【摘要】：目的:采用水提醇沉法、高效液相色譜法對龍膽酒制前后的粗多糖含量和精多糖中單糖組成進(jìn)行研究;采用Elisa法對龍膽酒制前后的藥性差異,以及對大鼠保肝和抗黃疸作用的藥效學(xué)差異進(jìn)行研究,從化學(xué)成分和藥效學(xué)差異方面初步探討其酒制機(jī)理。材料與方法:材料:采挖遼寧省清原縣龍膽種植基地的龍膽藥材,經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李峰教授鑒定為龍膽科植物龍膽(Gentiana scabra Bge.)的根莖。收集23個地區(qū)市售龍膽飲片,按照2015版《中國藥典》收錄的方法進(jìn)行酒制,得到相應(yīng)的酒龍膽。方法:1.采用水提醇沉法對23個不同地區(qū)收集所得龍膽飲片及對應(yīng)炮制品進(jìn)行處理,獲得龍膽粗多糖,采用苯酚-濃硫酸使龍膽粗多糖顯色后,再采用紫外-分光光度計外標(biāo)一點(diǎn)法測得不同來源的龍膽及其酒制品中粗多糖的含量。2.采用Sevage法對水提醇沉所得粗多糖進(jìn)行沉蛋白處理,得到龍膽精多糖,經(jīng)三氟乙酸水解后,采用HPLC-ELSD法檢測其中單糖種類,比較酒制前后多糖中單糖組成以及含量的差異變化。3.對SD大鼠分別灌胃酒制前后的高低劑量龍膽水提液,記錄宏觀體征(體質(zhì)量和肛溫),Elisa試劑盒檢測大鼠的血漿物質(zhì)代謝(乳酸LA、丙酮酸PA和甘油三酯TG)、肝組織能量代謝(Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶)、胃粘膜激素水平(胃動素MTL、胃泌素GAS、前列腺素E_2)的異同,明確龍膽酒制前后苦寒之性的差異。4.分別灌胃酒制前后的高中低劑量龍膽水提液,采用腹腔注射四氯化碳法復(fù)制大鼠急性肝損傷模型,Elisa試劑盒檢測大鼠血漿ALT、AST、TNF-α、MCP-1、IL-6以及肝組織SOD、MDA、GSH、GSH-Px的含量,HE染色法鏡下觀察各組大鼠肝病變程度。5.大鼠在濕熱環(huán)境下高脂肪飲食,期間預(yù)防性灌胃酒制前后的高中低劑量龍膽水提液后,灌胃ANIT油溶液誘導(dǎo)黃疸模型,Elisa試劑盒檢測大鼠血漿ALT、AST、ALP、TBIL、D-BiL、TBA以及肝組織MDA、GSTs的含量。熒光定量PCR法測定NTCP、BSEP、MRP2和MRP3的基因表達(dá)水平。結(jié)果:1.23個不同來源的龍膽多糖含量在1.50%~3.31%之間,經(jīng)酒制后龍膽多糖含量在2.29%~4.88%之間。2.生龍膽總多糖中單糖的組成為Glc、Fru和Gal,其摩爾比為Glc:Fru:Gal=4.04:0.43:1;酒制后精多糖中各單糖組成未發(fā)生變化,但其含量以及摩爾比有所變化,摩爾比為Glc:Fru:Gal=4.32:1.19:1。3.灌胃生龍膽后,大鼠宏觀體征下降、物質(zhì)能量代謝減緩、胃粘膜受到刺激,其中體質(zhì)量、肛溫、血漿中LA、PA、肝組織中Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、胃粘膜中PEG_2和MTL等藥效學(xué)指標(biāo)下降,血漿中TG含量、胃粘膜中GAS含量上升。酒龍膽對這10種指標(biāo)的改變具有顯著的回調(diào)作用。4.生龍膽、酒龍膽均能明顯降低由四氯化碳導(dǎo)致的急性肝損傷大鼠體內(nèi)ALT、AST、TNF-α、MCP-1、IL-6、MDA含量,酒龍膽組大鼠TNF-α、MCP-1、IL-6含量比生龍膽組大鼠下降更為顯著。生龍膽、酒龍膽均能明顯提高SOD、GSH、GSH-Px含量,生龍膽組大鼠GSH、GSH-Px含量較酒龍膽組上升更為顯著。5.生龍膽、酒龍膽均能明顯降低黃疸型肝炎大鼠體內(nèi)ALT、AST、MDA、ALP、TBIL、D-BiL、TBA、GSTs含量,且在對MDA和ALP的調(diào)控上,酒龍膽的效果明顯優(yōu)于生龍膽。黃疸型肝炎大鼠的NTCP、BSEP和MRP2的基因表達(dá)水平顯著下降,而MRP3的基因表達(dá)水平顯著上升,生龍膽和酒龍膽均有顯著的回調(diào)作用,且酒龍膽的效果更好。結(jié)論:1.龍膽經(jīng)酒制后,其多糖含量有不同不同程度的上升。龍膽精多糖水解后,其單糖組成為葡萄糖、果糖和半乳糖,酒制后組成成分無變化,但是含量有所改變,其中果糖含量顯著上升。2.酒制可使龍膽苦寒之性下降,改善其對大鼠生長、物質(zhì)代謝和能量代謝的抑制作用,以及減輕其對大鼠胃粘膜的刺激作用。生龍膽、酒龍膽對腹腔注射CCl_4油溶液所致的大鼠急性肝損傷均有一定保護(hù)作用,其中生龍膽提升肝組織的抗氧化作用較強(qiáng),酒龍膽消除炎癥因子、減輕炎癥反應(yīng)的作用較強(qiáng)。生龍膽、酒龍膽對灌胃ANIT油溶液所致的大鼠黃疸均有一定消除作用,且具備明顯量效關(guān)系,酒龍膽的藥效優(yōu)于生龍膽。3.化學(xué)成分變化與藥效變化的可能具備一定相關(guān)性,即酒制后多糖含量和單糖組成的改變可能是引起酒龍膽苦寒之性下降、保肝和消除黃疸作用增強(qiáng)的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R283
【圖文】：

圖 1-1-1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線2.4.2 穩(wěn)定性試驗 精密吸取遼寧新賓生龍膽粗多糖溶液 6 份，按 2.4 項下方法加入苯酚-濃硫酸后的 5，10，15，20，25，30 min 分別測定吸光度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6 份供試品溶液吸光度無明顯變化，RSD 為 1.11%。見表 1-1-1。

-1a：混合標(biāo)準(zhǔn)品

29圖 2-1 龍膽酒制前后對大鼠體質(zhì)量增長的影響注：#代表與空白組比較，P <0.05；##代表與空白組比較，P <0.01；△代表與同劑量生品組比較，P

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5 詹雅Z

本文編號：2780301