【摘要】：失眠是臨床常見的一種睡眠障礙性疾病,影響人類日間的生活與工作,除此之外,還會誘發(fā)心腦血管疾病、精神疾病等。失眠的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,涉及的腦部結(jié)構(gòu)包括大腦皮層、腦干、海馬、下丘腦、視交叉上核等,與睡眠-覺醒節(jié)律及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)有密切關(guān)系,包括5-羥色胺(5-HT)、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及Y-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)。目前用于治療失眠的西藥多存在耐藥性、成癮性等副作用。中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)治療失眠癥的方法歷史悠久,很多單味中藥及中藥復(fù)方都具有治療失眠癥的良好效果,深受人們的青睞。梔子厚樸湯出自《傷寒論》,由梔子、厚樸、枳實(shí)3味藥材組成,主治熱擾胸膈之失眠,是治療失眠癥的經(jīng)方之一,但其作用機(jī)制尚不明確�；谝陨�,本研究擬在優(yōu)化梔子厚樸湯提取工藝的基礎(chǔ)上,建立對氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠小鼠模型,通過高效液相色譜法測定小鼠大腦皮層、腦干、海馬組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量,采用液質(zhì)聯(lián)用儀的方法測定小鼠血清中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量,分析單胺類神經(jīng)質(zhì)、氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)與梔子厚樸湯治療失眠之間的關(guān)系,初步探討梔子厚樸湯治療失眠的作用及機(jī)制。以睡眠剝奪果蠅為研究對象,采用PySolo活動監(jiān)測系統(tǒng),分析梔子厚樸湯及其不同提取部位對果蠅睡眠的干預(yù)作用,篩選梔子厚樸湯治療失眠的有效部位群,并測定果蠅頭部單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量,以期更為深入的探究梔子厚樸湯治療失眠的作用機(jī)制。1.正交試驗(yàn)法優(yōu)化梔子厚樸湯的提取工藝本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法,建立了高效液相色譜法同時(shí)測定梔子厚樸湯中梔子苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚含量的方法,以各成分提取量及浸膏收率為指標(biāo),優(yōu)化了梔子厚樸湯的提取工藝,獲得的最佳提取工藝為12倍量體積分?jǐn)?shù)為700%的乙醇浸泡60min后加熱回流提取90min。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,采用優(yōu)選的工藝條件加熱回流提取梔子厚樸湯,各主要成分含量及浸膏得率均較高,且穩(wěn)定。2.梔子厚樸湯對失眠模型小鼠的行為學(xué)及組織中神經(jīng)遞質(zhì)的影響本實(shí)驗(yàn)建立了腹腔注射PCPA致失眠小鼠模型,以宏觀體征、體質(zhì)量變化、翻正反射實(shí)驗(yàn)為指標(biāo),對所建模型進(jìn)行評價(jià),并通過HPLC-ECD測定小鼠大腦皮層、腦干、海馬組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)及其代謝產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)的含量,通過LC-MS/MS測定小鼠血清中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)的含量。結(jié)果表明,連續(xù)2天腹腔注射PCPA可成功復(fù)制失眠模型,且失眠模型小鼠經(jīng)給予梔子厚樸湯后睡眠情況得到改善,其皮層、腦干、海馬組織中DA的量顯著降低、5-HT的量顯著升高,血清中Glu/GABA顯著降低。3.基于果蠅為模式生物的梔子厚樸湯治療失眠的有效部位群篩選及作用機(jī)制研究本實(shí)驗(yàn)以7日齡處女果蠅為研究對象,通過夜間重復(fù)光照刺激的造模方法建立睡眠剝奪模型,采用PySolo活動監(jiān)測系統(tǒng),以果蠅的活動為指標(biāo),篩選梔子厚樸湯治療失眠的有效部位群,并通過HPLC-ECD方法測定果蠅頭部單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA、5-HIAA、HVA、5-HT的含量。結(jié)果表明,光照刺激法可成功睡眠剝奪模型,一定劑量的梔子厚樸湯及其石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位對睡眠剝奪果蠅的睡眠具有改善作用,并且能夠降低睡眠剝奪果蠅腦內(nèi)DA及HVA的含量,提高5-HT及5-HIAA的含量,其中二氯甲烷部位的作用尤其明顯。綜上所述,梔子厚樸湯治療失眠癥的作用確切,可明顯改善失眠模型小鼠及睡眠剝奪果蠅的睡眠情況,有效部位群包括石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位,其中二氯甲烷部位可能為主要有效部位群,推測其可能通過調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的水平,即降低DA及HVA的含量,提高5-HT及5-HIAA的含量,降低Glu/GABA的量,進(jìn)而發(fā)揮改善睡眠的作用。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖１梔子厚樸湯ＨＰＬＣ色譜圖逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋ＨＰＬＣ邋ｃｈｒｏ?

圖２線性關(guān)系考察逡逑Ｆｉｇ．２邋Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｌｉｎｅａｒ邋ｒｅｌａｔｉｏｎｓ逡逑．３精密度考察逡逑計(jì)算得出混合對照品溶液中各成分的峰面積ＲＳＤ值均符合要求，表明儀器精。結(jié)果見表３。逡逑４０逡逑

圖３單胺類神經(jīng)遞質(zhì)ＨＰＬＣ色譜圖逡逑注：Ａ．陰性對照；Ｂ．標(biāo)準(zhǔn)品溶液；Ｃ．樣品溶液；逡逑１．多巴胺；２．５－羥吲哚乙酸；３．高香草酸；４．５?

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