【摘要】：三氧化二砷(As_2O_3)是傳統(tǒng)中藥砒霜中的主要成分,現(xiàn)代藥理學和分子生物學證明了As_2O_3治療腫瘤的有效性并具有廣譜抗癌作用,尤其在治療急性早幼粒細胞性白血病更是取得滿意的療效。而As_2O_3屬劇毒藥,在臨床上治療安全窗口較小,在應用中會產(chǎn)生較多不良反應,毒副作用大大限制了其臨床應用。文獻及前期研究顯示:南天竹提取物對抗腫瘤藥三氧化二砷具有減毒持效作用,南天竹中生物堿類成分為主要減毒活性成分,單一生物堿減毒作用均不及總生物堿部位,提示南天竹生物堿類成分對三氧化砷減毒具有明顯的多靶點、多途經(jīng)的中醫(yī)藥特點。然而,南天竹籽總生物堿部位分離純化工藝有待優(yōu)選、南天竹籽總生物堿類部位化學成分有待進一步闡明。據(jù)此,開展了南天竹籽總生物堿對As_2O_3減毒作用相關研究。本課題分為四個部分,具體研究內容如下:1.南天竹籽總生物堿提取純化工藝研究本實驗以小檗堿作為對照品,采用酸性染料比色,得到南天竹籽中總生物堿的最佳提取工藝條件為8倍量75%的乙醇回流提取3次,每次1 h。HPD-722型樹脂具有最佳的吸附及洗脫參數(shù),其最佳純化條件為:上樣液總生物堿質量濃度為4 mg·mL~(-1),上樣量35 mL,上樣流速2 mL·min~(-1),先以6 BV體積的水洗去雜質,再以10 BV體積的80%乙醇以1 mL·min~(-1)的流速洗脫,得總生物堿含量達到70%以上。2.總生物堿部位對三氧化二砷減毒作用研究通過生化指標及組織形態(tài)學檢測兩個方面,研究提取純化所得的南天竹籽總生物堿部位對三氧化二砷減毒作用。生化指標檢測顯示,單獨給藥組的CK、AST、LDH、尿素氮、MDA、ALT明顯高于聯(lián)合給藥組和空白組,單獨給藥組的Na~+-K~+-ATP酶、SOD、CAT、肌酐消除率明顯低于聯(lián)合給藥組和空白組。組織形態(tài)學檢測顯示,小鼠三氧化二砷單獨用藥組部分出現(xiàn)心臟細胞水腫情況,聯(lián)合用藥組心臟均顯示正常;大鼠三氧化二砷單獨用藥組心組織及細胞未見損傷,部分出現(xiàn)腎小球變小,肝組織中廣泛出現(xiàn)肝細胞水腫、點狀壞死,典型肝血竇擴張,嗜酸性變性,脂肪變性等損傷,而聯(lián)合用藥組心和腎組織及細胞未見損傷,僅少部分肝細胞出現(xiàn)水腫,有少量炎性細胞浸潤。結合生化指標及組織形態(tài)學檢測,表明提取純化的總生物堿部位對三氧化二砷具有較明顯減毒作用。3.南天竹籽總生物堿部位的化學分離與鑒定采用柱色譜技術對南天竹籽總生物堿部分進行分離純化,共分離鑒定得到15個化合物,其中11個生物堿類成分,4個其他類成分,包括:N-Methyl-3-phenyl-N-(2S,3R,4-trihydroxy-butyl)-acrylamide(1)、N-Methyl-3-phenyl-N-(2R,3R,4-trihydroxy-butyl)-acrylamide(2)、O-甲基南天竹堿(3)、N-去甲基南天竹堿(4)、Hydroxynantenine(5)、南天寧堿(6 nantenine)、巴馬亭(7 palmatine)、O-甲基球紫堇堿(8 O-methylbulbocapnine)、海罌粟堿(9 glaucine)、去二氫海罌粟堿(10 didehydroglaucine)、5-羥基-2-吡啶羧酸甲酯(11)、Amentoflavone(12)、異落葉松脂素(13)、原兒茶醛(14)、3,4-二羥基苯乙酮(15)。其中化合物1、2為新化合物,化合物5,11,12,13,14,15為首次從該植物分離得到。4.南天竹籽總生物堿定性與南天寧堿定量分析采用Peakview(Version1.2,AB SCIEX)軟件對南天竹籽質譜數(shù)據(jù)進行處理,依據(jù)相對分子量測定值與精確相對分子質量的理論值偏差小于10.0×10~(-6)的原則,基于高分辨質譜的精確分子量信息,共鑒別25個生物堿,其中已知生物堿18個,未知化合物7個。采用薄層色譜鑒別,在同一薄層板上南天竹果實總生物堿溶液與新化合物N-Methyl-3-phenyl-N-(2,3,4-trihydroxy-butyl)-acrylamide在相同位置上,顯示相同的斑點。采用高效液相色譜儀,考察南天竹籽中標志性生物堿成分——南天寧堿在總生物堿中的含量,得其含量為0.227 mg/mg。
【學位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285
【圖文】：

圖 1 兩種顯色劑全波長掃描o-color developer full-wavelength 2 mL 對照品溶液，在測試波長處色劑吸光度的大小，測定結果見表色劑測得吸光度值相對較大，因此表 1 酸性染料選擇試驗數(shù)據(jù)Table 1 Acid dye selection test da溴甲酚綠 0.984 取 2 mL 對照品溶液，分別置于溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，溶解，搖勻靜置30 min，加入氯仿5

得出標準曲線為 y=0.0161x-0.0279，r=0.9992，在 10.24小檗堿的線性關系良好。試驗 精密吸取樣品溶液 2 mL，顯色后，測定吸光度。得出其精密度 RSD=0.144%，證明儀器精密度良好。結表 6 精密度試驗數(shù)據(jù)Table 6 Precision test data2 3 4 5 6 平均68 0.567 0.568 0.567 0.569 0.567 0.567試驗 分別精密吸取樣品溶液 2 mL，制備 6 份供試品溶。由數(shù)據(jù) RSD=2.66% 可得，其儀器重復性良好。結果表 7 重復性試驗數(shù)據(jù)Table 7 Repeatability test data1 2 3 4 5 6 平均

得出濃度 4 mg/mL 為最佳上樣液濃度。見表 20。表 20 上樣液濃度結果Table 20 Sample concentration results濃度（mg/mL） 8 4 2吸附率（%） 97.64 97.40 97.40洗脫率（%） 46.00 63.13 53.11純度（%） 44.9 61.5 51.7最大上樣量 準確稱取處理好的樹脂 30 g(濕重)，取濃度為 4 mg/mL 的上樣液，以 0.5 mL/min 的流速加入樹脂中，用容器收集流出液，每 10 mL 一管，測定收集液中的總生物堿的含量，繪制關于吸附的動態(tài)曲線。結果顯示，當上樣量的體積在 20 mL 左右的時候，生物堿類物質開始泄露增加，為減少損失，提高回收率，本實驗選用最大上樣量為 35 mL。結果見圖 3。

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本文編號：2766583