【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種病因和發(fā)病機制尚不明確的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,主要臨床表現(xiàn)為進行性記憶力減退、認知功能障礙及人格改變等癥狀。關(guān)于AD的發(fā)病機制尚沒有統(tǒng)一的說法,普遍接受的觀點是β-淀粉樣蛋白(Amyloid beta,Aβ)的產(chǎn)生和清除失衡,導(dǎo)致大腦中Aβ過度沉積,促進AD的發(fā)病。目前臨床使用的藥物只能延緩AD病程的發(fā)展,缺乏理想的藥物預(yù)防或治療AD。因此,AD發(fā)病機制研究及其藥物篩選成為廣大研究者關(guān)注的熱點。燈盞花素是燈盞細辛的總黃酮有效部位,長期用于治療中風偏癱和心絞痛。最新的研究發(fā)現(xiàn)其主要成分燈盞乙素可抑制Aβ的體外聚集,而且,對Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞毒性具有抵抗作用,說明燈盞花素可能有利于AD的治療。經(jīng)系統(tǒng)地文獻檢索,發(fā)現(xiàn)有關(guān)燈盞花素的神經(jīng)保護機制的研究較少。本研究采用側(cè)腦室注射Aβ1-42的方法建立AD小鼠模型,于模型建立的第二天給藥。假手術(shù)組和AD模型組小鼠灌胃生理鹽水,燈盞花素給藥組小鼠灌胃低(35 mg/kg,Bre-L)、中(70 mg/kg,Bre-M)和高(140 mg/kg,Bre-H)劑量的燈盞花素,陽性藥物組小鼠灌胃多奈哌齊溶液(劑量為1 mg/kg)。每天灌胃一次,直至實驗結(jié)束。通過Morris水迷宮實驗驗證模型,采用HPLC-QTOF-MS代謝組學(xué)方法研究燈盞花素干預(yù)前后AD小鼠血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的變化情況,鑒定潛在的生物標志物,從分子水平闡明燈盞花素對AD小鼠的神經(jīng)保護作用機制。在Morris水迷宮實驗中,定向航行實驗表明,所有組別小鼠的逃避潛伏期隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加均有所減少,與假手術(shù)組小鼠比較,AD模型組小鼠找到安全平臺需要更長的時間。與假手術(shù)組小鼠比較,AD模型組小鼠在第4、6、7和8次訓(xùn)練中的逃避潛伏期顯著延長(p0.01或p0.05),說明AD小鼠模型建立成功。另外,和AD模型組小鼠比較燈盞花素低、中、高三個劑量給藥組小鼠及陽性藥物組小鼠的逃避潛伏期都不同程度的縮短,燈盞花素高劑量給藥組小鼠在第7次訓(xùn)練中以及陽性藥物組小鼠在第8次訓(xùn)練中逃避潛伏期顯著縮短(0.01)。在空間探索實驗中,與假手術(shù)組小鼠比較,AD模型組小鼠在目標象限的游泳路程占總路程的百分比顯著降低(p0.01);另外,與AD模型組小鼠比較,燈盞花素中、高劑量給藥組和陽性藥物組小鼠在目標象限的游泳路程占總路程的百分比顯著增加(p;0.05)。與假手術(shù)組小鼠比較,AD模型組小鼠在目標象限的持續(xù)時間明顯縮短(p0.01)。另外,與AD模型組小鼠比較,燈盞花素高劑量給藥組和陽性藥物組小鼠在目標象限的持續(xù)時間顯著延長(p0.05)。綜上,燈盞花素能夠劑量依賴性改善AD小鼠的學(xué)習記憶能力。采用HPLC-QTOF-MS對小鼠血漿進行分析,正離子模式下采集的原始數(shù)據(jù)直接導(dǎo)入Profile analysis 2.0軟件,聚類窗口的質(zhì)量數(shù)設(shè)定為0.05 Da(m/z 50-1000),保留時間的范圍設(shè)定為0.3 min(0-30min)。每個圖譜中的所有離子進行離子強度的歸一化處理,然后根據(jù)“80%規(guī)則”去除數(shù)據(jù)中的缺失值。軟件自動生成用于多元統(tǒng)計分析的矩陣。該矩陣包含離子的保留時間、質(zhì)荷比和離子強度信息。采用SIMCA-P 13.0軟件對數(shù)據(jù)先進行主成分分析(PCA),然后經(jīng)Par預(yù)處理后進行正交-偏最小二乘投影判別分析(OPLS-DA),篩選出10個潛在生物標志物。進一步用MS/MS對潛在的生物標志物進行分析,通過碰撞誘導(dǎo)解離(CID),碰撞能量分別為20 eV和40 eV,得到潛在生物標志物的子離子。通過與對照品的保留時間、精確質(zhì)量和子離子數(shù)據(jù)比對或者檢索在線數(shù)據(jù)庫METLIN和HMDB,堅定了其中8個潛在生物標志物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。它們分別是3-吲哚丙烯酸、C16二氫神經(jīng)鞘氨醇、溶血磷脂酰乙醇胺(22:6)、膽石酸3-O-硫酸酯、溶血磷脂酰膽堿(16:0)、磷脂酸(22:1/0:0)、牛磺脫氧膽酸和磷脂酰膽堿(0:0/18:0)。通過對以上8個生物標志物代謝途徑的分析,本研究認為燈盞花素可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、提高機體5-羥色胺水平和降低體內(nèi)膽固醇含量改善AD小鼠的學(xué)習記憶能力,發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

由單體聚合成低聚物，最終形成不溶性神經(jīng)炎性斑塊，對神經(jīng)元功能的毒性作用逡逑顯著，尤其損傷學(xué)習記憶能力。ＡＰ由ＡＰＰ經(jīng)分泌酶水解而來，其在體內(nèi)的代謝途徑分為逡逑兩種，如圖１所示，一是經(jīng)過ａ分泌酶分解，形成ｃｔ分泌片段和Ｃ８３蛋白，繼而在丫分泌逡逑酶作用下，Ｃ８３蛋白分解為Ｐ３和位于細胞內(nèi)且具有轉(zhuǎn)錄活性的ＡＰＰ片段（ＡＰＰ邋ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ逡逑ｄｏｍａｉｎ，邋ＡＩＣＤ），這種途徑不產(chǎn)生ＡＰ；二是經(jīng)ｐ分泌酶分解為｜３分泌片段和Ｃ９９蛋白，同逡逑樣再經(jīng)Ｙ分泌酶作用，產(chǎn)生ＡＰ和ＡＩＣＤ［７］。所產(chǎn)生的ＡＰ片段有Ａｐｌ－４０和Ａｐｌ－４２兩種，逡逑Ａｐｌ－４０是可溶性ＡＰ的主要形式，而Ａｐｉ－４２則是老年斑的主要成分，正常體內(nèi)兩者的比逡逑例大概是９：１，與ＡＰ１－４０比較，Ａｐｉ－４２更容易聚集，也具有更強的神經(jīng)毒性［９］。逡逑在正常生理狀態(tài)下，ＡＰ的生成和清除處于動態(tài)平衡，組織中ＡＰ的清除機制涉及酶逡逑的降解、受體介導(dǎo)的細胞清除和血管清除以及Ａ｜３在腦中的其他清除方式［１（）］。中性內(nèi)肽酶逡逑

圖２小鼠側(cè)腦室注射位點逡逑Ｆｉｇ．２．邋Ｍｉｃｅ邋ｌａｔｅｒａｌ邋ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ邋ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ邋ｓｉｔｅ逡逑驗逡逑天進行Ｍｏｍｓ水迷宮實驗。Ｍｏｒｒｉｓ水迷５０邋ｃｍ，全平直９邋ｃｍ）、

我們發(fā)現(xiàn)，在定向航行實驗中，所有組別小鼠的逃避潛伏期隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加均逡逑有所減少，與假手術(shù)組小鼠（Ｓｈａｍ）相比，ＡＤ模型組小鼠（ＡＤ邋ｍｏｄｅｌ）找到安全平臺需逡逑要更長的時間。如圖４所示，與Ｓｈａｍ組小鼠比較，ＡＤ邋ｍｏｄｅｌ組小鼠在第４、６、７和８次逡逑訓(xùn)練中的逃避潛伏期顯著延長（ｐ＜邋０．０１或ｐ＜邋０．０５），說明ＡＤ小鼠模型建立成功。另外，逡逑和ＡＤｍｏｄｅｌ組小鼠比較燈盞花素低（Ｂｒｅ－Ｌ）、中（Ｂｒｅ－Ｍ）、高（Ｂｒｅ－Ｈ）三個劑量給藥組逡逑小鼠及陽性藥物對照組小鼠（Ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ）的逃避潛伏期都不同程度的縮短，Ｂｒｅ－Ｈ組小鼠逡逑在第７次訓(xùn)練中以及陽性藥物組小鼠在第８次訓(xùn)練中逃避潛伏期顯著縮短（ｐ＜邋０．０１）。逡逑１１１１１１）１１１１１１逡逑圖４定向航行實驗的逃避潛伏期逡逑Ｆｉｇ．４．邋Ｅｓｃａｐｅ邋ｌａｔｅｎｃｙ邋ｉｎ邋ｏｒｉｅｎｔｅｄ邋ｎａｖｉｇａｔｉｏｎ邋ｔｅｓｔ．逡逑２．２空間探索實驗逡逑在空間探索實驗中，如圖５所示，與Ｓｈａｍ組小鼠比較，ＡＤｍｏｄｅｌ組小鼠在第四象限逡逑的游泳路程占總路程的百分比顯著降低（ｐ＜０．０１）。另外，與Ｍｏｄｅｌ組小鼠比較，Ｂｒｅ－Ｍ、逡逑Ｂｒｅ－Ｈ和Ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ組小鼠在第四象限的路程占總路程的百分比顯著增力□（尸＜邋0．0５）。如圖逡逑６所示，與Ｓｈａｍ組小鼠比較，Ｍｏｄｅｌ組小鼠在第四象限的持續(xù)時間明顯縮短（Ｐ＜0．0１）；逡逑另夕卜，與Ｍｏｄｅｌ組小鼠比較，Ｂｒｅ－Ｈ和Ｄｏｎｅｐｅｚｉｌ組小鼠在第四象限的持續(xù)時間顯著延長（ｐ逡逑＜０．０５）。逡逑小鼠在空間探索實驗中的運動軌跡如圖７所示。與Ｓｈａｍ組小鼠比較

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 童春媚;楊炳偉;;燈盞花素理化性質(zhì)的探究[J];學(xué)園;2017年20期

2 童春媚;楊炳偉;;燈盞花素的臨床研究及作用機制[J];人人健康;2017年14期

3 費洪柱;;高效液相色譜法測定燈盞花素片中野黃芩苷的含量[J];山東醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校學(xué)報;2012年02期

4 宋崎;樊敏偉;;不同廠家燈盞花素片的體外溶出度考察[J];中成藥;2008年09期

5 鄧潔雄;顏惠芳;;燈盞花素片質(zhì)量標準提高研究[J];現(xiàn)代食品與藥品雜志;2007年02期

6 祝雄;王瑞珍;;燈盞花素片致瘀斑1例[J];醫(yī)藥導(dǎo)報;2006年09期

7 居文政,談恒山,汪軍;不同廠家燈盞花素片溶出度的比較[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2005年10期

8 張品稚;燈盞花素片治療中風后遺癥32例臨床分析[J];中成藥;1998年01期

9 王化忠;施美臻;楊春蘭;李瑾章;;燈盞花素片治療腦血管病的臨床觀察[J];中風與神經(jīng)疾病雜志;1987年04期

10 王兆鉞;陳德春;何楊;阮長耿;;新燈盞花素體內(nèi)抗血栓形成的作用[J];中西醫(yī)結(jié)合雜志;1989年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 杜飛;高原;姚君;王興紅;;燈盞花素抑制高糖誘導(dǎo)大鼠近端小管上皮細胞的氧化應(yīng)激[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會腎病專業(yè)委員會成立暨中西醫(yī)結(jié)合診治腎臟病學(xué)習班論文匯編[C];2011年

2 王文林;藍利東;;燈盞花素聯(lián)合賴諾普利治療高血壓腎病的療效觀察[A];2012年浙江省醫(yī)學(xué)會臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)年會暨醫(yī)院藥事管理質(zhì)控中心、臨床藥學(xué)分會十周年慶典大會論文集[C];2012年

3 錢傳云;郝萍;陳榮琳;王燕瓊;王云徽;許汪斌;馮忠堂;;燈盞花素抑制血管平滑肌細胞增殖的分子基礎(chǔ)研究[A];《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第五屆組稿會論文匯編[C];2006年

4 周tx;于筠;袁魯;劉念;韓克捷;戴宏偉;;燈盞花素聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞治療鼠腦梗塞模型的研究[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會神經(jīng)外科專業(yè)委員會第四屆學(xué)術(shù)大會暨2017年Fukushima浦東鞍區(qū)病變研討會及培訓(xùn)班論文匯編[C];2017年

5 賈永艷;祝俠麗;田效志;黃海英;魏超娟;;高效毛細管電泳法測定燈盞花素固體分散體中野黃芩苷的含量[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

6 夏玉葉;鐘雁;章蘭芳;閔e

本文編號：2780408