【摘要】：肺癌是全球高死亡率的癌癥之一,其發(fā)病率排在惡性腫瘤發(fā)病率的第二位,赤芍的提取物赤芍總苷(TPG)具抗腫瘤的作用,其對肺癌抑制作用已有少量報道,但對肺癌細胞中重要因子——基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)和缺氧誘導因子-1Ｐt(HIF-1α)的影響未明。本文采用H1299肺癌細胞和C57BL/6小鼠肺癌模型,考察TPG對H1299肺癌細胞和C57BL/6小鼠植入腫瘤細胞增殖的抑制作用,通過考察MMP-9及HIF-1α基因和蛋白水平的表達差異,探討TPG抑制肺癌細胞的分子作用機制。采用四唑鹽(MTT)比色法檢測不同濃度TPG對H1299肺癌細胞株生長的抑制作用;采用逆轉錄-聚合酶聯(lián)反應(RT-PCR)測定H1299細胞中MMP-9及HIF-1αmRNA的豐度,采用Western blot測定MMP-9及HIF-1α蛋白水平。結果表明TPG與H1299細胞共培養(yǎng)24h、48h和72h時可劑量依賴性抑制肺癌細胞的生長(P0.05);共培養(yǎng)24h可劑量依賴性降低肺癌H1299細胞中MMP-9與HIF-1α的mRNA水平,減少MMP-9和HIF-1α蛋白的表達,與對照組相比有統(tǒng)計學差異(P0.05)。采用皮下注射腫瘤細胞懸液的方法建立C57BL/6小鼠肺癌模型,將成模小鼠隨機分為模型對照組、環(huán)磷酰胺組(0.06g/kg)、TPG小劑量組(0.06g/kg)、TPG中劑量組(0.24g/kg)和TPG大劑量組(0.96g/kg),連續(xù)給藥4周。結果表明模型對照組C57BL/6小鼠瘤體積于造模后3日、1周、2周、3周和4周時日漸增大;與模型對照組比較,中劑量和大劑量TPG可明顯抑制C57BL/6小鼠腫瘤的生長(P0.05);中劑量TPG于3日、1周、2周、3周和4周時的抑瘤率分別為15.20%、26.05%、24.10%、21.59%和 24.71%,大劑量 TPG 的抑瘤率分別為 32.80%、31.51%、55.00%、37.28%和39.64%。與模型對照組相比,TPG中劑量組和大劑量組C57BL/6小鼠瘤重顯著降低(P0.05);TPG大劑量組C57BL/6小鼠瘤重較中劑量組顯著降低(P0.05),呈現(xiàn)劑量依賴關系。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定C57BL/6小鼠血清MMP-9和HIF-1α水平,和模型組相比TPG可呈劑量依賴性的降低血液中MMP-9和HIF-1α水平(P0.05);采用RT-PCR測定小鼠瘤組織中MMP-9和HIF-1α mRNA的表達,采用Western blot測定腫瘤組織中MMP-9和HIF-1α蛋白水平。結果和模型組相比,0.24g/kg和0.96 g/kg給予TPG 4周后,癌組織中MMP-9和HIF-1α的mRNNA和蛋白的表達降低(P0.05),有量效關系。結果表明TPG可抑制體外培養(yǎng)的肺癌H1299細胞株的生長,降低細胞內(nèi)MMP-9和HIF-1α mRNA和蛋白的表達;在體實驗中TPG可顯著抑制H1299肺癌小鼠模型腫瘤組織的生長,提示TPG可以通過下調(diào)MMP-9和HIF-1α的表達發(fā)揮抗非小細胞肺癌的作用。
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

ＣｙｅｌｉｎＥ－ＣＤＫ２復合物的活性也促進了細胞由Ｇ１期向Ｓ期轉變１７’１９】。越來越多的研究逡逑表明細胞周期素Ｄ１（Ｃｙｃｌｉｎ邋Ｄ１）和抑癌基因ｐ１６在正常細胞及腫瘤細胞周期調(diào)控屮均逡逑發(fā)揮著重要作用（圖１），包括食管癌、乳腺癌以及頭頸部腫瘤在內(nèi)的多種腫瘤組織逡逑和細胞中細胞周期索Ｄ１的農(nóng)達水ｔ：過量，丨Ｉ．作隨＃邋Ｐ１６的衣達缺失。抑癌坫因ｐ１６逡逑能通過與細胞周期素Ｄ１競爭性結合下游ＣＤＫ４分ｆ＿，抑制細胞周期素Ｄ１－ＣＤＫ４復逡逑合物的形成（閣２），從而負性調(diào)控細胞周期，細胞周期素Ｄ１的表達異常可能作為判逡逑斷肺癌分化的生物標志物，具有早篩早診的臨床意義［２ａ２１］。逡逑０逡逑ＩＩ逡逑Ｇ0逡逑圖１邐細胞周期不同時向的周期依賴性激Ｉｔ復合物［１８］逡逑３逡逑

２在細胞生命中ＣｙｃｌｉｎＤＩ、Ｐ１６和Ｃｄｋ４的相互關系轉移酶逡逑由致癌因子刺激，引起的大分子包括ＤＮＡ和定，從而改變細胞正常的生長周期，促使其無發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽－Ｓ■轉移酶（ＧＳＴｓ）在肺癌細胞和ｓ是一類多功能的二聚體蛋白質，在癌變誘導前［１９］，提示ＧＳＴｓ高表達可能是組織對致癌劑刺瘤基因家族蛋白逡逑瘤機制研究中的一個重要方向，Ｂ淋巴細胞凋亡過程中起關鍵性作用的一類蛋白質，通過粒體結構與功能的穩(wěn)定性，發(fā)揮著啟動細胞凋

第一章緒論逡逑號傳遞作用（圖３）。蛋白是參與受體酪氨酸激酶（ＲＴＫ）信號通路的重要因子，逡逑當外源增殖信號，例如表皮生長因子受體（ＥＧＦＲ）與細胞膜上的相關受體結合后，逡逑靶向激活ＲＴＫ發(fā)生自身磷酸化，磷酸化的ＲＴＫ將信號傳遞給細胞膜上的Ｒａｓ，促進逡逑活化蛋白，激活下游ＲＷＲａｆ通路，引發(fā)有絲分裂遠激活蛋白激酶途徑的級聯(lián)放逡逑大作用于Ｃｙｄｉｎ邋Ｄ１，調(diào)節(jié)細胞增殖與分化。當Ｒａｓ基因發(fā)生突變時，便可以認為該蛋逡逑白常態(tài)下表達激活形式誘發(fā)細胞增殖失控，進而導致細胞發(fā)生癌變［２２］。肺癌細胞中逡逑ｐ２１顯著高表達，提示了邋Ｒａｓ蛋白過表達與肺癌的發(fā)生和發(fā)展相關。此外癌旁組織逡逑Ｒａｓ蛋白的陽性率高達４５．２８邋％，說明癌變前期就已經(jīng)存在有Ｒ簽的過量表達［２２】。因逡逑此Ｒａｓ的突變可以導致細胞Ｒａｓ過度表達

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本文編號：2759634