分進(jìn)行比較研究。結(jié)果決明與小決明兩個(gè)基原在色譜圖上存在一定的共性差異,二者所含成分基本一致,而僅在個(gè)別成分的相對(duì)含量上存在差異,主要表現(xiàn)在3、5、8號(hào)峰,色譜峰在25min后,決明色譜圖較小決明譜圖豐富,各共有峰峰面積更大,說明決明小極性的游離蒽醌類成分比小決明含量高。因此25min后的色譜峰可作為兩個(gè)品種的指紋識(shí)別區(qū),進(jìn)而直接從指紋圖譜來辨識(shí)兩者的基源。綜上,論文分別從上述3類成分進(jìn)行兩基原對(duì)比研究,結(jié)果除決明蒽醌類成分含量高于小決明外,決明與小決明兩個(gè)品種化學(xué)成分基本一致,而共同成分的相對(duì)含量則存在差異,該差異是否對(duì)二者的藥理作用或藥效產(chǎn)生影響,需要進(jìn)一步研究。2決明子安全性與有效性研究2.1決明子降血脂功效的藥效學(xué)研究動(dòng)態(tài)觀察不同劑量決明子水煎劑對(duì)營養(yǎng)性高脂血模型大鼠的降脂作用,模型建立后分為空白組、模型組、陽性組(血脂康,0.2g·kg-1)及5個(gè)決明子水煎劑(以含生藥計(jì))0.315、0.945、1.575、3.15、6.3g·kg-1,連續(xù)灌胃90d,分別于給藥第14、35、56、77、90d檢測動(dòng)物體重及血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、AI及90d肝組織中TC、TG、MDA、T-SOD,結(jié)果灌胃給藥至56d,陽性組、3.15g·kg-1、6.30g·kg-1兩個(gè)給藥組血清TC、TG、LDL-C、AI水平顯著降低(P0.01,P0.05),HDL-C水平顯著升高(P0.01,P0.05),灌胃給藥至77d,1.575g·kg-1組TG、LDL-C、AI有顯著降低(P0.01,P0.05),灌胃給藥至90d,0.315、0.945g·kg-1組血清血脂水平變化無顯著性差異(P0.05);陽性組、3.15g·kg-1、6.30g·kg-1組肝組織TC、TG水平顯著降低(P0.01),各給藥組均能夠顯著(P0.01,P0.05)升高大鼠肝組織中T-SOD的活力至正常程度,對(duì)MDA活力則無影響(P0.05);決明子各給藥組大鼠體重與模型組比較均無統(tǒng)計(jì)意義(P0.05);結(jié)果提示決明子水煎劑對(duì)高脂血模型大鼠具有降血脂功效,并與決明子給藥量存在一定的量效關(guān)系,給藥56d后大劑量(1.575 g·kg-1)組出現(xiàn)穩(wěn)定持續(xù)的降脂效果。2.2低劑量長期服用下的決明子安全性初步研究低劑量長期服用決明子是否存在潛在毒性,國內(nèi)外目前未見研究報(bào)道。論文以決明子降血脂功效為研究背景,探討其是否對(duì)大鼠的存在毒副作用。觀察發(fā)現(xiàn)給藥期間各給藥組出現(xiàn)毛色發(fā)黃,尿液深黃、精神萎靡不振、便溏瀉下的癥狀。組織的病變檢查結(jié)果得出,各劑量組均可能存在毒副作用,與決明子給藥量成正相關(guān)。肝組織病理切片可見肝細(xì)胞空泡樣變、腫脹變性、局灶性核固縮、壞死,肝竇擴(kuò)張炎細(xì)胞浸潤等病變。腎組織病理切片可見腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性、腎間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤等。血清中相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果顯示,決明子給藥組血清中的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)指標(biāo)與模型組相比具有顯著性差異(P0.01,P0.05),血清檢測結(jié)果與肝組織病理切片一致。提示長期服用決明子可能存在一定的安全隱患。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1
【圖文】：

A 決明 ；B 小決明圖 1 決明子藥材圖2.2 蒽醌類成分含量對(duì)比研究現(xiàn)代研究表明決明子蒽醌類成分具有抗氧化、抗菌、降血脂、抗腫瘤等5~46]，也是其產(chǎn)生毒性的中藥物質(zhì)基礎(chǔ)[47]。同時(shí)據(jù)報(bào)道不同基原決明子產(chǎn)作用的給藥量不一致，因此系統(tǒng)研究決明中蒽醌類成分含量對(duì)決明安全、藥具有重要意義，論文采用一測多評(píng)法測定決明中橙黃決明素、蘆薈大黃黃酸、黃決明素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，采用紫外分光光度法測定總蒽醌、總游離蒽醌的含量，結(jié)合所得結(jié)果采用最小偏二乘法分析二者蒽分存在差異的原因。2.2.1 儀器、藥品與試劑

大學(xué)碩士學(xué)位論文10A 決明 ；B 小決明圖 1 決明子藥材圖2.2 蒽醌類成分含量對(duì)比研究現(xiàn)代研究表明決明子蒽醌類成分具有抗氧化、抗菌、降血脂、抗腫瘤等活性[45~46]，也是其產(chǎn)生毒性的中藥物質(zhì)基礎(chǔ)[47]。同時(shí)據(jù)報(bào)道不同基原決明子產(chǎn)生瀉下作用的給藥量不一致，因此系統(tǒng)研究決明中蒽醌類成分含量對(duì)決明安全、合理用藥具有重要意義，論文采用一測多評(píng)法測定決明中橙黃決明素、蘆薈大黃素、大黃酸、黃決明素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，采用紫外分光光度法測定決明中總蒽醌、總游離蒽醌的含量，結(jié)合所得結(jié)果采用最小偏二乘法分析二者蒽醌類成分存在差異的原因。2.2.1 儀器、藥品與試劑2.2.1.1 儀器：LC-20AT 高效液相色譜儀，LC solution色譜工作站軟件（日本島津公司）。Agilent 1220 高效液相色譜儀，Agilent 1260 高效液相色譜儀 2 臺(tái)，Chem Station工作站（美國Agilengt公司），色譜柱Wondasil C18（5μm, 250×4.6mm）、Grace smart C18（5μm, 250×4.6mm）、KromasilC18（5μm, 250×4.6mm） BP211D 十萬分之一型電子分析天平（德國 Sartouris 股份有限公司），MINQIAO FA2000 萬分之一型電子分析天平（上海民僑精密科學(xué)有限公司）

偏最小二乘法分析得分載荷圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2784696