【摘要】：目的:觀察加味補(bǔ)中益氣湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)大鼠肌無力癥狀的改善及治療過程中大鼠血清ACh R-Ab、TGF-β_1、補(bǔ)體C3、總Ig G和胸腺及脾臟組織液中IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的水平的變化,探討中藥治療重癥肌無力(MG)的免疫學(xué)機(jī)制,為中醫(yī)藥治療MG提供有意義的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。方法:將72只健康雌性LWEIS大鼠(年齡42-62天,體重150-160g),隨機(jī)數(shù)字法取12只作為對(duì)照組,其余60只為模型組。運(yùn)用人工合成的鼠源性ACh R-α亞基97~116肽段為免疫原誘導(dǎo)模型組LWEIS大鼠建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。每只大鼠給予皮下注射乳劑200μl,含鼠源性ACh R-α亞基97~116肽段100μg,在大鼠的背部取4點(diǎn)及雙足墊注射,背部每點(diǎn)含40μl,足墊每點(diǎn)含20μl。每只對(duì)照組大鼠給予200μl的佐劑與PBS的混合乳劑。初次免疫后第30天及第45天分別于背部4點(diǎn)及雙足墊給予同等劑量乳劑免疫。初次免疫50天后開始評(píng)價(jià)模型,通過抓握實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)價(jià)大鼠肌力的情況,檢測(cè)大鼠血清中ACh R-Ab的水平,進(jìn)行新斯的明試驗(yàn)以及重復(fù)神經(jīng)電刺激測(cè)肌電圖等判斷模型是否成功。最終納入模型標(biāo)準(zhǔn)的LWEIS大鼠共50只,將造模成功的大鼠隨機(jī)分成5組,空白組10只給予生理鹽水每天3ml灌胃,模型組10只給予生理鹽水每天3ml灌胃,中藥高濃度組10只給予濃度為64.8mg/kg·d灌胃,中濃度組10只給予濃度為32.4mg/kg·d灌胃,低濃度組10只給予濃度為16.2mg/kg·d灌胃,西藥組10只給予濃度為5.4mg/kg·d灌胃,期間記錄肌力評(píng)分,連續(xù)灌胃4周后,采用抗原包被法測(cè)ACh R-Ab OD值,酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清補(bǔ)體C3、TGF-β_1、Ig G的含量,從脾臟和胸腺提取組織液測(cè)IL-17A、IL-6、IL-2,INF-γ的含量。結(jié)果:1.根據(jù)模型的判定標(biāo)準(zhǔn),最終納入EAMG成功模型共50只,造模成功后大鼠出現(xiàn)活動(dòng)遲緩,毛發(fā)不澤。正常組大鼠活動(dòng)正常,毛發(fā)光澤。2.模型組在ACh R-Ab水平及肌力測(cè)定方面與空白組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3.治療四周后,取大鼠血清測(cè)ACh R-Ab的變化,用藥組及模型組與空白組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥組及西藥組與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥的高、中濃度組與西藥組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),中藥低濃度與高濃度及西藥組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.大鼠血清測(cè)補(bǔ)體C3、TGF-β_1、Ig G滴度的變化,用藥組及模型組與空白組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥組及西藥組與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥的高、中、低濃度組與西藥組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),中藥低濃度與中藥高、中濃度相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5.取大鼠的脾臟和胸腺組織提取組織液,測(cè)IL-17A,IL-6,IL-2水平的變化,模型組及用藥組與空白組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥組及西藥組與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥的高、中、低劑量組與西藥組相比,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),中藥低濃度與高、中濃度相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.取胸腺、脾臟組織液測(cè)INF-γ滴度的變化,模型組及用藥組與空白組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥組及西藥組與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),中藥高、中濃度組與西藥組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),中藥低濃度與高濃度、西藥組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:(1)采用鼠源性ACh R-α亞基97~116肽段免疫LWEIS大鼠能成功制備EAMG模型,成功率相對(duì)較高。(2)加味補(bǔ)中益氣湯能顯著減少EAMG大鼠的癥狀評(píng)分,緩解肌無力癥狀,提示加味補(bǔ)中益氣湯對(duì)EAMG大鼠模型治療有效。(3)加味補(bǔ)中益氣湯對(duì)EAMG大鼠肌無力癥狀的免疫學(xué)機(jī)制可能是,一方面上調(diào)血清中通過調(diào)節(jié)TGF-β_1、補(bǔ)體C3的水平表達(dá),減少了神經(jīng)肌肉接頭處的炎癥反應(yīng);另一方面通過下調(diào)中樞免疫器官(胸腺)或/和外周免疫器官(脾臟)組織液中IL-17A,IL-6,IL-2,INF-γ的水平表達(dá),抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖,降低了血清Ig G水平和ACh R-Ab含量,從而減輕肌無力癥狀。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1： 空 白 組 與 模 型 組 大 鼠 血 清 中 AChR-Ab 的 對(duì) 比以看出：ChR 抗 體 （ OD 值 ） 方 面 ， 模 型 組 高 于 空 白 組 ， 具 有 統(tǒng)）。斯的明實(shí)驗(yàn)n 后 觀察大鼠，大鼠的活動(dòng)能力較前比較明顯增多 ，精得 到改善，在 lennon 評(píng)分方面，模型組高于空白組，p<0.05）。見表 3： 3： 模 型 組 大 鼠 在 注 射 新 斯 的 明 前 后 lennon 評(píng) 分 比 較 (x n 注 射 前 注 射 后5 0.00± 0.00 0.00± 0.05 1.909± 0.13 1.42± 0.00

統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義（p<0.05）。3.4 重 復(fù)神經(jīng)電刺 激測(cè)肌電圖:在本實(shí)驗(yàn)中，用隨機(jī)數(shù)字法在造模大 鼠 選 出 5 只 做 肌 電 圖 ， 測(cè) 得 第 5 個(gè) 電 位 對(duì) 第 1 個(gè) 電 位 的 變 化 百 分 比 表 示 減值大于 10%，在檢測(cè)肌電圖后給予大鼠縫合，手術(shù)創(chuàng)口涂搽青霉素預(yù)感染。 如圖 2-7：圖 2 EAMG1 號(hào) 圖 3 EAMG2 號(hào) 圖 4EAMG3 號(hào)

第三章：加味補(bǔ)中益氣湯對(duì) EAMG 大鼠的療效與機(jī)制研究（實(shí)驗(yàn) 2）表 5 各組大鼠肌力評(píng)分的比較 ( x s) △ 與 空 白 組 相 比 ， p<0.01， ▲ 與 模 型 組 相 比 ， p<0.01，▲ ▲與 低 濃 度 組 相 比 ， p<0.05 與 西 藥 組 相 比 ， p>0.05組 別 例 數(shù) 肌 力空 白 組 10 0± 0模 型 組 10 1.88± 0.103△西 藥 組 10 0.7± 0.1414△ ▲▲ ▲ 濃 度 組 10 0.74± 0.1505△ ▲ △ △▲ ▲ 濃 度 組 10 0.82± 0.1619△ ▲ △ △▲ ▲ 濃 度 組 10 0.93± 0.1889△ ▲

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 黃莎;譚利明;;重癥肌無力的免疫發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2010年01期

2 ;TUMOR NECROSIS FACTOR-ALPHA POLYMORPHISM AND SECRETION IN MYASTHENIA GRAVIS[J];Chinese Medical Sciences Journal;2005年02期

本文編號(hào)：2784686