【摘要】：目的:本研究通過體外細胞實驗觀察葛黃顆粒含藥血清對乙醇誘導(dǎo)的L-02細胞的影響,以探討其對ALD的保護作用和分子機制。方法:1、含藥血清的制備:雄性Sparague-Dawley大鼠(簡稱SD大鼠)60只,體重180-220g,隨機分為3組,每組20只,分別為空白對照組、葛黃顆粒組(3.1g生藥/100g體重/天),美他多辛組(0.1g/100g/天),每日給藥2次,早晚各一次,連續(xù)給藥5天。禁食12h在末次給藥前,但不限制飲水,于最后一次給藥后1h,麻醉動物,腹主動脈取血制備含藥血清。2、造模及干預(yù):CCK8法篩選出最佳乙醇濃度范圍。同時用全自動生化分析儀檢測細胞上清液AST、LDH,結(jié)合CCK8結(jié)果,以確定造模時間及造模的乙醇濃度。細胞實驗分為正常組、模型組、葛黃顆粒高劑量組(高劑量組)、葛黃顆粒中劑量組(中劑量組)、葛黃顆粒低劑量組(低劑量組)、美他多辛組(陽性對照組),細胞接種24h后,正常組加入含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液,模型組在上述基礎(chǔ)上加入乙醇,另外各組加入乙醇及不同劑量的含藥血清,干預(yù)24h后,收集細胞上清液及細胞進行后續(xù)的檢測。3、檢測:細胞上清液AST、LDH用全自動生化分析儀檢測,細胞凋亡用流式細胞儀檢測,檢測Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 mRNA的表達用RT-PCR法,Fas、FasL蛋白的表達情況用免疫組化法觀察。結(jié)果:1、模型建立:運用3%的乙醇干預(yù)L-O2肝細胞24h,AST、LDH含量升高,肝細胞體積稍增大,懸浮的細胞較前稍增多,成功建立酒精性肝損傷l-02細胞模型。2、在模型組,l-o2細胞的凋亡率顯著增高(p0.05),經(jīng)含藥血清干預(yù)后,凋亡率在中劑量組、高劑量組和陽性對照組中的表達明顯降低(p0.05),中劑量組與陽性對照組之間差異顯著(p0.05),高劑量組和陽性對照組之間無顯著性差異(p0.05)。3、在模型組中,l-02細胞上清液的ast、ldh的含量及fas、fasl、caspase3、caspase8的基因表達顯著升高(p0.05),經(jīng)含藥血清干預(yù)后,這些指標在中劑量組、高劑量組和陽性對照組中的表達明顯降低(p0.05),中劑量組與陽性對照組之間差異顯著(p0.05),高劑量組和對照組之間無顯著性差異(p0.05)。4、fas、fasl蛋白陽性的表達可以在各組肝細胞的細胞膜上見到,其中棕黃色染色較淺的是正常組,而模型組染色最深,高、中、低劑量組染色均較模型組變淺,其表達呈現(xiàn)出劑量依賴性降低。陽性對照組染色也較模型組變淺。結(jié)論:1、3%的乙醇處理l-o2肝細胞24h后可以成功誘導(dǎo)肝細胞受損,顯微鏡下觀察肝細胞體積稍增大,懸浮的細胞較前稍增多,表明酒精性肝損傷細胞模型復(fù)制成功。2、葛黃顆粒含藥血清可以降低細胞上清液中ast、ldh的含量,改善肝功受損情況,表明其對酒精性肝損傷有較好的保護作用。3、葛黃顆粒含藥血清可下調(diào)fas、fasl、caspase3、caspase8mrna的表達,減少fas、fasl蛋白的表達,減少凋亡率,提示其對酒精性肝損傷的保護作用可能與抑制細胞凋亡有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 不同濃度乙醇作用于人 L-02 肝細胞 6h、12h、24h 細胞活力的比較.2 乙醇作用時間的確定實驗結(jié)果顯示（表 6，圖 2），用不同濃度的乙醇作用于 L-02 細胞，分于 6h，12h，24h 收集細胞上清液測定 AST、LDH，隨著乙醇濃度的增加，ST、LDH 含量增加。僅當乙醇濃度為 2.5%、3%、5%時，作用時間為 24h AST、LDH 含量與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)合細胞力及顯微鏡下細胞形態(tài)觀察，最終選取 24h 作為乙醇誘導(dǎo)肝細胞損傷的適時間。 6 不同濃度乙醇作用于人 L-02 肝細胞 6h、12h、24h 后 AST、LDH 含量( x±s，n=4)6h 12h 24hAST(U/L) LDH(U/L) AST(U/L) LDH(U/L) AST(U/L) LDH(U/L)

圖 2 不同濃度乙醇作用于人 L-02 肝細胞 6h、12h、24 后 AST、LDH 含量的比較2 乙醇誘導(dǎo)肝細胞損傷模型的構(gòu)建顯微鏡下觀察可見，模型組通過含 3%乙醇的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞 24h 后，其肝細胞體積稍增大，懸浮的細胞較正常組稍增多（圖 3）。

圖 2 不同濃度乙醇作用于人 L-02 肝細胞 6h、12h、24 后 AST、LDH 含量的比較2 乙醇誘導(dǎo)肝細胞損傷模型的構(gòu)建顯微鏡下觀察可見，模型組通過含 3%乙醇的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞 24h 后，其肝細胞體積稍增大，懸浮的細胞較正常組稍增多（圖 3）。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 肖衡;杜成友;羅詩樵;劉定志;;不同濃度腫瘤細胞上清液對成纖維細胞生長及表型轉(zhuǎn)化的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年23期

2 肖衡;杜成友;羅詩樵;劉定志;潘龍;;腫瘤細胞上清液對成纖維細胞表型轉(zhuǎn)變及血管內(nèi)皮生長因子-A表達的影響[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2012年02期

3 牛云;何旭;王心蕊;馬英智;李玉林;;鼠膠質(zhì)瘤細胞上清液誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞的分化[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年04期

4 劉軍權(quán),陳復(fù)興,姚仁南,丁樹標,許祥裕;LAK和CD3AK細胞的培養(yǎng)對癌細胞作用觀察[J];中國腫瘤生物治療雜志;1997年03期

5 薄美玉;胡曉蕓;韓葆芬;扈麗娟;杜艷;;尼古丁對臍靜脈內(nèi)皮細胞釋放IL-6及PAI-1的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2011年05期

6 ;人體組織學(xué)[J];國外科技資料目錄(醫(yī)藥衛(wèi)生);2002年07期

7 王靜波;惠延年;韓泉洪;張鵬;;細胞因子對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞syndecan-1表達的影響[J];中華眼底病雜志;2006年02期

8 邱雙健,葉勝龍,吳志全,樊嘉,湯釗猷;肝癌細胞上清液對樹突狀細胞的抑制作用與NF-κB通路有關(guān)[J];中華肝膽外科雜志;2004年08期

9 鄭麗娜,韓濤,王寶恩,馬雪梅,賈繼東,錢紹誠,高英堂;柴胡對肝星狀細胞膠原蛋白分泌的影響[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年04期

10 曹月誠;羨海英;陳登峰;吳剛;;人肺腺癌A549細胞上清液對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響[J];山東醫(yī)藥;2016年16期

相關(guān)會議論文 前10條

1 高小青;杜杰;鄧莉;楊朝鮮;;膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對過氧化氫誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細胞凋亡的保護作用[A];中國解剖學(xué)會2015年年會論文文摘匯編[C];2015年

2 高小青;范光碧;鄧莉;郭侃;杜杰;;堿性成纖維細胞生長因子抑制過氧化氫誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細胞的凋亡[A];中國解剖學(xué)會第六屆全國解剖學(xué)技術(shù)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2017年

3 牛云;何旭;王心蕊;馬英智;李玉林;;膠質(zhì)瘤細胞上清液誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2007年學(xué)術(shù)年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

4 孟愛宏;;p38MAPK和STAT3在LPS刺激小鼠肺泡巨噬細胞中的作用[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

5 周倩;姚廣濤;金若敏;;薯蕷皂苷的肝毒性作用[A];2013年（第三屆）中國藥物毒理學(xué)年會暨藥物非臨床安全性評價研究論壇論文摘要[C];2013年

6 劉曉慧;馬麗霞;韋新煥;劉銳;李曉晴;丁美;任鋒;張晶;段鐘平;;肝細胞自分泌5-HT及其調(diào)控機制的初步研究[A];第7屆全國疑難及重癥肝病大會論文集[C];2013年

7 周媛;李潔;李學(xué)忠;程言博;劉春風(fēng);;脂多糖刺激星形膠質(zhì)細胞增殖和釋放炎癥因子及其分子機制[A];第九次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2006年

8 韓文倫;黃朝興;;乙型肝炎病毒感染正常人腎小管上皮細胞的實驗研究[A];2008年浙江省腎臟病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

9 武冬梅;胡玲;袁星;付光磊;李秀娥;;MCF-7細胞電化學(xué)行為機理研究[A];中國毒理學(xué)會環(huán)境與生態(tài)毒理學(xué)專業(yè)委員會成立大會會議論文集[C];2008年

10 張峻嶺;陳學(xué)榮;殷金珠;毛舒和;;β-溶血性鏈球菌誘發(fā)銀屑病發(fā)病模式探討[A];2001年中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 位庚;心肌微血管內(nèi)皮細胞損傷對心肌細胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

2 曾文婕;血管緊張素Ⅱ通過JNK/c-Jun途徑調(diào)節(jié)DDAH/ADMA/NO系統(tǒng)的研究[D];中南大學(xué);2012年

3 王兵;Th17細胞相關(guān)細胞因子IL17和IL22抗乙肝病毒復(fù)制的體外研究[D];山東大學(xué);2013年

4 張東旭;吸水鏈霉菌谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的活化機制和生理功能[D];江南大學(xué);2008年

5 趙晉晉;高糖高脂環(huán)境下內(nèi)皮素-1在腎小球系膜細胞與內(nèi)皮細胞相互關(guān)系中的作用[D];中南大學(xué);2009年

6 毛國根;二氧化硅誘導(dǎo)肺細胞間隙連接功能下調(diào)及其分子機制的研究[D];浙江大學(xué);2001年

7 張彩蘋;尼古丁對Ca~（2+）/CaN-NFATc信號通路在哮喘發(fā)病機制中作用的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙騰飛;舌癌細胞外泌體的分離鑒定及MicroRNA的表達譜分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

2 郎涵;葛黃顆粒含藥血清對乙醇誘導(dǎo)L-02細胞損傷的保護作用及其機制研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2017年

3 蔣紅云;曲古菌素A對氧糖剝奪條件下樹突狀細胞成熟與功能的影響及其機制[D];吉林大學(xué);2017年

4 張子揚;基于抗氧化應(yīng)激及抗炎探討DHK防治DR的作用機制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2017年

5 宋穎;β-欖香烯對腫瘤細胞上清液誘導(dǎo)的大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細胞活性及VEGF表達的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

6 肖衡;腫瘤上清液激活成纖維細胞后對血管內(nèi)皮生長因子-A表達影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

7 文香;無鎂誘導(dǎo)神經(jīng)元體外驚厥樣放電后細胞微環(huán)境的變化[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

8 陳卓;羧甲基茯苓多糖對在兩種肝癌細胞上清液中培養(yǎng)的樹突狀細胞的成熟及免疫功能影響[D];暨南大學(xué);2008年

9 陳露雨;昆布多糖對單核細胞源性樹突狀細胞成熟和功能的影響[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

10 石玉娜;p38MAPK和STAT3在LPS刺激小鼠肺泡巨噬細胞功能變化中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號：2783588