【摘要】：目的:通過預(yù)防性給藥,探討冬蟲夏草口服液減小載脂蛋白E基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用及其可能的作用機(jī)制。方法:40只雄性C57BL/6J背景的ApoE~(-/-)小鼠隨機(jī)平均分為模型組(生理鹽水)、阿托伐他汀陽(yáng)性藥組(5mg/kg)、冬蟲夏草口服液低(0.4g/kg)、中(1.2g/kg)、高(3.6g/kg)劑量組。另取8只雄性C57BL/6J小鼠作為空白對(duì)照組(生理鹽水)。高脂飼料喂養(yǎng)8周后,取小鼠血清分別采用生化法和酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定小鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、MDA、SOD、IFN-?、TNF-?、IL-5、IL-12p70的含量;分離小鼠主動(dòng)脈弓處血管,顯微鏡拍照比較管腔內(nèi)斑塊大小;胸腹主動(dòng)脈段作剖面油紅O染色比較斑塊面積;主動(dòng)脈竇部行冰凍切片油紅O染色比較脂質(zhì)沉積;主動(dòng)脈竇部行石蠟切片HE、Masson、天狼猩紅染色比較主動(dòng)脈內(nèi)膜病理形態(tài)改變以及膠原纖維含量的變化;主動(dòng)脈竇部石蠟切片免疫組織化學(xué)染色定量分析巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和半乳糖凝集素-3以及?-血管平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.與空白組相比較,ApoE~(-/-)小鼠采用本實(shí)驗(yàn)方法高脂飼料喂養(yǎng)8周后在主動(dòng)脈處可明顯形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。2.藥物干預(yù)后,陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組小鼠血清中TC、TG、LDL-C、MDA、IFN-?、TNF-?、IL-5、IL-12p70含量均降低,SOD活性和HDL-C水平升高,與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.高脂飼料喂養(yǎng)8周后,小鼠胸腹主動(dòng)脈段油紅O染色結(jié)果顯示,模型組小鼠斑塊明顯多余空白對(duì)照組;與模型組相比,陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組主動(dòng)脈斑塊面積與血管總面積的比值分別減小31.4%(P0.01),18.8%(P0.05),20.0%(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。主動(dòng)脈竇處油紅O染色結(jié)果顯示,模型組小鼠脂質(zhì)沉積明顯多余空白對(duì)照組;與模型組相比,陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組小鼠主動(dòng)脈竇處斑塊面積與血管腔總面積的比值分別下降了33.7%(P0.01),23.4%(P0.05)和33.3%(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。主動(dòng)脈竇部HE染色結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,模型組主動(dòng)脈管腔變窄,內(nèi)膜增厚并向管腔內(nèi)凸起,內(nèi)膜下大量血管平滑肌細(xì)胞增殖,出現(xiàn)脂質(zhì)斑塊和泡沫細(xì)胞聚集;與模型組相比,陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組小鼠主動(dòng)脈竇部增厚的內(nèi)膜與血管腔總面積的比值分別下降了33.8%(P0.01),25.4%(P0.05)和29.5%(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。主動(dòng)脈竇部Masson和天狼猩紅染色結(jié)果顯示,與空白組相比,模型組小鼠主動(dòng)脈竇部中膜膠原纖維的表達(dá)含量顯著增加;與模型組相比,陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組小鼠主動(dòng)脈中膜膠原纖維含量分別下降了27.5%(P0.01)、21.5%(P0.05)、24.9%(P0.05)和28.3%(P0.01)、16.3%(P0.05)、21.3%(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。主動(dòng)脈竇部石蠟切片免疫組化結(jié)果表明,與空白組相比,模型組小鼠主動(dòng)脈竇部巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重、半乳糖凝集素-3以及內(nèi)膜下?-平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)水平升高;與模型組相比,陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組小鼠主動(dòng)脈竇部巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)分別減輕了33.8%(P0.01)、19.9%(P0.05)、27.7%(P0.01),半乳糖凝集素-3的表達(dá)水平下降了30.2%(P0.01)、19.3%(P0.05)、21.9%(P0.05),內(nèi)膜下?-平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)水平降低了37.5%(P0.01)、20.3%(P0.01)、28.3%(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)方法高脂飼料喂養(yǎng)可成功誘導(dǎo)ApoE~(-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型。2.冬蟲夏草口服液可降低ApoE~(-/-)小鼠血清中TC、TG、LDL-C、MDA、IFN-?、TNF-?、IL-5、IL-12p70含量并增加SOD活性和HDL-C的水平。3.冬蟲夏草口服液可減小ApoE~(-/-)小鼠胸腹主動(dòng)脈段和主動(dòng)脈竇處的斑塊大小以及脂質(zhì)沉積,降低主動(dòng)脈內(nèi)膜巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和半乳糖凝集素-3的表達(dá),抑制血管平滑肌細(xì)胞遷移至內(nèi)膜下并減少主動(dòng)脈中膜膠原纖維的含量。4.冬蟲夏草口服液能夠改善ApoE~(-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化,其機(jī)制可能是通過降低血清中脂質(zhì)和炎癥因子的含量,從而減小主動(dòng)脈處脂質(zhì)沉積和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),最終減小斑塊面積改善AS。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)，多組間數(shù)據(jù)均數(shù)的比較采用單因素方差分析，斑塊面積的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 Mann-Whitney 檢驗(yàn)。P＜0.05 被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié) 果1．冬蟲夏草口服液對(duì)主動(dòng)脈斑塊的影響1.1 冬蟲夏草口服液可降低主動(dòng)脈弓處的斑塊大小分離小鼠主動(dòng)脈弓，體視顯微鏡拍照結(jié)果顯示：空白組主動(dòng)脈弓以及頭臂干動(dòng)脈、左鎖骨下動(dòng)脈、左頸總動(dòng)脈平整光滑，管腔內(nèi)無斑塊可見。高脂飼料喂養(yǎng)8 周后，模型組小鼠主動(dòng)脈弓以及頭臂干、左鎖骨下、左頸總動(dòng)脈處可明顯看到白色斑塊。與模型組相比，陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量給藥組小鼠的左鎖骨下動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈處的斑塊減小，高劑量組小鼠左鎖骨下動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈處的斑塊肉眼未見明顯減小（見圖 1）。

.2 冬蟲夏草口服液可降低胸腹主動(dòng)脈段斑塊大小分離小鼠主動(dòng)脈根部至腹主動(dòng)脈分叉處血管，縱向剖開后油紅 O 染色結(jié)示，除空白組外，模型組以及其他給藥組斑塊形成明顯（見圖 2-1）；斑塊面計(jì)學(xué)結(jié)果顯示，與模型組相比，陽(yáng)性藥組和冬蟲夏草口服液低、中劑量組斑積與 血管總 面積 的比值 分別減 少了 31.4%(P<0.01) ，18.8%(P<0.05) 0.0%(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見圖 2-2）。冬蟲夏草口服液高劑量組斑積與血管總面積的比值與模型組相比減少了 9% (P=0.25)，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)。冬蟲夏草口服液低、中、高劑量 3 組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見圖 2-2）。冬蟲夏草口服液總面積的比值與模型組相比減少了 9% (P=0.25)，差異草口服液低、中、高劑量 3 組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義圖 2-1. 胸腹主動(dòng)脈段油紅 O 染色結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2759825