【摘要】：毒蛇咬傷(俗稱蛇傷)被WHO規(guī)定為一種被忽視的熱帶疾病,其多發(fā)于熱帶或亞熱帶的貧困山村。蛇傷中毒常常給蛇傷患者帶來身體損害、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理恐慌后遺癥等。蛇傷急救常用的治療方法是采用從被蛇毒免疫的動(dòng)物(如馬)制備的抗蛇毒血清來治療蛇傷病人。但是,在部分地區(qū)(主要是不發(fā)達(dá)或發(fā)展中地區(qū))因多種因素限制仍然采用草藥治療蛇傷。尤其在我國,采用中草藥治療蛇傷獲得了比較滿意的效果,為蛇傷病人解除了疾苦�？墒�,采用中草藥治療蛇傷的科學(xué)實(shí)驗(yàn)證據(jù)還不充分,為此,本研究采用我國蛇傷醫(yī)生常用來治療蛇傷病人的24味中草藥。通過抗蛇毒活性實(shí)驗(yàn)來初步揭示這些中草藥的有效性。使用超聲波提取方式,分別從24味中草藥中獲得各自的水提物,再用瓊脂糖平板法分別檢測(cè)這24種中草藥水提物對(duì)五步蛇毒中主要功能成分包括PLA_2、透明質(zhì)酸酶和蛋白水解酶等的活性的抑制作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,這24味中草藥都有抗蛇毒活性作用,有的強(qiáng),有的弱,唯有石柑子抗五步蛇毒活性的作用最強(qiáng)。為了進(jìn)一步確認(rèn)石柑子水提物的抗蛇毒活性作用,體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,石柑子水提物對(duì)五步蛇毒中的磷脂酶A_2(PLA_2)活性、透明質(zhì)酸酶活性、蛋白水解酶活性、凝血活性均能完全抑制,且呈量效關(guān)系;活體動(dòng)物(小白鼠)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,石柑子水提物對(duì)五步蛇毒的出血活性和致死活性均具有顯著抑制作用。為了鑒定出石柑子水提物中抗蛇毒活性的有效成分,我們采用大孔樹脂層析,分別用25%、50%和75%乙醇洗脫,收集洗脫液,檢測(cè)其抗蛇毒PLA_2和蛋白水解酶的活性作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,采用75%乙醇洗脫出的洗脫液的抗蛇毒活性效果最強(qiáng);再將該洗脫液進(jìn)行HPLC分離純化,獲得三個(gè)分離峰即P_1、P_2和P_3,分別開展這三個(gè)峰抗蛇毒PLA_2和蛋白水解酶的活性作用檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,P_2峰具有最好的抗蛇毒活性作用。進(jìn)一步鑒定P_2峰中的有效物質(zhì),我們使用氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)分析,初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,P_2峰的主要有效成分為鄰苯三酚,其呈現(xiàn)抗五步蛇毒PLA_2和蛋白水解酶的活性作用非常明顯�？傊�,本研究初步揭示了24味中草藥具有一定的抗五步蛇毒活性,其中,石柑子抗五步蛇毒活性最強(qiáng),并從石柑子中分離鑒定出有效成分之一為鄰苯三酚,這些初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果在某種程度上提供了我國蛇傷醫(yī)生常用的24味中草藥治療蛇傷的科學(xué)實(shí)驗(yàn)證據(jù),但是,還有很多有效成分需要進(jìn)一步的鑒定研究,以及這些有效成分如何在分子水平與蛇毒中主要毒素成分之間發(fā)生相互作用也需要進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：重慶師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284;R285
【圖文】：

圖 2.1 卵磷脂平板中五步蛇毒劑量與透明圈直徑之間的量效關(guān)系圖② 不同的中草藥水提物對(duì)五步蛇毒中 PLA2活性的抑制效果實(shí)驗(yàn)取平均值做表，如表 2.1，以單獨(dú) 5 μg/15 μL 五步蛇毒（蒸餾水溶解）所形 12mm 透明圈，為 5 μg 五步蛇毒 PLA2活性的參照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算平均值，作表 2.1。在中草藥水提物與五步蛇毒質(zhì)量比為 200∶1 的情況下，大部分中透明圈直徑在 10-12 mm，對(duì)五步蛇毒中 PLA2的活性抑制效果微弱，或幾乎抑制效果。小葉三點(diǎn)金、紅背絲綢、東風(fēng)菜和巖蒿透明圈在 7-10 mm，對(duì)五步中 PLA2的活性抑制效果在 30%左右，僅有蛇莓和石柑子在與五步蛇毒質(zhì)量比00∶1 的情況下，沒有形成透明圈，完全抑制了步蛇毒中 PLA2的活性。

圖 2.2 酪蛋白平板中五步蛇毒劑量與透明圈直徑之間的量效關(guān)系圖② 不同的中草藥水提物對(duì)五步蛇毒中蛋白水解酶活性的抑制效果實(shí)驗(yàn)取平均值做表，如表 2.2，以單獨(dú) 40 μg/15 μL 五步蛇毒（蒸餾水溶解）所的 15mm 透明圈，為 40 μg 五步蛇毒 PLA2活性的參照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算平均值制作表 2.1。在中草藥水提物與五步蛇毒質(zhì)量比為 5∶1 的情況下，大部分中透明圈直徑在 12 mm 以上，對(duì)五步蛇毒中蛋白水解酶的活性抑制效果不足 20芷、蛇莓、小葉三點(diǎn)金和萬年青對(duì)蛋白水解酶的抑制效果在 20-50%，魚腥草風(fēng)菜對(duì)五步蛇毒中蛋白水解酶的活性抑制效果在 50%左右，僅有石柑子在與蛇毒質(zhì)量比為 5∶1 的情況下，沒有形成透明圈，完全抑制了步蛇毒中蛋白水的活性。

圖 2.3 透明質(zhì)酸鈉平板中五步蛇毒劑量與透明圈直徑之間的量效關(guān)系圖②不同的中草藥水提物對(duì)五步蛇毒中透明質(zhì)酸酶活性的抑制效果實(shí)驗(yàn)取平均值做表，如表 2.3，以單獨(dú) 40 μg/15 μL 五步蛇毒（蒸餾水溶解）所的 15 mm 透明圈，為 5 μg 五步蛇毒透明質(zhì)酸酶活性的參照，實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算平，并制作表 2.3。在中草藥水提物與五步蛇毒質(zhì)量比為 5∶1 的情況下，少部草藥透明圈直徑在 10-12 mm，對(duì)五步蛇毒中透明質(zhì)酸酶的活性具有一定抑制，大部分中草藥透明圈在 4-10 mm，對(duì)五步蛇毒中 PLA2的活性具有較好的抑果，而柚子葉、魚腥草、蘿呮、東風(fēng)菜、巖蒿和石柑子在與五步蛇毒質(zhì)量比00∶1 的情況下，透明圈直徑在 0-4 mm，對(duì)步蛇毒中透明質(zhì)酸酶的活性抑制效 75%以上，具有相當(dāng)好的抑制效果。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2764721