【摘要】：本論文對(duì)山楂多酚和多糖中的活性物質(zhì)進(jìn)行分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和作用機(jī)理初探,同時(shí)對(duì)山楂脂類提取物進(jìn)行成分分析和活性評(píng)價(jià)。以期促進(jìn)山楂的開發(fā)利用,為山楂資源的開發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。主要研究方法及結(jié)果如下:(1)以‘山里紅’山楂為材料,采用乙醇浸提、有機(jī)溶劑分級(jí)萃取、薄層層析、柱層析等分離純化方法,同時(shí)結(jié)合活性追蹤分離模式對(duì)山楂多酚中的活性成分進(jìn)行提取和分離純化;采用紫外分光光度法、熒光色譜法對(duì)山楂多酚活性成分的作用機(jī)理進(jìn)行初探;采用核磁共振波譜法結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)活性成分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。得到結(jié)果如下:山楂多酚乙酸乙酯萃取物(AF)具有最強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制活性,其抑制率的IC_(50)值分別為(98.26±0.21)μg/mL和(6.37±0.61)mg/mL。山楂多酚二氯甲烷萃取物(DF)具有最強(qiáng)的膽固醇脂酶抑制活性和DPPH?清除能力,AF次之。DF抑制膽固醇脂酶和清除DPPH?的IC_(50)值分別為(6.88±0.26)mg/mL和(65.31±0.21)μg/mL。從AF中分離純化得到5個(gè)單體化合物(A-E),鑒定出分別為熊果酸(B)、山奈酚(D)、槲皮素(E),其中化合物A和化合物C的結(jié)構(gòu)還有待進(jìn)一步鑒定。對(duì)單體化合物B、C、D、E進(jìn)行活性研究,結(jié)果顯示4個(gè)化合物表現(xiàn)出不同強(qiáng)度的α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶抑制活性和DPPH?清除能力,其中化合物E(槲皮素)對(duì)上述酶具有最強(qiáng)的的抑制能力和最強(qiáng)的DPPH?清除能力。研究槲皮素對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制機(jī)理,結(jié)果顯示槲皮素對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用是可逆非競(jìng)爭(zhēng)性抑制,并計(jì)算得到其抑制常數(shù)Ki為0.08 mmol/L。進(jìn)一步試驗(yàn)結(jié)果顯示,槲皮素是通過引起α-葡萄糖苷酶構(gòu)象的改變從而產(chǎn)生抑制作用。(2)以‘山里紅’山楂為材料,采用有機(jī)溶劑除脂、超聲波輔助熱水浸提、乙醇沉淀、Sevage除蛋白、膜分離、柱層析等分離純化方法,同時(shí)結(jié)合活性追蹤分離模式對(duì)山楂多糖中的活性成分進(jìn)行提取和分離純化;采用紫外分光光度法、熒光色譜法對(duì)山楂多糖活性成分的作用機(jī)理進(jìn)行初探;采用紅外光譜法、GPC法、柱前衍生化-HPLC法對(duì)活性均一多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。得到結(jié)果如下:從山楂粗多糖中分離純化得到6個(gè)多糖組分PCF1-PCF6,其中PCF1顯示出較好的α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制活性。對(duì)PCF1進(jìn)行進(jìn)一步的純化,得到均一多糖PCF1-1。研究PCF1-1對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制機(jī)理,結(jié)果顯示PCF1-1對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用是可逆混合性抑制,并計(jì)算得到其抑制常數(shù)Ki為0.66 mg/mL。對(duì)PCF1-1的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明其重均分子量Mw為26530 Da,數(shù)均分子量Mn為8755 Da,Z均分子量Mz為7.339×10~4 Da,且主要由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和巖藻糖九種單糖組成。同時(shí)也使用紅外光譜對(duì)其特征性官能團(tuán)進(jìn)行了分析。(3)以‘山里紅’山楂為材料,采用石油醚浸提法得到山楂脂類提取物;采用紫外分光光度法對(duì)其生物活性進(jìn)行測(cè)定;同時(shí)采用滴定法對(duì)其理化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè);最后采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)其脂肪酸組成進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:山楂脂類提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶均有一定的抑制作用,也同樣對(duì)DPPH?具有清除能力。經(jīng)測(cè)定其酸值為(62.73±0.92)mg/g,過氧化值為(12.98±0.35)mmol/mL,皂化值為(593.89±3.21)mg/g,碘值為(102.82±0.91)g/100g。山楂脂類提取物由10種脂肪酸組成,其中以不飽和脂肪酸為主,主要為亞油酸(44.47%)、亞麻酸(24.76%)、棕櫚酸(12.26%)和肉豆蔻酸(6.23%)。
【學(xué)位授予單位】：浙江師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285;R284
【圖文】：

12山楂乙酸乙酯萃取物(AF)的分離流程如圖 2.1 所示。采用干法上樣：稱取酸乙酯萃取物（AF）20 g，用乙酸乙酯溶解后與等質(zhì)量的 100-200 目硅膠混合勻，50℃ 烘干后研磨得到均勻粉狀硅膠樣品。取上述的硅膠樣品上樣，進(jìn)200-300 目的硅膠柱層析。洗脫劑采用石油醚（PE）-乙酸乙酯（ETOAC）-甲（MeOH），洗脫梯度依次為 PE：ETOAC（100%PE，9:1，8:2，7:3，6:4，54:6，3:7，2:8，1:9，100% ETOAC）；ETOAC：MeOH（100% ETOAC ，8:26:4，5:5，4:6，3:7，1:9，100% MeOH）。每 150 mL 的洗脫液收集為一瓶，共集 167 瓶，減壓濃縮后，經(jīng)薄層層析、紫外燈檢測(cè)及顯色劑（硫酸-乙醇）顯色合并較純的相同組分，經(jīng)減壓蒸餾，獲得 5 個(gè)不同的組分（Ⅰ-Ⅴ）。之后將五

測(cè)定了不同濃度 AF 對(duì) α-葡萄糖苷酶的抑制活性，結(jié)果見圖2.3 和圖 2.4。從圖中可以看出，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著濃度升高，AF 對(duì) α-葡萄糖苷酶抑制率也逐漸上升，當(dāng)濃度大于 300 μg/mL 后，α-葡萄糖苷酶抑制率升高的速度漸緩。此外，AF 對(duì) α-葡萄糖苷酶抑制的 IC50值為（98.26±0.21）μg/mL，陽(yáng)性對(duì)照-阿卡波糖的 IC50值為（0.16±0.02）μg/mL。兩者雖相差較大，但由于阿卡波糖為純化學(xué)物質(zhì)，而 AF 為天然植物萃取物，結(jié)果同樣能說明 AF 具有 α-葡萄糖苷酶抑制能力。

測(cè)定了不同濃度 AF 對(duì) α-葡萄糖苷酶的抑制活性，結(jié)果見圖2.3 和圖 2.4。從圖中可以看出，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，隨著濃度升高，AF 對(duì) α-葡萄糖苷酶抑制率也逐漸上升，當(dāng)濃度大于 300 μg/mL 后，α-葡萄糖苷酶抑制率升高的速度漸緩。此外，AF 對(duì) α-葡萄糖苷酶抑制的 IC50值為（98.26±0.21）μg/mL，陽(yáng)性對(duì)照-阿卡波糖的 IC50值為（0.16±0.02）μg/mL。兩者雖相差較大，但由于阿卡波糖為純化學(xué)物質(zhì)，而 AF 為天然植物萃取物，結(jié)果同樣能說明 AF 具有 α-葡萄糖苷酶抑制能力。

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本文編號(hào)：2779376