【摘要】：北五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill)是我國北方的一種特色植物,種植面積較大,其含有的五味子乙素具有多種生物活性,如抗氧化、抗炎抗癌等一些重要活性功能。在食品方向上,北五味子可作為優(yōu)質(zhì)食物供我們食用,除作為日�？墒秤檬称吠�,在醫(yī)學(xué)方向上,北五味子還有藥用價(jià)值,這兩方面的效力已成為近年來研究的熱點(diǎn)。人們在生產(chǎn)加工北五味子產(chǎn)品的過程中,其大量葉子常作為廢棄物而浪費(fèi)掉,若將其合理利用,既可以降低生產(chǎn)成本,實(shí)現(xiàn)資源的有效利用,又可以減少污染,節(jié)約能耗。我們前期研究結(jié)果表明北五味子葉中含有五味子乙素,初步探索到其具有抑制乳腺癌增殖作用,進(jìn)而繼續(xù)研究其對紫杉醇抑制乳腺癌的增效減毒作用機(jī)制,柑橘皮中總黃酮也具有增加癌細(xì)胞敏感性,增強(qiáng)紫杉醇聯(lián)合抗癌作用,故本論文進(jìn)一步以抗氧化性為指標(biāo)開發(fā)北五味子葉乙素和柑橘皮總黃酮復(fù)合物,但在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)柑橘皮總黃酮的穩(wěn)定性不佳,故我們將提取獲得的柑橘皮總黃酮進(jìn)行穩(wěn)定性優(yōu)化。本論文擬以北五味子葉為原料進(jìn)行提取、分離和純化其中的五味子乙素且定性定量分析,對其聯(lián)合紫杉醇抗乳腺癌機(jī)制進(jìn)行研究,為抗癌研究開發(fā)新資源。北五味子葉五味子乙素和柑橘皮總黃酮復(fù)配之前,先對柑橘皮總黃酮進(jìn)行提取工藝優(yōu)化及穩(wěn)定性研究,保證復(fù)配物成分精確及穩(wěn)定,為開發(fā)新的復(fù)配產(chǎn)品提供科學(xué)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:本文以北五味子葉為原料,通過超聲波提取北五味子葉中的五味子乙素粗提液,硅膠柱層析純化、高效液相鑒定其含量及純度,單因素試驗(yàn)及響應(yīng)面優(yōu)化提取工藝,并進(jìn)一步探討了北五味子葉五味子乙素抗癌的生物活性作用,探究了其對紫杉醇治療乳腺癌的減毒增效機(jī)制。在小鼠體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)中建立乳腺癌小鼠模型,將其隨機(jī)分為空白組、陰性組、陽性組(紫杉醇組,PTX組)、五味子乙素組(SchB組)和紫杉醇與五味子乙素聯(lián)合組。ELISA法檢測白細(xì)胞介素10(IL-10)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,HE染色檢測乳腺癌細(xì)胞及其周圍肌肉組織的形態(tài)學(xué)狀態(tài),免疫組化檢測蛋白激酶(p38)蛋白的表達(dá),Western blot檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表達(dá)。探究柑橘皮總黃酮的提取率及穩(wěn)定性,比較超聲和微波這兩種工藝對柑橘皮總黃酮提取率的影響。進(jìn)行復(fù)配物設(shè)計(jì),將北五味子葉五味子乙素和柑橘皮總黃酮進(jìn)行復(fù)配,探究其抗氧化的生物活性。優(yōu)化北五味子葉提取五味子乙素的最佳工藝條件為:按液料比V:m(mL/g)20:1,提取試劑75%乙醇,超聲功率400W,60℃提取30min。硅膠柱層析純化得北五味子葉五味子乙素,高效液相法測其含量為3.056mg/g,純度:98.26%。小鼠體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)中,與空白組相比,PTX組、SchB組和聯(lián)合組小鼠的生存時(shí)間均明顯延長,肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目明顯減少(P0.05),聯(lián)合組的變化顯著大于PTX組(P0.05),陰性組與空白組無顯著性差異(P0.05),與空白組相比,PTX組小鼠實(shí)體瘤重量明顯降低(P0.05),而陰性組和SchB組差異無顯著性(P0.05);與PTX組相比,聯(lián)合組實(shí)體瘤重量明顯降低(P0.05)。與空白組相比,給予PTX作用后可引起乳腺癌小鼠血清中TNF-α和MDA含量顯著升高,而IL-10、SOD、GSH含量和腫瘤組織中p38、VEGF和MMP-2蛋白的表達(dá)顯著降低(P0.05),梭形癌細(xì)胞數(shù)量下降,周圍肌肉組織被入侵程度降低;與空白組相比,給予SchB作用后,可使乳腺癌小鼠血清中TNF-α、IL-10、MDA含量和p38、VEGF和MMP-2蛋白表達(dá)明顯降低,SOD和GSH含量明顯升高(P0.05),梭形癌細(xì)胞也數(shù)量下降,肌肉組織被入侵程度也降低;PTX與SchB聯(lián)合作用后,血清中TNF-α、IL-10、MDA含量和p38、VEGF和MMP-2蛋白表達(dá)顯著降低,SOD和GSH含量顯著升高,與PTX組相比,差異顯著(P0.05),梭形癌細(xì)胞數(shù)量下降明顯,肌肉組織被入侵程度明顯降低,與空白組比,陰性組無顯著性差異(P0.05)。單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化確定了超聲波法和微波萃取法提取柑橘皮總黃酮的最佳工藝條件,超聲波輔助提取最佳工藝條件:乙醇濃度80%,液料比V:m(mL/g)40:1,超聲時(shí)間35min,提取溫度50℃,柑橘皮總黃酮提取率為13.785%±0.03%;微波萃取最佳工藝條件:乙醇濃度70%,液料比V:m(mL/g)40:1,輻照時(shí)間8min,微波功率400W,柑橘皮總黃酮提取率為13.154%±0.36%。以柑橘皮總黃酮保存率為指標(biāo),探討了溫度pH等一系列指標(biāo)對柑橘皮總黃酮穩(wěn)定性的影響,結(jié)果表明總黃酮在60℃以下較穩(wěn)定,pH為5.0-8.0時(shí)較穩(wěn)定,氧化劑H_2O_2、還原劑Na_2SO_3、糖類和自然光影響其穩(wěn)定性,檸檬酸和NaCl幾乎沒影響,維生素C對黃酮保存起到了促進(jìn)作用。單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化復(fù)配物復(fù)配最優(yōu)工藝條件:復(fù)配比(m_(乙素):m_(黃酮))為3:1,40%乙醇,復(fù)配pH8.0,清除率平均值為92.063%,與預(yù)測值(92.276%接近)。對·OH清除作用情況為復(fù)配物溶液五味子乙素溶液抗壞血酸溶液總黃酮溶液,對O_2~-.清除作用情況為復(fù)配物溶液抗壞血酸溶液五味子乙素溶液總黃酮溶液。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

圖 1-1 五味子乙素基本結(jié)構(gòu)1 The basic structure of Schisandrin食品及醫(yī)藥化工等行業(yè)，可使用如①組織保護(hù)，侯微等[5-6]保護(hù)作用。胡杰等[7]發(fā)現(xiàn)，Sc傷，提高 SOD 和 GSH-Px 含缺血再灌注損傷導(dǎo)致線粒體。③肝臟保護(hù)，Schisandrin B 具是 Schisandrin B 保肝的重要大鼠線粒體抗氧化能力增加經(jīng) Schisandrin B 干預(yù)后，有 1通過抑制 VEGF 表達(dá)，影響

既可鮮食又可加工為各種產(chǎn)品。柑橘產(chǎn)率豐厚、經(jīng)濟(jì)效重大作用。柑橘可降低患肝癌、心臟病、中風(fēng)和糖尿病風(fēng)險(xiǎn)陳皮，橘皮剝下后風(fēng)干便可入藥。陳皮性味辛、苦、溫，可不振，還能解魚蟹毒等[39]。柑橘含抗菌天然抗生素，果皮內(nèi)痰功用，可治胸痛、久咳等癥[40-41]。桔汁減少肝炎患者的慢癌的風(fēng)險(xiǎn)[42]。橘絡(luò)中蘆丁物質(zhì)能降低膽固醇，避免動(dòng)脈粥樣康的衛(wèi)士[43]。合物概述物（Flavonoids）廣泛存在于自然界的植物中，屬植物次生指基本母核為 2-苯基色原酮的一類化合物，其同分異構(gòu)體、都是 C6—C3—C6�，F(xiàn)泛指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過中間的其羥基衍生物一般為黃色，又稱黃酮或黃堿素。

主要技術(shù)路線

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2759597