【摘要】：黃酮類化合物在發(fā)揮抗氧化作用的過程中涉及到多種機(jī)制,其中自由基加合(Radical Adduct Formation,RAF)機(jī)制為其重要內(nèi)容之一。目的:本文旨在通過選用結(jié)構(gòu)特征明顯的一系列黃酮類化合物,在分析相應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)物的信息以及相應(yīng)產(chǎn)物的質(zhì)譜解析的過程中,系統(tǒng)性的探討黃酮類化合物發(fā)生RAF機(jī)制的規(guī)律,并進(jìn)一步豐富黃酮分子抗氧化的化學(xué)機(jī)制的內(nèi)容。方法:本研究通過選取結(jié)構(gòu)特征具有代表性的兩種不同自由基模型(DPPH自由基和PTIO自由基),與具有不同母核的相關(guān)化合物反應(yīng),通過超高效液相色譜和電噴霧四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)技術(shù)檢測反應(yīng)產(chǎn)物,分析相關(guān)化合物在不同自由基模型下發(fā)生RAF的規(guī)律性生。為進(jìn)一步確定黃酮類化合物和異黃酮類化合物發(fā)生RAF機(jī)制的反應(yīng)位點(diǎn)及兩者之間的差異性,選取一些結(jié)構(gòu)特征明顯的黃酮類化合物以及相應(yīng)的異黃酮類化合物與相關(guān)自由基反應(yīng),根據(jù)UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS檢測到的產(chǎn)物及相關(guān)質(zhì)譜圖,分析其反應(yīng)位點(diǎn)及構(gòu)效關(guān)系。結(jié)果:1、各種物質(zhì)更易與DPPH·類的氮自由基發(fā)反應(yīng),而與PTIO·類的以氧為活性中心的自由基較難發(fā)生反應(yīng)。2、黃酮分子中無羥基存在時,其不能發(fā)生RAF反應(yīng)。單羥基黃酮均能發(fā)生加合反應(yīng),但不能發(fā)生二聚反應(yīng);3,4'-二羥基黃酮既能發(fā)生加合反應(yīng)又能發(fā)生二聚反應(yīng),其他的二羥基黃酮如7,4'-二羥基黃酮和白楊素均只能發(fā)生加合反應(yīng)。3、芹菜素與芫花素的RAF能力均大于金合歡素,在槲皮素分子體系中各種物質(zhì)發(fā)生RAF能力為:槲皮素槲皮素-7-O-葡萄糖苷異槲皮苷。4、異黃酮分子中的大豆苷元、7-甲氧基-4'-羥基異黃酮、大豆苷、染料木素和櫻黃素均能發(fā)生加合及二聚反應(yīng),而芒柄花黃素和鷹嘴豆芽素A僅能發(fā)生加合反應(yīng),但是芒柄花苷無RAF相關(guān)產(chǎn)物。7-甲氧基-4'-羥基異黃酮的RAF產(chǎn)物峰面積大于大豆苷的RAF產(chǎn)物峰面積。結(jié)論:1、同種分子與不同的自由基模型發(fā)生RAF反應(yīng)的能力大小不同。2、黃酮分子中羥基的存在是其分子發(fā)生RAF的必要條件之一。對于RAF機(jī)制,黃酮分子發(fā)生加合反應(yīng)與二聚反應(yīng)表現(xiàn)出一定的差異性,二聚反應(yīng)的產(chǎn)生與羥基的數(shù)目及其取代位點(diǎn)有關(guān)。對于多羥基黃酮體系,黃酮分子中的3號位羥基和4'位羥基存在相互促進(jìn)的作用,當(dāng)黃酮分子中4'位羥基和3號羥基或者7號羥基同時存在時,其中4'位羥基發(fā)生RAF反應(yīng)的活性最強(qiáng)。在槲皮素分子體系中,羥基成苷后對其RAF反應(yīng)具有一定的影響,且3號位上的羥基成苷后對其的影響較大。黃酮分子中的加合產(chǎn)物連接方式為C-N連接,二聚產(chǎn)物連接類型有可能是C-O-C的連接方式。3、分子母核的不同會對RAF機(jī)制產(chǎn)生一定的影響,且異黃酮分子比黃酮分子有著更強(qiáng)的RAF活性。在異黃酮分子中,羥基的存在是其發(fā)生RAF反應(yīng)的必要條件之一,異黃酮分子是否發(fā)生加合反應(yīng)與羥基的位點(diǎn)無明顯關(guān)系,但是且其二聚反應(yīng)的位點(diǎn)與4'位羥基的存在有關(guān)。異黃酮分子中的空間位阻效應(yīng)會在一定程度上對RAF造成影響。異黃酮分子中5號位羥基的存在對其發(fā)生RAF反應(yīng)存在著一定的促進(jìn)作用。異黃酮分子的加合產(chǎn)物連接方式可能為C-N連接,其二聚產(chǎn)物的連接方式可能為C-C連接。4、由自由基介導(dǎo)的RAF反應(yīng)為鏈?zhǔn)椒磻?yīng)而不是協(xié)同反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285
【圖文】：

產(chǎn)物的存在。逡逑從實驗結(jié)果可知，兒茶素與ＰＴＩ０？反應(yīng)后可生成相關(guān)的加合及二聚產(chǎn)物。其逡逑在負(fù)離子模式下的總離子流圖及二級質(zhì)譜圖如圖４所示。逡逑Ｍ．Ｗ．邋２３３．１３逡逑ＲＴ？１．３＜邐逡逑？＾３０？邐｜＿。邋ｓ邋３邋５邋Ｓ邋ｇ邋Ｅ邋５逡逑ｃ邋２．０ｅ４邐？邋Ｉ邋？邋＊邋ｓ邐｜邋２邋ａ逡逑爸邋１邋＿0？‘邋ｌ邐＾ｄＬｌｌｌｉＪｕＬｌ邋Ｉｔ邋？．邋ｒ邋ｒｌ逡逑一邋0邋邐邋＼邐１００邐２００邋ｍ／ｚ逡逑￣ｒ0邐？０邐１０邐Ｚｏ邐ｒ0邐＾０邐？！0邐ｒ0邐ｉＴｏ邐Ｔｉｍｅ／ｍｉｎ￣逡逑Ｍ．Ｗ．邋２９０．０８逡逑ＲＴ＝１．０３邐逡逑ｆｅｅ＊邋．邐ｍｉ邋１１，２邋＝＝逡逑Ｓ邋ｎ邋邐邐１００邐２００邐ｍ／ｚ逡逑１．０邐２．０邐３．０邐４．０邐５．０邐６．０邐７．０邐８．０邐１．０邐１０．０邐Ｔｉｍｔ／ｍｉｎ逡逑Ｍ．Ｗ．邋５２２．２０逡逑ＲＴ＝１．１６逡逑＞．６００ｆＥ邐ＳｓＰＴＴＴＴ＂逡逑芑邋４００邐ｉ邐ｒ邋？邋３邐５邐＝逡逑＊邋２００邐巧丨邋．ｌ邋手邐？邐逡逑－Ｊ邋ｌＵ邋？邐１００邋２００邋３００邋４Ｍ邋ｍ邋ｍ／ｚ逡逑１．０邐２．０邐３．０邐４．０邐５．０邐６．０邐７．０邐８．０邐１．０邐１０．０邐Ｔｉｍｔ／ｍｉｎ逡逑Ｍ．Ｗ．邋５７８．１４逡逑ＲＴ＝０．９８邐邐逡逑＾３－５？；ｐｌ邐ｔｑＨ邋ａｉｉｉ５邋ｉｎ邋？ｉｉ邋？邋，ｇ�。义侠希保鬟姡蓿蓿卞澹恚磉姡辏椋裕欤椋椋蔬姡驽�？ｒｉ逡逑一邋Ｊ邐Ｉ、邐ｍ邋２０

ｍ／ｚ邋２５０邋［Ｍ－Ｈ］－。碎片ｍ／ｚ邋２５０通過丟失－Ｃ４Ｈ２２？片段和一分子－Ｈ；？０后形成碎片ｍ／ｚ邋１８２逡逑［Ｍ－Ｈ］？，此碎片繼續(xù)通過丟失－Ｃ４Ｈ３０５２？片段后形成碎片ｍ／ｚ邋１１５邋［Ｍ－Ｈ］－。逡逑依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)Ｉ９４］，推測兒茶素與ＰＴＩＯ的二聚產(chǎn)物的生成機(jī)制如圖７所示。兒茶逡逑素分子在ＰＴＩＯ自由基的攻擊下經(jīng)過ＳＥＴ或ＨＡＴ機(jī)制，３’位上的羥基（０－Ｈ鍵）發(fā)生逡逑均裂，生成兒茶素自由基，該自由基可進(jìn)一步發(fā)生異構(gòu)化從而生成穩(wěn)定的半醌式結(jié)構(gòu)，逡逑單電子處于羰基的對位即６Ｍ立。同理，５號位上的羥基的氧氫鍵也可發(fā)生均裂，從而逡逑生成半醌式自由基，單電子可處于羰基的對位（即８號位）或鄰位（即６號位）。因逡逑此，生成的二聚產(chǎn)物可能為兒茶素６’位與與８號位或６號位連接。即生成Ｃ６’－Ｃ８’二逡逑聚產(chǎn)物或者Ｃ６‘－Ｃ６”二聚產(chǎn)物。逡逑１５逡逑

于單羥基黃酮而言，加合反應(yīng)的產(chǎn)生與酚羥基所處的位置無明顯相關(guān)性，即只要黃酮逡逑分子中有羥基存在，即可發(fā)生加合反應(yīng)；但是若分子中只存在單羥基，則較難發(fā)生二逡逑聚反應(yīng)。通過比較生成的各種單羥基黃酮的加合產(chǎn)物峰面積（圖９）可知，６－羥基黃逡逑酮＞４’－羥基黃酮＞７－羥基黃酮＞３－羥基黃酮＞５－羥基黃酮。此結(jié)果表明羥基的取代位置對逡逑黃酮分子發(fā)生加合反應(yīng)的能力強(qiáng)弱有一定的影響。逡逑２２逡逑

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