【摘要】：目的:探討黃芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)對糖尿病大鼠肝臟損傷保護(hù)作用及其可能機(jī)制,為黃芪甲苷治療糖尿病代謝性肝損傷提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:采用一次性腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60 mg/kg制備大鼠DM模型。72 h后,尾靜脈取血測空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),FBG≥11.1 mmol/L確定為糖尿病造模成功大鼠。將成模大鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組(DM組);AS-Ⅳ(20、40和80 mg/kg)給藥組和ROG組(1.28 mg/kg),另設(shè)正常對照組,給予等容量羧甲基纖維素鈉溶液,每組8只,每日給藥一次,連續(xù)治療6周。實(shí)驗(yàn)期間觀察各組大鼠一般狀況(包括毛發(fā)、精神、進(jìn)食飲水情況等);測量各組大鼠體重、FBG的變化;末次給藥結(jié)束后取血,采用放射免疫法檢測空腹血清胰島素(fasting insulin,FISN)水平;紫外可見分光光度計(jì)法檢測大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)活性、甘油三脂(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)水平、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-C)含量;試劑盒檢測肝臟組織中谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、總超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase,T-SOD)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量變化;HE染色觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)變化;免疫組化法(immunohistochemistry,IHC)檢測肝臟組織中胰島素受體底物2(Insulin receptor substrate 2,IRS-2)的表達(dá);蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot,WB)檢測磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p-AKT)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT-4)的表達(dá)水平。結(jié)果:1.與正常組相比,模型組大鼠精神倦怠,活動(dòng)減少,“三多一少”癥狀明顯,出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重減輕;與模型組相比,AS-Ⅳ(20、40、80 mg/kg)和ROG(1.28 mg/kg)組大鼠精神狀態(tài)變好,活動(dòng)增加,多飲多食多尿癥狀顯著減輕,體重增加明顯(P0.05,P0.01),在處死時(shí)的第6 w有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.與模型組相比,AS-Ⅳ(40、80 mg/kg)組大鼠FBG、FISN、HOMA-IR均明顯降低,ISI明顯升高(P0.01)。3.與正常組相比,模型組大鼠肝臟指數(shù)、血清TG、TC、ALT、AST明顯增加,而體重明顯減輕(P0.01);與模型組比較,AS-Ⅳ(40、80 mg/kg)給藥組肝臟指數(shù)、血清TG、TC、ALT、AST含量顯著降低,體重、HDL明顯升高,對LDL-C作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.模型組大鼠肝臟組織中MDA含量均明顯升高、T-SOD與GSH-Px降低(P0.01),AS-Ⅳ(40、80 mg/kg)組可顯著升高血清T-SOD與GSH-Px活力,降低MDA含量(P0.05)。5.HE染色結(jié)果顯示,對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、排列整齊、未見明顯特異性改變,DM大鼠肝臟病理損傷明顯,可見肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂、肝細(xì)胞腫脹、變性、局部有炎癥細(xì)胞浸潤,AS-Ⅳ(40、80 mg/kg)組和ROG(1.28 mg/kg)組能不同程度減輕大鼠肝臟病理改變。6.免疫組化結(jié)果顯示,模型組DM大鼠肝組織中IRS-2蛋白表達(dá)減少(P0.01);AS-Ⅳ(40、80 mg/kg)組和ROG(1.28 mg/kg)組可明顯增加IRS-2蛋白的表達(dá)(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示,AS-Ⅳ(40、80 mg/kg)和ROG(1.28 mg/kg)組可明顯上調(diào)PI3K、p-AKT、GLUT-4蛋白表達(dá)(P0.05,P0.01)。結(jié)論:AS-Ⅳ可降低糖尿病大鼠FBG、FISN、TG、TC水平和ALT、AST活性,同時(shí)還可以調(diào)節(jié)糖脂代謝紊亂,提高肝臟抗氧化能力,減輕肝臟病理損傷程度從而發(fā)揮對糖尿病大鼠肝臟的保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能是通過上調(diào)肝臟PI3K/AKT信號通路中關(guān)鍵蛋白IRS-2、PI3K、p-AKT和GLUT-4蛋白的表達(dá)水平,增加胰島素敏感性,改善胰島素抵抗。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

AS-Ⅳ通過多種信號通路，發(fā)揮抗糖尿病、激、抗哮喘、免疫調(diào)節(jié)和心臟保護(hù)等多種藥理作用過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、肝星型細(xì)胞增生和肝臟的纖維。本課題組前期研究[20]證實(shí)，黃芪通過降低糖尿病力發(fā)揮對實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型動(dòng)物心肌的保護(hù)作用肝損傷保護(hù)作用的研究還較少，其發(fā)病機(jī)制也尚未建立的糖尿病大鼠為研究對象，檢測糖尿病大鼠的x、T-SOD、MDA 和肝組織病理形態(tài)學(xué)變化；探討肝損傷大鼠是否具有保護(hù)作用；再通過免疫組化法檢物 2(IRS-2）表達(dá)，蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測 PI3K（p表達(dá)變化，旨在進(jìn)一步探討 AS-Ⅳ對糖尿病肝損傷大

圖 2AS-Ⅳ對糖尿病大鼠體重的影響（ ±S，n=8）Fig. 2 Effect ofAS-Ⅳ on weight in DM rats ( ±S，n=8)Compared with Control group：**P<0.01；Compared with DM group：#P<0.05，##P<0.014.3AS-Ⅳ對 DM 大鼠肝功能的影響與正常組比較，模型組 DM 大鼠血清 ALT、AST 顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說明糖尿病大鼠肝臟組織中存在肝功能損害；與模型組比較，AS-Ⅳ（20、40、80 mg/kg）和 ROG（1.28 mg/kg）組可顯著降低 DM 大鼠血清ALT、 AST 活性（P<0.05，P<0.01，圖 3）。提示 AS-Ⅳ和 ROG 可改善肝功能，減輕肝損傷。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-Ⅳ對 DM 大鼠的肝臟臟器指數(shù)的影響正常組比較，模型組大鼠體重減輕，肝臟臟器指數(shù)明顯增加，差異（P<0.01）；與模型組比較，AS-Ⅳ（20、40、80 mg/kg）和 ROG（1.2臟器指數(shù)有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，圖 4）。提示 有降低肝臟臟器指數(shù)的作用。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2773652