【摘要】：目的:研究青錢柳總黃酮對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化和胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)脂肪細(xì)胞葡萄糖的消耗、游離脂肪酸(Free fatty acids,FFA)產(chǎn)生的影響,以及對3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用;研究青錢柳總黃酮對胰島素受體底物-1(IRS-1)mRNA、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Glut-4)mRNA及過氧化物酶體激活受體γ(PPARγ)mRNA表達(dá)的影響,探究其可能的作用機(jī)制。方法:1.體外常規(guī)培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,并設(shè)空白組(完全培養(yǎng)基)、溶媒對照組(1‰DMSO)、陽性藥物組(二甲雙胍Metformin,Met,2μg/mL)、青錢柳藥物處理組(1‰DMSO,完全培養(yǎng)基)各組藥物均處理相應(yīng)時(shí)間后,采用MTT法檢測不同處理藥物組對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響。培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)其分化,誘導(dǎo)分化六天后,并設(shè)空白組、溶媒對照組、陽性藥物組、青錢柳藥物處理組,分組給藥處理48 h,采用油紅O染色法觀察藥物對細(xì)胞分化的影響。2.取誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞用地塞米松(Dexamthason,Dex)作用96 h建立IR模型,設(shè)空白組和模型組(Dex,1μg/mL),檢測造模是否成功。在模型基礎(chǔ)上,設(shè)空白組、溶媒對照組、陽性藥物組、青錢柳藥物處理組,分組給藥48 h后收集細(xì)胞上清液,用葡萄糖氧化酶-過氧化氫酶法(GOD-POD)檢測IR脂肪細(xì)胞上清液葡萄糖消耗量,用比色法檢測上清液中游離脂肪酸的變化。3.取造模成功的細(xì)胞,設(shè)模型組、陽性藥物組、青錢柳藥物處理組,各組藥物處理后,提取細(xì)胞中的總mRNA,用qRT-PCR檢測胰島素抵抗脂肪細(xì)胞中Glut4 mRNA、IRS-1 mRNA及PPARγm RNA的表達(dá)量。結(jié)果:1.青錢柳總黃酮對3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖分化的影響與溶媒組比較,二甲雙胍(Met)和青錢柳總黃酮能顯著促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖與分化(P0.01),并且青錢柳總黃酮有劑量依賴性,在64μg/mL劑量下增殖分化效果最佳。2.青錢柳總黃酮對IR脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗和FFA產(chǎn)生的影響與空白組比較,模型組葡萄糖消耗明顯降低,統(tǒng)計(jì)分析有顯示差異(P0.05),提示造模成功。與空白組比較,IR溶媒組葡萄糖消耗顯著下降(P0.05);其他各組與IR溶媒組比較,Met和青錢柳總黃酮能顯著促進(jìn)IR脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗(P0.01)。與空白組比較,IR溶媒組對FFA的產(chǎn)生抑制率顯著下降(P0.01);其他各組與IR溶媒組比較,Met和青錢柳總黃酮顯著抑制了IR脂肪細(xì)胞FFA的產(chǎn)生(P0.01)。3.青錢柳總黃酮對IR脂肪細(xì)胞PPARγmRNA、Glut4 mRNA、IRS-1 mRNA、表達(dá)量的影響與IR模型組比較,Met和青錢柳總黃酮顯著上調(diào)了IR脂肪細(xì)胞PPARγmRNA的表達(dá)(P0.01);Met顯著上調(diào)了IR脂肪細(xì)胞Glut4 mRNA、IRS-1 mRNA的表達(dá)(P0.01),青錢柳總黃酮對其表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.青錢柳總黃酮能顯著促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖分化;能夠顯著促進(jìn)3T3-L1胰島素抵抗脂肪細(xì)胞葡萄糖的消耗并抑制其FFA產(chǎn)生,可通過改善糖脂代謝作用來改善IR的作用。2.青錢柳總黃酮改善胰島素抵抗作用機(jī)制可能是通過上調(diào)PPARγmRNA的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

采用 SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多yANOVE），兩組比較采用 t 檢驗(yàn)。肪細(xì)胞培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定肪細(xì)胞在胎牛血清的 DMEM 高糖培養(yǎng)基中生長狀傳代一次，細(xì)胞活性狀態(tài)好，顯微鏡下可見細(xì)胞胞在用誘導(dǎo)液分化成脂肪細(xì)胞的過程中，細(xì)胞形漿內(nèi)可見小脂肪滴，隨著誘導(dǎo)分化進(jìn)行胞漿內(nèi)的導(dǎo)分化至第 10 天左右細(xì)胞分化成熟。脂肪組織中我們選擇用油紅 O 染料給分化成熟的脂肪細(xì)下可見胞漿內(nèi)有紅色脂滴。見圖 1。

組別 濃度（ μg/mL）增殖率%24 h 48 h 72 h溶媒對照組 1 ‰DMSO 0.40±0.02 0.80±0.02 2.00±0.15總黃酮組（ μg/mL）1 1.35±0.07 1.56±0.08 4.66±0.202 1.68±0.06 2.15±0.08 5.18±0.094 2.30±0.29 5.35±0.25 7.80±0.098 7.45±0.18△5.90±0.26 11.85±0.13#16 10.06±0.25△16.97±1.08▲16.67±0.22##32 13.05±0.11△△35.10±1.55▲▲30.34±0.54##64 7.04±0.25△39.96±1.93▲▲31.04±0.70##128 3.56±0.39 23.47±0.34▲▲18.40±0.21##陽性藥物組 2 22.00±0.36△△24.21±0.05▲▲18.76±0.08##注：與溶媒對照組比較，△p<0.05，△△p<0.01；▲p<0.05，▲▲p<0.01；#p<0.05，##p<0.01

錢柳總黃酮對 3T3-L1 前脂肪細(xì)胞分化的影響（水平的提高及生活方式的改變，人口老齡發(fā)病率呈上升的趨勢[51]。2010 年中國糖尿患病率高達(dá) 11.60 %，患病人數(shù)居全球首位胖者合并糖尿病的發(fā)病率高達(dá) 18.50 %[52]。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2775434