【摘要】：肺癌是全球高死亡率的癌癥之一,其發(fā)病率排在惡性腫瘤發(fā)病率的第二位,赤芍的提取物赤芍總苷(TPG)具抗腫瘤的作用,其對肺癌抑制作用已有少量報(bào)道,但對肺癌細(xì)胞中重要因子——基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)和缺氧誘導(dǎo)因子-1Ｐt(HIF-1α)的影響未明。本文采用H1299肺癌細(xì)胞和C57BL/6小鼠肺癌模型,考察TPG對H1299肺癌細(xì)胞和C57BL/6小鼠植入腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用,通過考察MMP-9及HIF-1α基因和蛋白水平的表達(dá)差異,探討TPG抑制肺癌細(xì)胞的分子作用機(jī)制。采用四唑鹽(MTT)比色法檢測不同濃度TPG對H1299肺癌細(xì)胞株生長的抑制作用;采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCR)測定H1299細(xì)胞中MMP-9及HIF-1αmRNA的豐度,采用Western blot測定MMP-9及HIF-1α蛋白水平。結(jié)果表明TPG與H1299細(xì)胞共培養(yǎng)24h、48h和72h時(shí)可劑量依賴性抑制肺癌細(xì)胞的生長(P0.05);共培養(yǎng)24h可劑量依賴性降低肺癌H1299細(xì)胞中MMP-9與HIF-1α的mRNA水平,減少M(fèi)MP-9和HIF-1α蛋白的表達(dá),與對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。采用皮下注射腫瘤細(xì)胞懸液的方法建立C57BL/6小鼠肺癌模型,將成模小鼠隨機(jī)分為模型對照組、環(huán)磷酰胺組(0.06g/kg)、TPG小劑量組(0.06g/kg)、TPG中劑量組(0.24g/kg)和TPG大劑量組(0.96g/kg),連續(xù)給藥4周。結(jié)果表明模型對照組C57BL/6小鼠瘤體積于造模后3日、1周、2周、3周和4周時(shí)日漸增大;與模型對照組比較,中劑量和大劑量TPG可明顯抑制C57BL/6小鼠腫瘤的生長(P0.05);中劑量TPG于3日、1周、2周、3周和4周時(shí)的抑瘤率分別為15.20%、26.05%、24.10%、21.59%和 24.71%,大劑量 TPG 的抑瘤率分別為 32.80%、31.51%、55.00%、37.28%和39.64%。與模型對照組相比,TPG中劑量組和大劑量組C57BL/6小鼠瘤重顯著降低(P0.05);TPG大劑量組C57BL/6小鼠瘤重較中劑量組顯著降低(P0.05),呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定C57BL/6小鼠血清MMP-9和HIF-1α水平,和模型組相比TPG可呈劑量依賴性的降低血液中MMP-9和HIF-1α水平(P0.05);采用RT-PCR測定小鼠瘤組織中MMP-9和HIF-1α mRNA的表達(dá),采用Western blot測定腫瘤組織中MMP-9和HIF-1α蛋白水平。結(jié)果和模型組相比,0.24g/kg和0.96 g/kg給予TPG 4周后,癌組織中MMP-9和HIF-1α的mRNNA和蛋白的表達(dá)降低(P0.05),有量效關(guān)系。結(jié)果表明TPG可抑制體外培養(yǎng)的肺癌H1299細(xì)胞株的生長,降低細(xì)胞內(nèi)MMP-9和HIF-1α mRNA和蛋白的表達(dá);在體實(shí)驗(yàn)中TPG可顯著抑制H1299肺癌小鼠模型腫瘤組織的生長,提示TPG可以通過下調(diào)MMP-9和HIF-1α的表達(dá)發(fā)揮抗非小細(xì)胞肺癌的作用。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

ＣｙｅｌｉｎＥ－ＣＤＫ２復(fù)合物的活性也促進(jìn)了細(xì)胞由Ｇ１期向Ｓ期轉(zhuǎn)變１７’１９】。越來越多的研究逡逑表明細(xì)胞周期素Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ邋Ｄ１）和抑癌基因ｐ１６在正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞周期調(diào)控屮均逡逑發(fā)揮著重要作用（圖１），包括食管癌、乳腺癌以及頭頸部腫瘤在內(nèi)的多種腫瘤組織逡逑和細(xì)胞中細(xì)胞周期索Ｄ１的農(nóng)達(dá)水ｔ：過量，丨Ｉ．作隨＃邋Ｐ１６的衣達(dá)缺失。抑癌坫因ｐ１６逡逑能通過與細(xì)胞周期素Ｄ１競爭性結(jié)合下游ＣＤＫ４分ｆ＿，抑制細(xì)胞周期素Ｄ１－ＣＤＫ４復(fù)逡逑合物的形成（閣２），從而負(fù)性調(diào)控細(xì)胞周期，細(xì)胞周期素Ｄ１的表達(dá)異�？赡茏鳛榕绣义蠑喾伟┓只纳飿�(biāo)志物，具有早篩早診的臨床意義［２ａ２１］。逡逑０逡逑ＩＩ逡逑Ｇ0逡逑圖１邐細(xì)胞周期不同時(shí)向的周期依賴性激Ｉｔ復(fù)合物［１８］逡逑３逡逑

２在細(xì)胞生命中ＣｙｃｌｉｎＤＩ、Ｐ１６和Ｃｄｋ４的相互關(guān)系轉(zhuǎn)移酶逡逑由致癌因子刺激，引起的大分子包括ＤＮＡ和定，從而改變細(xì)胞正常的生長周期，促使其無發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽－Ｓ■轉(zhuǎn)移酶（ＧＳＴｓ）在肺癌細(xì)胞和ｓ是一類多功能的二聚體蛋白質(zhì)，在癌變誘導(dǎo)前［１９］，提示ＧＳＴｓ高表達(dá)可能是組織對致癌劑刺瘤基因家族蛋白逡逑瘤機(jī)制研究中的一個(gè)重要方向，Ｂ淋巴細(xì)胞凋亡過程中起關(guān)鍵性作用的一類蛋白質(zhì)，通過粒體結(jié)構(gòu)與功能的穩(wěn)定性，發(fā)揮著啟動細(xì)胞凋

第一章緒論逡逑號傳遞作用（圖３）。蛋白是參與受體酪氨酸激酶（ＲＴＫ）信號通路的重要因子，逡逑當(dāng)外源增殖信號，例如表皮生長因子受體（ＥＧＦＲ）與細(xì)胞膜上的相關(guān)受體結(jié)合后，逡逑靶向激活ＲＴＫ發(fā)生自身磷酸化，磷酸化的ＲＴＫ將信號傳遞給細(xì)胞膜上的Ｒａｓ，促進(jìn)逡逑活化蛋白，激活下游ＲＷＲａｆ通路，引發(fā)有絲分裂遠(yuǎn)激活蛋白激酶途徑的級聯(lián)放逡逑大作用于Ｃｙｄｉｎ邋Ｄ１，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖與分化。當(dāng)Ｒａｓ基因發(fā)生突變時(shí)，便可以認(rèn)為該蛋逡逑白常態(tài)下表達(dá)激活形式誘發(fā)細(xì)胞增殖失控，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變［２２］。肺癌細(xì)胞中逡逑ｐ２１顯著高表達(dá)，提示了邋Ｒａｓ蛋白過表達(dá)與肺癌的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。此外癌旁組織逡逑Ｒａｓ蛋白的陽性率高達(dá)４５．２８邋％，說明癌變前期就已經(jīng)存在有Ｒ簽的過量表達(dá)［２２】。因逡逑此Ｒａｓ的突變可以導(dǎo)致細(xì)胞Ｒａｓ過度表達(dá)

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本文編號：2759634