發(fā)布時(shí)間：2020-08-04 17:08

【摘要】：目的:腹膜透析中,葡萄糖仍是腹膜透析液中標(biāo)準(zhǔn)的、應(yīng)用最廣泛的滲透劑。腹膜若長期暴露在含高糖的腹膜透析液中,可致腹膜結(jié)構(gòu)和功能紊亂,引起腹膜纖維化、超濾衰竭,是尿毒癥患者退出腹膜透析的重要原因。其中一個(gè)重要原因是高糖可能通過抑制自噬途徑致腹膜纖維化的發(fā)生,因此,自噬途徑可作為治療腹膜纖維化的新靶點(diǎn)。姜黃素作為一種中藥制劑,因其無毒、副作用小且多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)的作用特點(diǎn),在抗纖維化方面有廣闊的臨床應(yīng)用前景。因此,我們探討姜黃素通過調(diào)節(jié)自噬途徑在高糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞纖維化的保護(hù)作用,為腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化的防治提供新的思路。方法:1.人腹膜間皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),給予哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制劑雷帕霉素(Rapamycin,R)10nmol/l預(yù)刺激1h,然后在高糖環(huán)境中培養(yǎng)24小時(shí)。將腹膜間皮細(xì)胞分三組:正常對照組(L,25mmol/l)、高糖組(G,126mmol/l)、高糖組+雷帕霉素組(GR,G126mmol/l+R10nmol/l),Westernblot法檢測纖維化指標(biāo)E-cadherin、α-SMA及自噬指標(biāo)LC3II/I、Beclin-1的表達(dá)。2.采用MTT法檢測人腹膜間皮細(xì)胞的生存率,最終確定姜黃素(Curcumin,C)刺激濃度范圍為0-10umol/L,將腹膜間皮細(xì)胞分組,分別給予姜黃素(1,5,10umol/l)預(yù)刺激1h,然后在高糖環(huán)境中培養(yǎng)24小時(shí)。共分五組:對照組(L,25mmol/l)、高糖組(G,126mmol/l)、高糖+姜黃素1umol/l(GC1,G126mmol/l+C1umol/l)、高糖+姜黃素5umol/l(GC5,G126mmol/l+C5 umol/l)、高糖+姜黃素10umol/l(GC10,G126mmol/l+C10 umol/l)。Westernblot法檢測纖維化指標(biāo)E-cadherin、α-SMA及自噬指標(biāo)LC3II/I、Beclin-1的表達(dá)。結(jié)果:1.高糖可減弱自噬導(dǎo)致腹膜纖維化的發(fā)生Western blot結(jié)果顯示,與對照組比,高糖組纖維化指標(biāo)E-cadherin(P0.05)表達(dá)減少、α-SMA(P0.05)表達(dá)增加,伴隨LC3II/I的比值(P0.05)及Beclin-1(P0.05)表達(dá)顯著減少。與高糖組相比,雷帕霉素組的自噬指標(biāo)LC3II/I、Beclin-1表達(dá)增加,伴隨纖維化指標(biāo)E-cadherin表達(dá)增加、α-SMA表達(dá)下降(均P0.05)。2.姜黃素以劑量依賴性逆轉(zhuǎn)自噬減弱高糖導(dǎo)致的腹膜纖維化的發(fā)生Western blot結(jié)果顯示,與高糖組相比,姜黃素組E-cadherin(P0.05)表達(dá)上調(diào)及α-SMA(P0.05)的表達(dá)下調(diào),LC3II/I的比值(P0.05)及Beclin-1表達(dá)上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:高糖可通過抑制自噬作用導(dǎo)致腹膜纖維化的發(fā)生;姜黃素上調(diào)自噬改善高糖誘導(dǎo)的腹膜纖維化,并在一定范圍內(nèi)(0-10ummol/l)具有濃度依賴性。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果2.1 高糖可減弱自噬導(dǎo)致腹膜纖維化的發(fā)生與對照組 L 相比，高糖組腹膜纖維化指標(biāo) E-cadherin 表達(dá)減見圖 1A、圖 1B；同時(shí)，LC3II/I、Beclin-1 表達(dá)下降（均 P＜0.0雷帕霉素作為自噬誘導(dǎo)劑[21]，可使自噬相關(guān)基因如 LC3II/I、Bec素對高糖刺激的腹膜間皮細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，上調(diào)自噬，與 G 組相比Beclin-1 表達(dá)增加，見圖 1C、圖 1D，伴隨纖維化指標(biāo) E-cadhe表達(dá)下降（均 P＜0.05），圖 1A、圖 1B。這進(jìn)一步說明上調(diào)自噬糖減弱自噬導(dǎo)致腹膜纖維化的發(fā)生。

圖 2.不同濃度姜黃素干預(yù)后細(xì)胞存活率比較2.3 姜黃素以劑量依賴性逆轉(zhuǎn)自噬減弱高糖導(dǎo)致腹膜纖維與高糖組比較，姜黃素組纖維化指標(biāo) E-cadherin 上調(diào)、α-SM見圖 3A、圖 3B，并顯著提高 LC3II/I、Beclin-1（均 P＜0.05），素可誘導(dǎo)自噬，可通過上調(diào)自噬減弱高糖誘導(dǎo)的腹膜纖維化的發(fā)同時(shí)，不同濃度的姜黃素組進(jìn)行比較，作用于腹膜間皮細(xì)胞Beclin-1 表達(dá)上調(diào)，腹膜纖維化指標(biāo) E-cadherin 表達(dá)上調(diào)，α-SM因此，0-10umol/l 濃度范圍內(nèi)，隨著姜黃素濃度的增加，上述作姜黃素在 0-10umol/l 范圍內(nèi)逆轉(zhuǎn)自噬減弱高糖誘導(dǎo)的腹膜纖維化賴性。

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本文編號：2780838