【摘要】：目的探討青蒿素對過氧化氫誘導的視網(wǎng)膜色素上皮層細胞(ARPE-19)氧化應(yīng)激損傷的抑制作用。方法將ARPE-19細胞接種于96孔板,每孔7×10~3個細胞,細胞貼壁后分別加入不同濃度青蒿素,每組濃度做5個平行復(fù)孔,篩選對細胞增殖有效的最佳藥物濃度。將APRE-19細胞分成四組,對照組:不做特殊處理;過氧化氫組:應(yīng)用終濃度為100μmol/L的過氧化氫處理細胞24 h;青蒿素組:應(yīng)用青蒿素30μmol/L,處理細胞24 h;青蒿素預(yù)保護組:應(yīng)用30μmol/L青蒿素處理細胞24 h后加入終濃度為100μmol/L的過氧化氫處理24 h。利用MTT法檢測青蒿素對過氧化氫誘導ARPE-19細胞損傷后的細胞增殖率;檢測各組細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)含量和活性氧(ROS)陽性細胞數(shù);通過Hoechst33342染色法及JC-1檢測細胞線粒體膜電位觀測各組細胞凋亡情況;Western Blot法檢測各組細胞內(nèi)凋亡標志蛋白Caspase-3、PARP及Bcl-2相對表達量;檢測抗氧化應(yīng)激通路Nrf2/HO-1/Keap1中Nrf2、HO-1、Keap1蛋白相對表達量。結(jié)果1、MTT法檢測發(fā)現(xiàn)青蒿素濃度在30μmol/L對ARPE-19細胞增殖作用最強(均為P0.01)。青蒿素預(yù)保護組與過氧化氫組相比,細胞增殖率升高,凋亡細胞數(shù)顯著減少,差異均有統(tǒng)計學意義(均為P0.05)。2、青蒿素組ARPE-19細胞SOD含量顯著增加(P0.05);與過氧化氫組相比,青蒿素預(yù)保護組細胞內(nèi)SOD含量明顯增高(P0.05),說明青蒿素能增加細胞內(nèi)抗氧化物質(zhì),減少細胞凋亡。與對照組相比青蒿素組ROS陽性細胞減少(P0.05);與過氧化氫組相比,青蒿素預(yù)保護組ROS陽性細胞亦明顯減少(P0.05),說明青蒿素可減少過氧化氫誘導細胞內(nèi)活性氧物質(zhì)積聚。3、Hoechst33342染色中,青蒿素預(yù)保護組與過氧化氫組相比ARPE-19細胞凋亡數(shù)量減少;JC-1法檢測線粒體膜電位,熒光染色顯示青蒿素預(yù)保護組與過氧化氫組相比綠色熒光減少,紅色熒光增多,說明青蒿素減少細胞線粒體膜電位的缺失,使凋亡細胞數(shù)減少。Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),青蒿素能促進ARPE-19細胞內(nèi)AKT的磷酸化表達,青蒿素預(yù)保護組與過氧化氫組相比細胞內(nèi)活化的Caspase-3、PARP表達量降低,Bcl-2表達增高。差異有統(tǒng)計學意義(均為P0.05)4、Western Blot檢測抗氧化應(yīng)激通路Nrf2/HO-1/Keap1,青蒿素預(yù)保護組與過氧化氫組相比ARPE-19細胞內(nèi)Nrf2、HO-1相對表達升高,Keap1相對表達降低。差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論1、青蒿素能促進ARPE-19細胞增殖,增加ARPE-19細胞內(nèi)抗氧化物酶SOD的含量,減少氧化應(yīng)激導致的細胞內(nèi)活性氧物質(zhì)聚集,從而減少過氧化氫誘導ARPE-19細胞凋亡。2、青蒿素可以降低Caspase-3、PARP的表達,減少過氧化氫誘導ARPE-19細胞凋亡;促進抗氧化應(yīng)激Nrf2/HO-1/Keap1通路中抗氧化應(yīng)激分子Nrf2及其下游靶分子HO-1表達,抑制過氧化氫誘導ARPE-19細胞氧化應(yīng)激損傷。
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

或 GAPDH 作為內(nèi)參照。實驗重復(fù) 3 次后進行統(tǒng)計學分析。計學處理PSS 19.0 統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料用示，兩兩比較采用 t 檢驗，使用單因素方差分析進行多組間比較，認差異有統(tǒng)計學意義。結(jié) 果蒿素對 ARPE-19 細胞增殖的影響 法檢測不同濃度青蒿素對 ARPE-19 細胞增殖率的影響，結(jié)果顯50 μmol/L 濃度之間對細胞均具有增殖作用，青蒿素濃度為 30 增殖作用最強 (均為 P<0.01)，見圖 1。MTT 實驗中青蒿素預(yù)保組相比細胞增值率明顯增加(P<0.05，F(xiàn)=24.41)，見圖 2。

圖 2 MTT 法檢測各組細胞增殖率( x±s )：與對照組相比，*P<0.05；與過氧化氫組相比，#P<0.05,F=24.41 青蒿素對 ARPE-19 細胞內(nèi) SOD 含量的影響結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，青蒿素組 ARPE-19 細胞中 SOD 含05)；與過氧化氫組相比，青蒿素預(yù)保護組細胞內(nèi) SOD 含量明05)，見圖 3。說明青蒿素可以增加細胞內(nèi)抗氧化物酶的含量，從-19 細胞抗氧化應(yīng)激能力。

圖 3 各組細胞內(nèi) SOD 含量( x±s )：與對照組相比，*P<0.05, 與過氧化氫組相比,#P<0.05，F(xiàn)=46.23 青蒿素對 ARPE-19 細胞內(nèi) ROS 的影響C-FHDA 熒光探針結(jié)合細胞內(nèi)活性氧物質(zhì)使細胞產(chǎn)生高強度綠色熒和數(shù)量反應(yīng)各組 ROS 陽性細胞數(shù)目多少。實驗發(fā)現(xiàn)，與對照組相比S 陽性細胞減少(P<0.05)；與過氧化氫組相比，青蒿素預(yù)保護組 RO明顯減少(P<0.05)，見圖 4、5。說明青蒿素保護 ARPE-19 細胞，誘導細胞氧化應(yīng)激損傷產(chǎn)生的活性氧自由基的積聚。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 曹紅衛(wèi);郭毅斌;魏利召;王寧;曲海;鄭江;;青蒿素對膿毒癥大鼠肝臟脂質(zhì)過氧化損傷的影響[J];中國臨床藥理學與治療學;2006年08期

2 曹紅衛(wèi),郭毅斌,王寧,魏利召,王俊,周紅,鄭江;青蒿素對膿毒癥大鼠的保護作用[J];第三軍醫(yī)大學學報;2005年17期

本文編號：2771165