【摘要】：目的觀察三七總皂苷對高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變(Oxygen-induced retinopathy,OIR)新生小鼠視網(wǎng)膜新生血管及視網(wǎng)膜組織中長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNAs,lnc RNAs)的影響,探討其可能的作用機制,為三七總皂苷治療早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(Retinopathy of prematurity,ROP)提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。方法采用經(jīng)典的Smith造模法建立OIR新生小鼠模型。80只C57BL/6J新生小鼠,隨機對照平均分為四組:A組(正常對照組)、B組(OIR組)、C組(三七總皂苷組)、D組(PBS組)。正常對照組在常氧環(huán)境中飼養(yǎng)直至出生后(Postnatal,P)第17天。P7至P11,B組、C組、D組都在75%的高氧濃度中飼養(yǎng)。P12,C組小鼠眼球玻璃體腔注射1μL三七總皂苷,D組小鼠眼球玻璃體腔注射1μL的PBS無菌溶液,此后一直在正�？諝庵酗曫B(yǎng)到P17。P17處死全部小鼠,取視網(wǎng)膜組織。心臟熒光灌注異硫氰酸熒光素葡聚糖(Fuorescein isothiocyanate,FITC-dextran)后視網(wǎng)膜鋪片,觀察各組視網(wǎng)膜血管的形態(tài)變化;HE染色計量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜新生血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù);免疫組化檢測VEGF的表達(dá)情況;反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)檢測Lnc RNA XLOC_150636、XLOC_150632、XLOC_122045、XLOC_122042、XLOC_100454、XLOC_170009的m RNA表達(dá)變化;Western blot檢測VEGF,FGF2蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果視網(wǎng)膜鋪片顯示,OIR組與正常對照組相比,可見視網(wǎng)膜形態(tài)異常,大量視網(wǎng)膜新生血管叢和無灌注區(qū),視網(wǎng)膜血管明顯增生彎曲。三七總皂苷治療后視網(wǎng)膜血管彎曲增生明顯減輕,無灌注區(qū)減少。PBS治療后仍可見大量彎曲增生的血管叢。HE染色觀察發(fā)現(xiàn),OIR組和PBS組出現(xiàn)大量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜內(nèi)皮細(xì)胞核,正常對照組和三七總皂苷組僅見少量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜內(nèi)皮細(xì)胞核。免疫組化結(jié)果顯示,正常對照組有少量VEGF的表達(dá),OIR組和PBS組中VEGF的表達(dá)顯著升高,三七總皂苷組的結(jié)果與正常對照組類似。RT-PCR檢測XLOC_150636、XLOC_150632在OIR組中表達(dá)明顯上調(diào),在三七總皂苷組中顯著下調(diào),PBS組中無明顯變化。XLOC_122045、XLOC_122042、XLOC_100454、XLOC_170009在OIR組中表達(dá)明顯下調(diào),在三七總皂苷組中顯著上調(diào),PBS組中與OIR組比較無明顯改變。Western blot檢測,正常對照組中有少量VEGF和FGF2蛋白表達(dá),OIR組VEGF和FGF2的蛋白表達(dá)明顯增加,三七總皂苷治療后,VEGF和FGF2的蛋白表達(dá)明顯減少,PBS治療后VEGF和FGF2的蛋白表達(dá)水平仍明顯增加。結(jié)論三七總皂苷可調(diào)節(jié)高氧誘導(dǎo)的新生小鼠視網(wǎng)膜病變Lnc RNAs的表達(dá),抑制視網(wǎng)膜新生血管的增生。
【學(xué)位授予單位】：湖北民族學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

注：A：正常對照組；B：OIR 組；C：三七總皂苷組；D：PBS 組圖 2-1 每組視網(wǎng)膜組織鋪片（40×）Figure 2-1 Retinas tissue flatmount of each group（40×）2.3.2 三七總皂苷對視網(wǎng)膜突破內(nèi)界膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)的影響為了進一步觀察三七總皂苷對 OIR 新生小鼠視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞核的影響，取眼球切片 HE 染色。結(jié)果如圖（見圖 2-2），圖中箭頭指向為突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜內(nèi)皮細(xì)胞核�？梢姡φ战M視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)布局整齊，未見突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核，OIR 組視網(wǎng)膜組織邊緣結(jié)構(gòu)不齊，出現(xiàn)大量內(nèi)皮細(xì)胞核突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜進入玻璃體。與 OIR 組相比，三七總皂苷組的視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)紊亂情況明顯好轉(zhuǎn)，只見少量突破的內(nèi)皮細(xì)胞核，而 PBS 組的視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)未見明顯改善，仍可見大量的內(nèi)皮細(xì)胞核突出。雙盲法計算結(jié)果顯示（見圖 2-3）：OIR 組內(nèi)皮細(xì)胞核的數(shù)量顯著高于正常對

注：A：正常對照組；B：OIR 組；C：三七總皂苷組；D：PBS 組圖 2-2 每組視網(wǎng)膜組織切片 HE 染色（200×）Figure 2-2 Retinal tissue sections HE staining of each group (200×)注：A：正常對照組；B：OIR 組；C：三七總皂苷組；D：PBS 組。*P<0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義。圖 2-3 每組視網(wǎng)膜突破內(nèi)界膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)Figure 2-3 The Number of vascular endothelial cells in inner limiting membrane of retinas

法檢測視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物 VEGF 的表達(dá)情況（見圖2-4），圖中箭頭指示為陽性表達(dá)。觀察發(fā)現(xiàn)，高氧暴露下的小鼠與在正常室內(nèi)空氣飼養(yǎng)的小鼠相比，VEGF 在視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)顯著上調(diào),主要分布在內(nèi)核層、內(nèi)部網(wǎng)織層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層，而這些部位同時伴隨著新生血管的生成。與 OIR 組相比，三七總皂苷組 VEGF 的表達(dá)明顯較少，相應(yīng)的視網(wǎng)膜新生血管也減少，而 PBS 組無明顯變化。表明 VEGF 表達(dá)水平降低與三七總皂苷的治療相關(guān)。注：A：正常對照組；B：OIR 組；C：三七總皂苷組；D：PBS 組圖 2-4 每組視網(wǎng)膜組織 VEGF 免疫組化（200×）Figure 2-4 VEGF immunohistochemistry in each group of retinal tissues(200×)2.3.4 三七總皂苷對視網(wǎng)膜組織 LncRNAs 表達(dá)的影響RT-PCR 檢測四組新生小鼠視網(wǎng)膜組織中 LncRNA XLOC_150636、XLOC_150632、XLOC_122045、XLOC_122042、XLOC_100454、XLOC_170009的 mRNA 表達(dá)水平變化（見圖 2-5）。分析顯示，OIR 組與正常對照組相比，

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本文編號：2772387