發(fā)布時間：2020-08-04 15:49

【摘要】：目的:本文通過動物實驗和細胞實驗研究枸杞多糖(LBP)對酒精性肝損傷的預(yù)防和修復作用及其抗氧化機制,為LBP的高值化利用提供實驗及理論依據(jù)。方法:1.LBP對小鼠酒精性肝損傷保護作用的研究。將小鼠隨機分為8組,分別為對照組、模型組、LBP低劑量組、LBP中劑量組、LBP高劑量組及陽性對照低劑量組、陽性對照中劑量組和陽性對照高劑量組,建立LBP保護酒精性肝損傷動物模型,檢測小鼠肝臟指標及血清轉(zhuǎn)氨酶含量。2.LBP對酒精性肝細胞損傷預(yù)防及修復作用的機制研究。(1)培養(yǎng)L-02細胞,采用MTT法篩選乙醇和LBP的作用濃度及時間,建立酒精性肝細胞損傷模型。將肝細胞隨機分為6組,分別為正常對照組、模型組、陽性對照+乙醇預(yù)防組、LBP+乙醇預(yù)防組、乙醇+陽性對照修復組、乙醇+LBP修復組。(2)用流式細胞法檢測LBP對細胞凋亡的影響,激光共聚焦顯微鏡及熒光分光光度法檢測細胞內(nèi)ROS水平;化學法檢測細胞中AST、ALT和GSH含量、MDA水平,SOD活性和GSH-Px活性,抗O_2~-·能力及NO含量。(3)Western blot法檢測細胞中胞漿胞核Nrf2的表達及總蛋白中HO-1、NQO1、GCLC的表達。結(jié)果:1.陽性對照中劑量組及高劑量組、LBP低劑量組及中劑量組均可顯著降低小鼠酒精性肝損傷的肝臟指數(shù),LBP高劑量組及陽性對照低劑量組小鼠肝臟指數(shù)與模型組比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。LBP各劑量組均可顯著降低酒精性肝損傷小鼠血清ALT含量,其中LBP低劑量組及中劑量組血清AST含量也降低;與模型組相比,陽性對照各劑量組均可顯著降低小鼠血清中ALT含量,其中陽性對照低劑量組和中劑量組血清AST含量也降低。2.(1)建立酒精損傷L-02細胞模型并優(yōu)選出LBP對酒精性肝細胞損傷預(yù)防和修復濃度及時間。最終以終濃度為5%(V/V)的無水乙醇損傷4h建立酒精損傷肝細胞模型,質(zhì)量濃度為24μg/mL的LBP干預(yù)24h為干預(yù)條件。(2)LBP的預(yù)防和修復作用可以減少酒精損傷L-02細胞后的細胞凋亡率。與正常對照組對比,模型組中細胞早期+晚期凋亡率顯著增加(P0.05);與模型組相比,LBP預(yù)防及修復組中細胞凋亡率降低(P0.05)。與正常對照組比較,模型組細胞中SOD、GSH-Px活性及抗O_2~-·能力降低且GSH生成量明顯減少(P0.05),細胞中MDA水平及NO含量升高(P0.05);與模型組比較,LBP預(yù)防組及修復組中細胞的GSH-Px活性升高且GSH生成量增加,MDA及NO含量均降低(P0.05),其中修復組中細胞的SOD活性及抗O_2~-·能力增強。預(yù)防組中細胞SOD活性及抗O_2~-·能力與模型組相比無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)與正常對照組相比,模型組肝細胞胞核中Nrf2蛋白表達水平及其下游的抗氧化蛋白HO-1、NQO1和GCLC的表達量均顯著降低(P0.05),但LBP干預(yù)可增加Nrf2蛋白的入核表達,明顯上調(diào)胞核中Nrf2蛋白及其下游蛋白HO-1、NQO1和GCLC的表達量(P0.05)。結(jié)論:LBP對小鼠酒精性肝損傷具有一定的保護作用。其機制與調(diào)控Nrf2/HO-1信號通路、清除活性氧自由基和活性氮的水平以及抗凋亡有關(guān)。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

學位論文 枸杞多糖對酒精性肝損傷表 2-1 LBP 對酒精性肝損傷肝臟指數(shù)的影響（x Table 2-1 Effect of LBP on liver index of alcoholic liver i 劑量(g/kg) 動物數(shù)（只） 肝組 10 組 7 低劑量組 0.05 10 中劑量組 0.1 11 高劑量組 0.3 11 劑量組 0.06 11 劑量組 0.12 11 劑量組 0.36 11 比較：##P<0.01; 與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01，***P

學位論文 枸杞多糖對酒精性肝損傷的保護作表 2-2 LBP 對酒精性肝損傷轉(zhuǎn)氨酶含量的影響（x ±s）le 2-2 Effect of LBP on transaminase content in alcoholic liver injury 劑量(g /kg) 動物數(shù)（只） ALT（U.L-1） 10 82.5±28.5 7 538.9±203.0##劑量組 0.05 10 328.2±91.5*劑量組 0.1 11 276.6±76.0***劑量組 0.3 11 309.4±73.0***量組 0.06 11 289.6±79.0***量組 0.12 11 311.0±61.9***量組 0.36 11 336.6±66.5**比較:##P<0.01,###P<0.005; 與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01，***P<0.005

ANOVA）分析；若方差不齊，采用秩和檢（x ±s）的形式表示。檢驗水準 α=0.05，與模計學意義。與對照組相比，#P<0.05，##P<0.1 軟件繪圖。傷的模型建立度篩選終濃度為 2%、3%、4%、5%、6%（V/V）力的變化。結(jié)果如圖 3-1 顯示，經(jīng)不同濃度顯著的低于對照組（P<0.05）。與此同時，降低，為保證在實驗后期中細胞數(shù)量足夠，V/V）對肝細胞損傷，此時細胞活力為（60

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本文編號：2780758