發(fā)布時間：2020-08-04 14:36

【摘要】：目的:從南葶藶子中篩選出具有抗腫瘤活性的有效部位(乙酸乙酯浸膏),并初步探討其有效部位對人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞增殖、凋亡的影響,進(jìn)一步采用活性追蹤分離法對南葶藶子的有效部位進(jìn)行研究,尋找新的活性化合物。方法:1.運(yùn)用放大鏡、光學(xué)顯微鏡等手段對葶藶子進(jìn)行性狀和顯微鑒別,采用膨脹度測定法測量葶藶子的膨脹度。2.采用溶劑提取法和系統(tǒng)溶劑萃取法對南葶藶子進(jìn)行粗分,獲得不同極性的浸膏樣品。3.MTT法檢測南葶藶子甲醇浸膏各萃取部位的細(xì)胞毒性,篩選出有效部位。4.集落克隆法檢測南葶藶子乙酸乙酯浸膏對人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞增殖抑制的作用。5.建立人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,檢測南葶藶子乙酸乙酯浸膏的體內(nèi)抗腫瘤活性及其毒性。6.Annexin V-FITC/PI法檢測南葶藶子乙酸乙酯浸膏對人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞凋亡的影響。7.免疫印跡法檢測南葶藶子乙酸乙酯浸膏對蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bax蛋白表達(dá)的影響。8.運(yùn)用制備薄層色譜法、硅膠柱層析法、半制備高效液相色譜法和高效液相色譜法等技術(shù)對南葶藶子的乙酸乙酯浸膏進(jìn)行提取分離,獲得活性化合物。9.MTT法檢測活性化合物對4種人腫瘤細(xì)胞(H1975細(xì)胞、CNE-2Z細(xì)胞、MDA-MB-231細(xì)胞、SGC-7901細(xì)胞)的增殖抑制作用,并計算IC_(50)值。結(jié)果:1.顯微鑒別和膨脹度測定結(jié)果顯示,本研究所用的葶藶子為南葶藶子。2.通過對南葶藶子進(jìn)行甲醇浸提并對其進(jìn)行分級萃取,得到南葶藶子甲醇浸膏373.66 g,正己烷層浸膏108.28 g,二氯甲烷層浸膏15.32 g,乙酸乙酯層浸膏6.23 g,水層浸膏197.42 g。3.MTT和集落克隆法結(jié)果顯示,南葶藶子乙酸乙酯浸膏呈劑量依賴和時間依賴的方式抑制人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞的增殖。4.人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞裸鼠移植瘤模型結(jié)果表明,南葶藶子乙酸乙酯浸膏在裸鼠體內(nèi)表現(xiàn)出較好的抗腫瘤活性及較低毒性。5.Annexin V-FITC/PI結(jié)果表明,南葶藶子乙酸乙酯浸膏能誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞的凋亡。6.Western blot結(jié)果顯示,南葶藶子乙酸乙酯浸膏能夠下調(diào)Akt和Bcl-2蛋白的表達(dá),上調(diào)Bax蛋白的表達(dá)。7.通過對南葶藶子乙酸乙酯浸膏的分離,得到了活性化合物芥子酸、GJH2-51-1和GJH2-52-1。8.芥子酸對H1975、CNE-2Z、MDA-MB-231、SGC-7901細(xì)胞的IC_(50)值分別為7.94、6.34、19.28、33.72μg/mL;GJH2-51-1對H1975、CNE-2Z、MDA-MB-231、SGC-7901細(xì)胞的IC_(50)值分別為6.23、7.26、22.06、12.09μg/mL;GJH2-52-1對H1975、CNE-2Z、MDA-MB-231、SGC-7901細(xì)胞的IC_(50)值分別為14.20、16.25、59.42、33.72μg/mL。結(jié)論:1.南葶藶子乙酸乙酯浸膏具有抑制人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡的能力,并且具有較好的體內(nèi)抗人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞活性和低毒性,為中藥南葶藶子的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。2.芥子酸、GJH2-51-1和GJH2-52-1對H1975和CNE-2Z細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用,對MDA-MB-231和SGC-7901細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

圖 1. 葶藶子微性狀特征圖 (A): 10×10 倍放大情況下拍攝 (B): 10×20 倍放大情況下拍Fig. 1 The appearance and micromorphological features of the Descurainia sophia L.(A): Shooting at 10×10 magnification (B): Shooting at 10×20 magnification1.3.2 葶藶子樣品粉末制片的顯微特征

2. 葶藶子粉末顯微特征圖 (A)：種皮表皮細(xì)胞(10×40 倍) (B)：種皮內(nèi)表皮細(xì)胞（10×20 Fig. 2 Powder microstructure of the Descurainia sophia L. (A): Epidermal cells of seed coat(10×40 times) (B): Endothelial cells of seed coat (10×20 times).3.3 葶藶子樣品的理化性質(zhì)

圖 3. 南葶藶子乙酸乙酯浸膏的制備eparation of the methanol-ethyl acetate partitioned fraction from Descurainia用南葶藶子甲醇浸膏各萃取部位（20、100 μg/mL）處理人非5 細(xì)胞，作用 48 h，觀察各組腫瘤細(xì)胞的存活率。MTT 結(jié)果顯示

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2780684