發(fā)布時間：2020-07-29 07:36

【摘要】：鎖陽(Cynomorium songaricum Rupr.)作為荒漠地帶生長的稀有寄生植物,常寄生于白刺屬(Nitraria L.)植物根部,具有重要的藥理作用,如抗衰老、促進消化、防癌和抗癌等。本研究首先利用ITS2分子標記完成了對采自阿拉善左旗錫林高勒鎖陽和其寄主白刺物種的鑒定。在此基礎(chǔ)上考察了鎖陽五個不同發(fā)育期、七個產(chǎn)地七種活性成分(多糖、總黃酮、鞣質(zhì)、沒食子酸、原兒茶酸、兒茶素和熊果酸)含量的動態(tài)變化規(guī)律。同時對之前已獲得的鎖陽內(nèi)生真菌數(shù)據(jù)進行了整理和分析,通過Pearson相關(guān)性軟件分析鎖陽五個發(fā)育期優(yōu)勢內(nèi)生真菌和主要活性成分積累規(guī)律之間的相關(guān)性。通過DNA條形碼(DNA barcoding)技術(shù)對鎖陽和其寄主白刺的ITS2序列特征以及兩物種親緣關(guān)系進行了鑒定,兩個物種分別獨立聚為一支,其中同屬異種植物的種間K_2P遺傳距離明顯大于種內(nèi)遺傳距離,鎖陽和白刺的屬間遺傳距離明顯大于兩物種的最大種內(nèi)遺傳距離。通過ITS2序列二級結(jié)構(gòu)預測圖更準確直觀地驗證了兩物種同屬近緣種之間的遺傳關(guān)系,同種鎖陽二級結(jié)構(gòu)的莖環(huán)數(shù)目、大小及位置均一致,而同屬異種白刺的二級結(jié)構(gòu)明顯存在很大的結(jié)構(gòu)差異。采用苯酚硫酸顯色法測定鎖陽多糖含量,發(fā)現(xiàn)在3月萌發(fā)期最高;采用NaNO_2-AI(NO_3)_3比色法測定總黃酮,其含量在萌發(fā)期最高;按照國家藥典方法測定鞣質(zhì)含量,其結(jié)果在11月冬藏期最高;應用甲醇提取、HPLC法同時測定鎖陽沒食子酸、原兒茶酸和兒茶素含量,其結(jié)果顯示,沒食子酸含量在6月旺盛期最高,原兒茶酸和兒茶素含量在萌發(fā)期最高;通過氯仿提取、HPLC法測定鎖陽熊果酸含量,其含量在冬藏期最高。按照相同的提取方法和測定方法研究七個產(chǎn)地(大靖、古浪、金塔、阿拉善左旗、瓜州、南湖和民勤)鎖陽七種化合物的動態(tài)變化規(guī)律。結(jié)果表明,大靖多糖含量最高,其次為南湖和民勤;熊果酸、鞣質(zhì)和沒食子酸含量在阿拉善左旗最高;兒茶素和原兒茶酸含量在南湖最高;總黃酮含量在瓜州地區(qū)最高。而這七種活性成分含量在古浪和金塔和民勤地區(qū)普遍較低,活性成分含量較高地區(qū)主要為阿拉善左旗、南湖和大靖。經(jīng)過分析鎖陽內(nèi)生真菌的分離鑒定數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)從15株健康鎖陽植物400個組織塊中成功分離共鑒定出91株內(nèi)生真菌,其中包括29個代表菌株,其同源性≥97%。通過對內(nèi)生真菌各個種屬數(shù)量的統(tǒng)計分析,發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育期內(nèi)生真菌的物種豐度存在明顯差異。從中選出5個優(yōu)勢菌株進行研究,分別為青霉屬(Penicillium spp.)、鐮孢菌屬(Fusarium spp.)、土赤殼屬(Ilyonectria spp.)、曲霉屬(Aspergillus spp.)和毛束霉屬(Trichurus spp.)。通過Pearson相關(guān)性軟件考察優(yōu)勢菌株與鎖陽五個發(fā)育期七種活性成分積累規(guī)律之間的相關(guān)性發(fā)現(xiàn),鐮孢菌屬與熊果酸含量的積累呈高度相關(guān)性(p0.05),青霉屬與多糖成極顯著負相關(guān)性(p0.01),內(nèi)生真菌與化合物的積累存在某種指引關(guān)系,通過彼此之間的互作,某些內(nèi)生真菌可能會促進或抑制鎖陽活性成分的積累。本研究系統(tǒng)全面的分析鎖陽活性成分的積累以及與內(nèi)生真菌生態(tài)演替之間的相關(guān)性,為道地藥材的采集、市場用藥安全提供了數(shù)據(jù)支持,同時為更深一步研究植物與內(nèi)生真菌互作機制提供了可靠的科學依據(jù)。
【學位授予單位】：山西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R284
【圖文】：

圖 2.1 鎖陽 PCR 電泳結(jié)果圖譜圖 2.2 白刺 PCR 電泳結(jié)果圖譜ITS2 對樣品的鑒定 PCR 產(chǎn)物校對拼接成功的序列提交到 GenBank 數(shù)據(jù)庫，通過與庫中鎖陽種序列比較后，確定兩物種的種屬地位，所有樣品與基因庫對應植物序列

圖 2.1 鎖陽 PCR 電泳結(jié)果圖譜圖 2.2 白刺 PCR 電泳結(jié)果圖譜ITS2 對樣品的鑒定 PCR 產(chǎn)物校對拼接成功的序列提交到 GenBank 數(shù)據(jù)庫，通過與庫中鎖陽種序列比較后，確定兩物種的種屬地位，所有樣品與基因庫對應植物序列

100010000100000Retention time (min)Retention time (min)圖 3.2 鎖陽 4 種化學成分 HPLC 色譜圖。A 和 B 分別是沒食子酸（1）、原兒茶酸（2）茶素（3）在 280nm 處的標準品和樣品色譜圖；C 和 D 是熊果酸（4）在 210nm 處的標和樣品色譜圖。

【參考文獻】

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本文編號：2773638