【摘要】：目的探討茯苓多糖(pachymaran,PAC)對人宮頸癌HeLa細(xì)胞體外增殖抑制、遷移、促凋亡的作用的影響及其促凋亡作用的相關(guān)機(jī)制。方法分別用10、20、30、40、50、60、80、100、120mg/ml的茯苓多糖處理HeLa細(xì)胞24h,MTT法檢測細(xì)胞增殖情況并篩選出適宜的低、中、高濃度的茯苓多糖用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。以低、中、高濃度的茯苓多糖處理HeLa細(xì)胞24小時(shí)后,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響;Hoechst 33342染色觀察細(xì)胞核的變化;平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞克隆形成能力;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力;AV/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期;Western-blotting法檢測凋亡相關(guān)蛋白(Cleaved Caspase 3,Cleaved Caspase 8,Cleaved Caspase 9,Bcl-2,Bax)、遷移相關(guān)蛋白(MMP-9,VEGFA)及ERK通路相關(guān)蛋白(P-ERK1/2,ERK1/2)表達(dá)的情況。同時(shí)設(shè)置不加藥的對照組。結(jié)果與對照組相比,當(dāng)茯苓多糖濃度大于30mg/ml,HeLa細(xì)胞存活率明顯下降(P0.05),當(dāng)藥物濃度大于60mg/ml時(shí),細(xì)胞活力下降接近50%的效應(yīng)。為避免高濃度藥物可能會直接殺死細(xì)胞,導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)取材時(shí)所獲細(xì)胞數(shù)引起偏差而造成實(shí)驗(yàn)較大誤差,故取30、40、50mg/ml茯苓多糖作為低、中、高濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。與對照組相比,中、高濃度茯苓多糖處理細(xì)胞后,能使細(xì)胞和細(xì)胞核發(fā)生顯著的凋亡形態(tài)學(xué)變化,低濃度下形態(tài)學(xué)變化并不十分顯著;低、中、高濃度茯苓多糖均能以劑量相關(guān)性降低細(xì)胞克隆形成能力、降低細(xì)胞遷移率(P0.05)、增加細(xì)胞凋亡率(P0.05)、使S期細(xì)胞減少并阻滯于G2/M期(P0.05)、Cleaved Caspase 3,Cleaved Caspase 8,Cleaved Caspase 9,Bax表達(dá)較對照組明顯增多,Bcl-2,MMP-9,VEGFA,P-ERK1/2表達(dá)明顯減少,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ERK1/2表達(dá)無明顯變化。結(jié)論茯苓多糖能顯著抑制HeLa細(xì)胞增殖、并誘導(dǎo)其凋亡,且呈劑量相關(guān)性。其促凋亡機(jī)制可能與通過下調(diào)P-ERK 1/2表達(dá),抑制ERK信號通路有關(guān)。同時(shí),茯苓多糖對減少HeLa細(xì)胞的遷移有一定的作用。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

表 1.茯苓多糖作用于 HeLa 細(xì)胞的增殖抑制率物濃度（mg/ml) 24h 36h 48h0 0.02±0.01 0.05±0.02 0.08±0.0110 4.37±1.01 5.15±0.45 7.65±1.0920 9.75±1.32* 10.25±1.23* 11.36±1.35*30 13.85±1.27** 14.81±1.68** 16.15±1.02**40 20.01±1.13** 22.03±1.46** 25.84±0.78**50 32.06±0.87** 35.36±1.33** 37.15±1.28**60 45.75±1.48** 48.67±0.26** 52.18±1.51**80 53.58±0.99** 57.55±1.21** 71.79±1.23**100 74.88±1.45** 77.25±1.97** 90.81±1.64**120 82.09±0.86** 88.49±1.36** 95.04±1.09**注：與對照組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著性差異*P＜0.05 **P＜0.01

圖 2.不同濃度茯苓多糖對 HeLa 細(xì)胞形態(tài)的影響（×200 倍）三、茯苓多糖對 HeLa 細(xì)胞核形態(tài)的影響與對照組細(xì)胞相比，中、高濃度組可見明顯的核膜皺縮成呈碎塊狀、新月形致密濃染，細(xì)胞核大小不均勻，形態(tài)不規(guī)則，輪廓不清，顏色明顯發(fā)白，視野內(nèi)見較多明亮發(fā)白的淡藍(lán)色熒光凋亡小體，細(xì)胞密度明顯減少，單個(gè)正常細(xì)胞核少見。低濃度組可見少量皺縮變形的細(xì)胞核，邊界模糊不清。對照組細(xì)胞呈均勻的藍(lán)色,核膜完整，細(xì)胞大小較勻稱（見圖 3）。圖 3.不同濃度茯苓多糖對 HeLa 細(xì)胞核形態(tài)的影響（×200 倍）

圖 2.不同濃度茯苓多糖對 HeLa 細(xì)胞形態(tài)的影響（×200 倍）三、茯苓多糖對 HeLa 細(xì)胞核形態(tài)的影響與對照組細(xì)胞相比，中、高濃度組可見明顯的核膜皺縮成呈碎塊狀、新月形致密濃染，細(xì)胞核大小不均勻，形態(tài)不規(guī)則，輪廓不清，顏色明顯發(fā)白，視野內(nèi)見較多明亮發(fā)白的淡藍(lán)色熒光凋亡小體，細(xì)胞密度明顯減少，單個(gè)正常細(xì)胞核少見。低濃度組可見少量皺縮變形的細(xì)胞核，邊界模糊不清。對照組細(xì)胞呈均勻的藍(lán)色,核膜完整，細(xì)胞大小較勻稱（見圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2781899