【摘要】：前言:酒精性心肌病(Alcoholic cardiomyopathy)是指長期大量酒精攝入導(dǎo)致的以心臟擴(kuò)大、心律失常和充血性心力衰竭為特征的心肌病。酒精性心肌病目前已經(jīng)成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域中的常見疾病,其患病率及患病人口在發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家中逐年上升,它嚴(yán)重威脅到人類的健康,并耗費巨額衛(wèi)生資源。在酒精性心肌病的發(fā)病機(jī)制中,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與能量代謝成為近幾年研究的熱點。酒精誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)胰島素信號傳導(dǎo)障礙,這些誘導(dǎo)的損傷變化使心肌細(xì)胞能量代謝發(fā)生障礙,導(dǎo)致心臟功能不全,心功能降低,造成酒精性心肌病。因此,探索有效的藥物防治酒精誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷,抑制心肌細(xì)胞胰島素信號傳導(dǎo)通路障礙,改善心功能有著重要的臨床意義。姜黃素(C_(21)H_(20)O_6)是從中藥姜黃的根中提取的一種多酚化合物,藥理學(xué)性質(zhì)有抗氧化性、抗癌、抗血管生成、抗增殖和抗炎等作用。近年有報道在很多體內(nèi)和體外實驗中,姜黃素可以起到激活胰島素信號途徑的作用,也可作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激拮抗劑,發(fā)揮緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用。已有文獻(xiàn)報道姜黃素在酒精性肝病中存在抑制脂肪細(xì)胞變性的作用。我們以此為出發(fā)點去研究酒精性心肌病中,姜黃素能否通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進(jìn)而緩解胰島素抵抗,進(jìn)而解除心肌細(xì)胞糖代謝紊亂。目的:本實驗擬采用AC16心肌細(xì)胞,建立酒精性心肌病細(xì)胞模型,觀察在離體培養(yǎng)心肌細(xì)胞中,給予姜黃素是否可以減輕乙醇誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及糖代謝紊亂。材料與方法:1、以AC16細(xì)胞作為研究對象,設(shè)立正常對照組(不加任何干預(yù))、對照組(insulin)、乙醇(400mmol/l)組、姜黃素(50umol/l)+乙醇組(400mmol/l)、4-PBA+乙醇組(400mmol/l)。濃度根據(jù)已有文獻(xiàn)和預(yù)實驗確定。2、采用MTS法檢測不同濃度乙醇對心肌細(xì)胞存活率的影響以及選取最適乙醇和姜黃素濃度用于后續(xù)實驗。3、應(yīng)用RT-PCR方法檢測各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子mRNA表達(dá)量的變化。4、應(yīng)用Western blot方法檢測各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)因子GRP78、IRE1和胰島素信號通路相關(guān)因子IRS-1、AKT、p-IRS、p-AKT蛋白表達(dá)變化。5、用透射電鏡觀察各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激超微結(jié)構(gòu)變化。6、用葡萄糖氧化酶法檢測各組葡萄糖消耗情況。7、各實驗組數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(_?x±s)表示,利用IBM SPSS 21.0分析,兩組間數(shù)據(jù)差異比較采用單因素方差分析。P0.05為存在顯著性統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果:1、細(xì)胞存活率乙醇以濃度依賴的方式導(dǎo)致細(xì)胞的存活率下降,且濃度為400mmol/l時細(xì)胞存活率下降最為明顯,故后續(xù)實驗以400mmol/l為損傷條件。不同濃度姜黃素(0、5、10、20、50、100umol/l)處理細(xì)胞48小時對細(xì)胞生存率無明顯影響。姜黃素以濃度依賴的方式提高乙醇誘導(dǎo)細(xì)胞的存活率,姜黃素濃度達(dá)50umol/l時細(xì)胞生存率明顯提高,故以50umol/l來研究姜黃素的保護(hù)作用。2、乙醇組較對照組GRP78 mRNA、IRE1 mRNA表達(dá)量明顯增加,差異具有顯著性;姜黃素和4-PBA預(yù)處理后,GRP78 mRNA、IRE1 mRNA表達(dá)有所降低,與乙醇組比較差異具有顯著性。3、透射電鏡觀察對照組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)明顯異常,乙醇組可見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)異常,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹,內(nèi)部充滿未折疊蛋白,腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量增加,姜黃素和4-PBA與處理組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)異常程度較乙醇組有所減輕。4、Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、IRE1表達(dá),乙醇組較對照組表達(dá)明顯增加,姜黃素和4-PBA預(yù)處理組GRP78、IRE1表達(dá)較乙醇組降低,差異具有顯著性。P-IRS-1(Thr308)和p-AKT(Thr308)蛋白表達(dá)在乙醇組明顯下降,姜黃素和4-PBA組IRS-1(Thr308)和p-AKT(Thr308)較乙醇組表達(dá)增加,差異具有差異性。5、葡萄糖消耗量檢測乙醇組在胰島素刺激下葡萄糖消耗量下降顯著,姜黃素和4-PBA預(yù)處理組在胰島素刺激下較乙醇組葡萄糖消耗量升高,差異具有顯著性。結(jié)論:乙醇可使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、胰島素抵抗相關(guān)因子表達(dá)升高,使糖代謝異常,而姜黃素可發(fā)揮與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激拮抗劑相似的作用,通過緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進(jìn)而促進(jìn)糖代謝的恢復(fù),姜黃素為酒精性心肌病在藥物治療方面提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果濃度乙醇作用下 AC16 細(xì)胞存活率檢測 MTS 法測定不同濃度乙醇（0、100、200、300、400、500、60 細(xì)胞存活率的影響，選擇最適宜的乙醇濃度用于后續(xù)實驗。選取率下的乙醇處理濃度，結(jié)果可見當(dāng)濃度達(dá)到 400mmol/l 時細(xì)胞存±0.04%（n=3, p＜0.01），故本實驗選取 400mmol/l 濃度乙醇為最適

圖 2 不同濃度姜黃素對細(xì)胞存活率的影響不同濃度的姜黃素作用于 AC16 細(xì)胞：0、5、10、20、50、100(umo細(xì)胞存活率，數(shù)值以百分比表示( x±s)。濃度姜黃素和乙醇作用下細(xì)胞存活率檢測 細(xì)胞在 400mmol/l 的乙醇作用下存活率下降明顯，故選取此黃素在上述濃度梯度的作用下生存率無明顯影響，故用不同后，再用 400mmol/l 的乙醇刺激細(xì)胞，當(dāng)姜黃素濃度在 50um為 83.89±0.02%（n=3，p＜0.05），故選取最適姜黃素濃度為 5。

圖 2 不同濃度姜黃素對細(xì)胞存活率的影響同濃度的姜黃素作用于 AC16 細(xì)胞：0、5、10、20、50、100(um細(xì)胞存活率，數(shù)值以百分比表示( x±s)。度姜黃素和乙醇作用下細(xì)胞存活率檢測細(xì)胞在 400mmol/l 的乙醇作用下存活率下降明顯，故選取此素在上述濃度梯度的作用下生存率無明顯影響，故用不同后，再用 400mmol/l 的乙醇刺激細(xì)胞，當(dāng)姜黃素濃度在 50u 83.89±0.02%（n=3，p＜0.05），故選取最適姜黃素濃度為 。

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本文編號：2776870