發(fā)布時間：2020-08-05 15:36

【摘要】：背景肺癌在全球腫瘤相關(guān)死亡原因中占據(jù)首位,每年新確診肺癌患者約達(dá)160萬,而且發(fā)病率和死亡率依然呈上升趨勢,尤其在中國等發(fā)展中國家。根據(jù)2018年美國癌癥協(xié)會(ACS)發(fā)布的結(jié)果顯示,預(yù)計2018年全美將有約174萬的新發(fā)癌癥病例和約61萬人死于癌癥。國家中央癌癥登記中心的數(shù)據(jù)指出,預(yù)計我國僅在2015年共有約429.2萬新發(fā)腫瘤病例和約281.5萬癌癥死亡病例,其中肺癌的發(fā)病率和致死率均位列第一。目前,癌癥的臨床治療主要是以放療、化療和手術(shù)治療為主,而對于晚期肺癌患者無法通過手術(shù)根治,只能進(jìn)行放化療或靶向治療�，F(xiàn)有的化療藥物主要以細(xì)胞毒類為主,其副作用大且容易耐藥,對于腫瘤患者五年生存率和生存質(zhì)量并無明顯提高。對于靶向治療,由于其靶標(biāo)單一使適用人群范圍較窄,而且也較易出現(xiàn)耐藥性。由此可見,開發(fā)有效,低毒及多靶點(diǎn)作用的抗腫瘤藥物刻不容緩。傳統(tǒng)中藥是我國的瑰寶,是先人們無數(shù)次與疾病做斗爭的過程中留下的寶貴經(jīng)驗和財富,而且在臨床上抗腫瘤治療方面已取得顯著效果。因此,本文選取由中藥土木香分離提純得到的異土木香內(nèi)酯進(jìn)行抗腫瘤及其作用機(jī)制的探討,為新藥開發(fā)提供可靠的理論基礎(chǔ)。本論文實(shí)驗內(nèi)容主要涉及三個部分:第一部分:異土木香內(nèi)酯的體外抗腫瘤藥效學(xué)研究MTT法證實(shí)了異土木香內(nèi)酯對肺癌細(xì)胞有增殖抑制作用,結(jié)果表明SPC-A1與H1650細(xì)胞株不同時間(24 h,48 h,72h)的IC_(50)分別是12.37、10.94、7.09μM/L和29.53、12.75、11.01μM/L,可發(fā)現(xiàn)其增值抑制作用呈劑量和時間依賴性。而不同時間(24 h,48 h,72h)作用于人胚胎成纖維細(xì)胞MRC-5的IC_(50)分別是124.10、54.12、28.20μM/L,可見與肺癌細(xì)胞的增殖抑制作用進(jìn)行相比,我們認(rèn)為異土木香內(nèi)酯對肺癌細(xì)胞有一定的選擇性作用。第二部分:異土木香內(nèi)酯的體內(nèi)抗腫瘤藥效學(xué)研究用SPC-A1對裸鼠進(jìn)行皮下接種,成功構(gòu)建荷瘤裸鼠模型。異土木香內(nèi)酯高(90 mg/kg)、中(30 mg/kg)、低(10 mg/kg)分別作用于荷瘤裸鼠,以順鉑作為陽性對照,并以腫瘤體積抑制率和腫瘤重量抑制率作為對比依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)異土木香內(nèi)酯(高、中、低)給藥組體積抑制率分別是48.44%、28.83%、11.77%,而腫瘤重量抑制率則分別是58.13%、32.94%、19.17%。實(shí)驗結(jié)果證實(shí)異土木香內(nèi)酯能抑制裸鼠體內(nèi)腫瘤生長且呈現(xiàn)劑量依賴性,通過臟器系數(shù)和體重生長曲線發(fā)現(xiàn)其安全性高于陽性對照組順鉑。第三部分:異土木香內(nèi)酯抗腫瘤的作用機(jī)制研究在本部分的實(shí)驗中,我們先是采用Hocechst 33258染色法觀察細(xì)胞給藥后的形態(tài)學(xué)變化,結(jié)合FITC-Annecin V/PI法檢測細(xì)胞凋亡,發(fā)現(xiàn)異土木香內(nèi)酯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡呈劑量和時間依賴性,隨著給藥濃度的增加和作用時間的延長,細(xì)胞凋亡率越高。接著,我們還通過了JC-1染色法檢測腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位的變化、DCFH-DA染色檢測活性氧變化和碘化丙染色檢測對細(xì)胞周期的影響。由此發(fā)現(xiàn)了異土木香內(nèi)酯能降低細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位和升高其細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,而且能把細(xì)胞周期阻滯在S期。最后,通過Wesrern blot和免疫組化結(jié)果證明了異土木香內(nèi)酯能激活細(xì)胞內(nèi)P-AMPK(Thr172)、P53、P21與Bax信號通路,而且下調(diào)Cyclin A、CDK 2與Bcl-2的蛋白表達(dá)量。綜上所述,異土木香內(nèi)酯在體內(nèi)外藥效學(xué)中均表現(xiàn)出較好的抗肺癌作用,而且安全性較高。通過對其進(jìn)行機(jī)制研究,本文認(rèn)為異土木香內(nèi)酯是通過激活P-AMPK(Thr172)通路,從而作用于細(xì)胞周期與凋亡等相關(guān)信號通路引起腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
【圖文】：

-1 異土木香內(nèi)酯結(jié)構(gòu)式（MW 232The structure of isoalantolactone（M對多種腫瘤細(xì)胞系如肺癌、胃制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，其通，Caspase-9 和 P53 等的表達(dá)[29特別是 SPC-A1 細(xì)胞株還沒有探究異土木香內(nèi)酯對人肺腺癌作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。是 Kerr 教授在 1972 年首次提已有 Gluckmanm 科學(xué)家提出一[36]

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文0.01）。異土木香內(nèi)酯作用于 SPC-A1 細(xì)胞株 24h，48h 和 72h 的 IC50值分別為 12.37μM/L，10.94 μM/L 和 7.09 μM/L。而異土木香內(nèi)酯作用于 H1650 細(xì)胞株 24h，48h和 72h 的 IC50值分別為 29.53 μM/L，12.75 μM/L 和 11.01 μM/L，可見表 2-1。同時，本實(shí)驗選取順鉑作為體外抗腫瘤藥效學(xué)實(shí)驗的陽性藥，使用不同濃度（0、5、10、20、40 μM/L）在 24h，48 和 72h 分別干預(yù)細(xì)胞株 SPC-A1 和 H1650，得到SPC-A1 的 IC50值分別為 18.84 μM/L（24h），7.14 μM/L（48h）和 5.30 μM/L（72h）；而順鉑干預(yù) H1650 后的 IC50值分別為 35.79 μM/L（24h），8.44 μM/L（48h）和2.68 μM/L（72h），見表 2-2。MRC-5 是人胚胎成纖維細(xì)胞，生長習(xí)慣與正常細(xì)胞類似。我們選取其作為正常細(xì)胞去探索異土木香內(nèi)酯對正常細(xì)胞的毒性，為抗腫瘤實(shí)驗提供參考。實(shí)驗證明，異土木香內(nèi)酯干預(yù) MRC-5 細(xì)胞也有一定的抑制作用，見圖 2-1，但無腫瘤細(xì)胞明顯，其 IC50值分別為 124.10 μM/L（24h），54.12 μM/L（48h）和 28.20 μM/L（72h）。

圖 2-2. 異土木香內(nèi)酯對荷瘤裸鼠體重的影響Fig.2-2 Effect of isoalantolactone on boby weight in nude mic圖 2-3 異土木香內(nèi)酯對荷瘤裸鼠腫瘤體積的影響Fig.2-3 Effect of isoalantolactone on tumor volume in nude mic

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃德良;姚中平;張衛(wèi)忠;;PD-1抑制劑派姆單抗對晚期非小細(xì)胞肺癌T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的影響[J];國際腫瘤學(xué)雜志;2017年03期

2 熊延路;王明星;盧強(qiáng);李小飛;朱愛林;趙晉波;韓勇;;AMPK在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年34期

3 戴青;馬荔;;吉非替尼治療非小細(xì)胞肺癌的臨床研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2014年11期

4 殷方中;;對四種中藥注射液抗腫瘤有效性的循證藥學(xué)評價[J];當(dāng)代醫(yī)藥論叢;2014年17期

5 詹啟敏;陳杰;;細(xì)胞周期與腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)[J];中國腫瘤臨床;2014年01期

6 張斌;肖寒;李蔚;章燁;;益氣養(yǎng)陰中藥聯(lián)合紫杉醇、順鉑治療中晚期非小細(xì)胞肺癌23例臨床研究[J];江蘇中醫(yī)藥;2013年05期

7 趙頌媛;馬洪升;;AMPK在腫瘤研究中的新進(jìn)展[J];國際消化病雜志;2013年02期

8 曾葭;陳小宇;祝愛珍;劉成成;譚廣銷;劉革修;;鹽霉素增強(qiáng)吉非替尼誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞株A549凋亡的作用[J];中國病理生理雜志;2012年12期

9 房娟;劉馨;陳艷;王熙才;;人參皂苷抗肺癌及其他腫瘤的實(shí)驗研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年08期

10 張韶巖;李文;張永志;區(qū)頌雷;李昕;馬旭晨;;非小細(xì)胞肺癌患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)及意義[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2012年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 金成彥;抗肺鱗癌小分子藥物的篩選及作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2017年

2 易波;ROS/AMPK介導(dǎo)的凋亡通路在川芎嗪抗胃癌作用中的機(jī)制研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

本文編號：2781689