【摘要】：目的:1、通過(guò)系統(tǒng)性評(píng)價(jià)與Meta分析的循證醫(yī)學(xué)手段,科學(xué)地評(píng)估基于“補(bǔ)腎生髓成肝”肝癌三級(jí)預(yù)防方案防治肝癌的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)的方法學(xué)質(zhì)量及相關(guān)數(shù)據(jù),為“補(bǔ)腎生髓成肝”之法防治肝癌提供可靠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。2、基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)體現(xiàn)“補(bǔ)腎生髓成肝”之法的地五養(yǎng)肝膠囊進(jìn)行藥理學(xué)預(yù)測(cè)及分析其防治肝癌的相關(guān)作用機(jī)制(“干性實(shí)驗(yàn)”),為后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。3、研究地五養(yǎng)肝膠囊對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系中(以下簡(jiǎn)稱為共培養(yǎng)體系)肝癌細(xì)胞的影響及機(jī)制,探討“補(bǔ)腎生髓成肝”(地五養(yǎng)肝膠囊)調(diào)控“髓生肝/髓失生肝”失衡防治肝癌發(fā)生發(fā)展的療效機(jī)制(“濕性實(shí)驗(yàn)”)。方法:1、通過(guò)檢索相關(guān)期刊論文(CNKI)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)(VIP)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CMB)、中國(guó)臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心(http://www.chictr.org/cn/)及英文數(shù)據(jù)庫(kù)MEDLINE、EMBASE、the Cochrane Central Register of Controlled Trials(CENTRAL)、The Cochrane Hepato-Biliary Group Controlled Trials Register等在內(nèi)的11個(gè)中英文數(shù)據(jù)庫(kù),來(lái)收集體現(xiàn)基于“補(bǔ)腎生髓成肝”肝癌三級(jí)預(yù)防方案防治原發(fā)性肝癌的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,嚴(yán)格按照循證醫(yī)學(xué)方法對(duì)這些臨床文獻(xiàn)研究質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)及數(shù)據(jù)的提取,臨床療效及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)采用軟件Rev Man 5.3進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)、Meta分析和敏感性分析。對(duì)不良反應(yīng)進(jìn)行描述性分析。對(duì)發(fā)表偏倚情況進(jìn)行漏斗圖分析。為基于“補(bǔ)腎生髓成肝”肝癌三級(jí)預(yù)防方案防治肝癌提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。2、采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對(duì)地五養(yǎng)肝膠囊防治肝癌的作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測(cè)分析,實(shí)驗(yàn)步驟如下:以地五養(yǎng)肝膠囊中五種中藥成分:熟地、茵陳、五味子、甘草、姜黃為中心詞,在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行查詢,以O(shè)B≥30%或DL≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其化合物進(jìn)行篩選,合并5種藥物成分,刪除冗雜。通過(guò)Onco DB.HCC、Liverome及TCMSP三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行肝癌相關(guān)基因的檢索。運(yùn)用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)查詢肝癌相關(guān)基因ID號(hào),看其是否符合人類基因的同時(shí)對(duì)其進(jìn)行整理。將最終篩選所得的化合物與人類肝癌相關(guān)基因進(jìn)行相互映射,用Cytoscape軟件構(gòu)建地五養(yǎng)肝膠囊成分-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)圖,同時(shí)將這些符合條件的靶標(biāo)蛋白輸入String數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。用Clue One軟件對(duì)KEGG Pathway進(jìn)行富集分析,得出地五養(yǎng)肝膠囊治療肝癌的作用機(jī)制。3、基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和課題組前期研究成果,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分將著重探討地五養(yǎng)肝膠囊對(duì)Wnt通路的調(diào)控作用。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)將分兩部分進(jìn)行:實(shí)驗(yàn)一:通過(guò)MTT法測(cè)出地五養(yǎng)肝膠囊對(duì)肝癌細(xì)胞HCCL-M3的IC50后,設(shè)計(jì)低濃度藥物組(20μg/ml)、中濃度藥物組(40μg/ml)、高濃度藥物組(80μg/ml),分別作用于肝癌細(xì)胞,收集24h、48h、72h細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞的增殖及凋亡情況。RT-PCR法檢測(cè)Wnt通路中關(guān)鍵信號(hào)分子mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二:根據(jù)課題組前期研究成果,用10%地五養(yǎng)肝藥物血清作用于共培養(yǎng)體系21天。通過(guò)CCK8、Transwell腫瘤侵襲觀察24h地五養(yǎng)肝藥物血清對(duì)共培養(yǎng)體系中肝癌細(xì)胞的影響,流式細(xì)胞術(shù)觀察14天、21天肝癌細(xì)胞及骨髓干細(xì)胞的凋亡情況,Western Blot及RT-PCR檢測(cè)7天、14天、21天Wnt通路中關(guān)鍵信號(hào)分子的表達(dá)情況。結(jié)果:1、基于Meta分析的臨床試驗(yàn):總共納入18篇文獻(xiàn),合計(jì)2213例原發(fā)性肝癌患者及存在肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)患者。在臨床有效率方面,根據(jù)對(duì)照組中西醫(yī)的治療情況不同,分為介入組、放療組及消融組三組來(lái)進(jìn)行亞組分析。結(jié)果顯示:基于“補(bǔ)腎生髓成肝”肝癌三級(jí)預(yù)防方案(試驗(yàn)組)效果優(yōu)于單純西醫(yī)治療(對(duì)照組),RR=1.07(95%CI:1.03 to 1.12)。中醫(yī)癥狀和體征療效、KPS生活質(zhì)量評(píng)分、降低AFP值及AST值等方面,結(jié)果顯示試驗(yàn)組療效顯著優(yōu)于對(duì)照組,RR分別為RR=1.71(95%CI:1.51to 1.93)、RR=1.13(95%CI:1.07 to 1.20)、RR=-0.32(95%CI:-0.58to-0.05)、RR=-0.51(95%CI:-0.76 to-0.26)。在升高NK細(xì)胞值方面,以療程3個(gè)月為界,分2組進(jìn)行亞組分析:其中療程在3個(gè)月以上者,因組間異質(zhì)性大,選取其中高質(zhì)量文獻(xiàn)進(jìn)行敏感性分析得出,試驗(yàn)組治療后NK細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組,RR=0.17(95%CI:0.03 to 0.30)。療程為3個(gè)月以下者,試驗(yàn)組治療后NK細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組,RR=1.63(95%CI:1.04 to 2.22)。在不良反應(yīng)方面,總體上來(lái)說(shuō),基于“補(bǔ)腎生髓成肝”肝癌三級(jí)預(yù)防方案在不良反應(yīng)發(fā)生率及出現(xiàn)不良反應(yīng)的程度上來(lái)看,均要少于、輕于單純西醫(yī)治療。2、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果:以O(shè)B≥30%或DL≥0.18為標(biāo)準(zhǔn)最終篩選出與人類肝癌相關(guān)的靶標(biāo)蛋白56個(gè)。通過(guò)Cytoscape軟件得出成分-靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)圖后,發(fā)現(xiàn)地五養(yǎng)肝膠囊總共作用肝癌的有效化合物分子為98個(gè),對(duì)應(yīng)的總靶標(biāo)為56個(gè)。String數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建,得出地五養(yǎng)肝膠囊治療肝癌的蛋白與蛋白互作圖,圖中包含得到415個(gè)相互作用關(guān)系,平均節(jié)點(diǎn)度為15.7。通過(guò)KEGG Pathway富集分析得出地五養(yǎng)肝膠囊治療肝癌相關(guān)的包括P53、PPAR、TNF、Wnt、VEGF等在內(nèi)的106個(gè)通路,為后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。3、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:地五養(yǎng)肝膠囊對(duì)肝癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制,結(jié)果表明:MTT法測(cè)肝癌細(xì)胞增殖情況結(jié)果:24h低濃度藥物組肝癌細(xì)胞抑制率為(0.137±0.010)、中濃度藥物組為(0.232±0.006)、高濃度藥物組為(0.305±0.003),低、中、高藥物組抑制率明顯高于對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)所得,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí),低、中、高三組藥物細(xì)胞抑制率表現(xiàn)為逐漸升高,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理得出其差異顯著,P0.05。48h低濃度藥物組肝癌細(xì)胞抑制率為(0.291±0.012)、中濃度藥物組為(0.399±0.017)、高濃度藥物組為(0.600±0.007),明顯高于對(duì)照組,組間差異顯著,P0.05。同時(shí),低、中、高三組之間比較所得,高濃度藥物組肝癌細(xì)胞抑制率明顯高于中濃度藥物組和低濃度藥物組,中濃度藥物組亦明顯高于低濃度藥物組,P0.05,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。72h檢測(cè)所得,低濃度藥物組細(xì)胞抑制率為(0.319±0.028)、中濃度藥物組為(0.578±0.003)、高濃度藥物組為(0.713±0.007),三組藥物組均明顯高于對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)所得,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí),低、中、高三組比較,差異顯著,P0.05。此外,將低、中、高藥物組24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞抑制率進(jìn)行同組間比較發(fā)現(xiàn),中、高濃度藥物組的細(xì)胞抑制率隨著時(shí)間的推移,效果逐漸增強(qiáng),差異顯著,P0.05。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝癌細(xì)胞凋亡結(jié)果表明:24h低濃度藥物組早期凋亡為(7.76±0.56)、中濃度藥物組為(7.88±0.81)、高濃度藥物組為(10.38±1.13)明顯高于對(duì)照組(3.22±0.12),組間差異顯著,P0.05;同時(shí),低、中、高濃度藥物組三組早期凋亡之間進(jìn)行比較,結(jié)果表明隨著藥物濃度的增長(zhǎng),其凋亡率逐漸升高,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中濃度藥物組晚期凋亡為(9.65±0.76)、高濃度藥物組為(11.85±0.79)明顯高于對(duì)照組(4.62±0.18),差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí),低、中、高濃度藥物組晚期凋亡率組間進(jìn)行比較,結(jié)果表明隨著藥物濃度的增長(zhǎng),其凋亡率逐漸升高,差異顯著,P0.05。低濃度藥物組總凋亡為(12.15±0.86)、中濃度藥物組為(17.53±0.84)、高濃度藥物組為(22.23±1.24),三組藥物組均明顯高于對(duì)照組(7.84±0.22),組間比較,差異顯著,P0.05;同時(shí),低、中、高濃度三組藥物組總凋亡隨著濃度的升高,其凋亡率逐漸升高,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。48h低濃度藥物組早期凋亡為(10.69±0.46)、中濃度藥物組為(14.79±0.82)、高濃度藥物組為(12.99±0.60)明顯高于對(duì)照組早期凋亡(3.92±0.27),四組間比較,差異顯著,P0.05。低濃度藥物組晚期凋亡為(5.11±0.30)、中濃度藥物組(15.05±0.26)、高濃度藥物組(29.43±0.87),三組藥物組明顯高于對(duì)照組(4.81±0.12),組間比較,差異顯著,P0.05;同時(shí),三組藥物組之間進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),其晚期凋亡隨著藥物濃度的升高,凋亡愈加明顯,組間比較差異顯著,P0.05。低濃度藥物組總凋亡為(15.80±0.76)、中濃度藥物組為(29.84±1.04)、高濃度藥物組為(42.42±0.91),三組藥物組總凋亡率明顯高于對(duì)照組(8.74±0.39),組間差異顯著,P0.05;同時(shí),低中高三組藥物組總凋亡隨著藥物濃度的升高,其凋亡率逐漸升高,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。72h低濃度藥物組早期凋亡為(8.20±0.43)、中濃度藥物組(13.04±0.36)、高濃度藥物組(11.11±0.99),三組藥物組均明顯高于對(duì)照組(4.66±0.33),四組間比較,差異顯著,P0.05。低濃度藥物組晚期凋亡為(8.84±0.59)、中濃度藥物組為(26.15±0.94)、高濃度藥物組為(56.71±0.61),三組藥物組均明顯高于對(duì)照組(5.08±0.30),組間差異顯著,P0.05;同時(shí),三組藥物組之間進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),其晚期凋亡隨著藥物濃度的升高,其凋亡愈加明顯,組間比較差異顯著,P0.05。低濃度藥物組總凋亡率為(17.05±0.92)、中濃度藥物組為(39.19±1.30)、高濃度藥物組為(67.82±1.44),均高于對(duì)照組(9.75±0.42),四組間比較,差異顯著,P0.05;同時(shí),低、中、高三組藥物組總凋亡隨著藥物濃度的升高,其凋亡率逐漸升高,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外,分別將低、中、高三組藥物24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的總凋亡進(jìn)行同組間的比較,發(fā)現(xiàn)隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng),每組藥物對(duì)肝癌細(xì)胞的總凋亡逐漸增加,差異明顯,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR檢測(cè)Wnt信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子mRNA表明:24h時(shí),中濃度藥物組β-catenin mRNA表達(dá)為(0.48±0.08),高濃度藥物組為(0.44±0.06),兩組藥物組均明顯低于對(duì)照組,差異顯著,P0.05;同時(shí),中、高濃度藥物組明顯低于低濃度藥物組(0.95±0.15),經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)P0.05,差異顯著。48h時(shí),低濃度藥物組為(0.42±0.08)、中濃度藥物組為(0.26±0.01)、高濃度藥物組為(0.09±0.02),三組藥物組均明顯低于對(duì)照組,差異顯著,P0.05;同時(shí),中濃度藥物組亦低于低濃度藥物組,差異顯著,P0.05。72h時(shí),低、中、高三組藥物組β-catenin mRNA表達(dá)分別為(0.17±0.05)、(0.24±0.10)、(0.13±0.05)明顯低于對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算P0.05,差異顯著。此外,將中、高濃度藥物組24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的β-catenin mRNA進(jìn)行同組間比較,發(fā)現(xiàn)48h的β-catenin mRNA表達(dá)明顯低于24h的表達(dá),P0.05,差異顯著。低濃度藥物組24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的β-catenin mRNA表達(dá)進(jìn)行同組間比較,發(fā)現(xiàn)其隨著時(shí)間的延長(zhǎng),β-catenin mRNA表達(dá)逐漸降低,且差異顯著,P0.05。24h高濃度藥物組GSK3βmRNA表達(dá)為(3.34±0.92),明顯高于對(duì)照組,差異顯著,P0.05;同時(shí),高濃度藥物組GSK3βmRNA表達(dá)亦明顯高于低濃度藥物組(1.21±0.48)、中濃度藥物組(1.37±0.46),差異顯著,P0.05。48h中濃度藥物組(3.63±1.48)、高濃度藥物組(8.69±1.63),兩組藥物組均明顯高于對(duì)照組GSK3βmRNA表達(dá),差異顯著,P0.05;同時(shí),高濃度藥物組亦明顯高于中濃度藥物組和低濃度藥物組(1.19±0.30),差異顯著,P0.05。72h低濃度藥物組GSK3βmRNA表達(dá)為(5.25±1.39)、中濃度藥物組為(8.55±3.31)、高濃度藥物組為(9.55±3.65),明顯高于對(duì)照組,差異顯著,P0.05。此外,低濃度藥物組48h與72h GSK3βmRNA相比,差異顯著,P0.05。Cyclin D1 mRNA結(jié)果顯示:48h低濃度藥物組Cyclin D1 mRNA表達(dá)為(0.25±0.06)、中濃度藥物組為(0.13±0.02)、高濃度藥物組為(0.09±0.02),三組藥物組明顯低于對(duì)照組,組間差異顯著,P0.05;同時(shí),高濃度藥物組和中濃度藥物組亦低于低濃度藥物組,差異顯著,P0.05。72h低濃度藥物組GSK3β表達(dá)(0.08±0.01)、中濃度藥物組(0.10±0.04)、高濃度藥物組(0.06±0.01)明顯低于對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)P0.05,差異顯著。此外,低濃度藥物組24h、48h、72h的Cyclin D1 mRNA表達(dá)逐漸降低,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中、高濃度藥物組24h、48h的Cyclin D1 mRNA表達(dá)同組間相比較,其表達(dá)逐漸降低,差異顯著,P0.05。實(shí)驗(yàn)二:采用人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-肝癌細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系來(lái)模擬人體內(nèi)“髓失生肝”的病理狀態(tài)通過(guò)CCK8法檢測(cè)共培養(yǎng)體系中肝癌細(xì)胞的增殖,結(jié)果表明:地五養(yǎng)肝藥物血清組OD值為(0.623±0.014),明顯低于正常對(duì)照組(0.840±0.019)和空白血清對(duì)照組(0.812±0.021),三組間比較,差異顯著,P0.05。通過(guò)公式計(jì)算得出的細(xì)胞抑制率結(jié)果發(fā)現(xiàn),地五養(yǎng)肝藥物血清組為(0.257±0.034)明顯高于空白血清對(duì)照組(0.033±0.003),兩組間比較,差異顯著,P0.05。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)體系中肝癌細(xì)胞的凋亡情況發(fā)現(xiàn):第14天結(jié)果顯示,地五養(yǎng)肝藥物血清組早期凋亡(14.89±2.50)和總凋亡率(22.26±1.54)、空白血清對(duì)照組早期凋亡率(10.42±0.92)和總凋亡率(14.50±1.99),兩組均明顯高于正常對(duì)照組早期凋亡(4.79±0.22)和總凋亡(6.54±0.16),三組間比較,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組早期凋亡和總凋亡亦明顯高于空白血清對(duì)照組,兩組間比較,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21天結(jié)果顯示,地五養(yǎng)肝藥物血清組早期凋亡率(18.07±0.72)、晚期凋亡率(7.65±0.61)及總凋亡率(25.72±0.95),空白血清對(duì)照組早期凋亡率(10.34±0.86)、晚期凋亡率(4.60±0.50)及總凋亡率(14.93±1.26)均明顯高于正常對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理發(fā)現(xiàn),差異顯著,P0.05;同時(shí),分別將地五養(yǎng)肝藥物血清組早期凋亡率、晚期凋亡率及總凋亡率與空白血清對(duì)照組相比,發(fā)現(xiàn)地五養(yǎng)肝藥物血清組明顯高于空白血清對(duì)照組,兩組間差異顯著,P0.05。此外,地五養(yǎng)肝藥物血清組21天的總凋亡率明顯高于14天的總凋亡率,兩者相比,差異顯著,P0.05。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)體系中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡情況所得:第14天結(jié)果顯示:地五養(yǎng)肝藥物血清組晚期凋亡(4.82±0.37)和總凋亡率(15.30±0.83)明顯低于空白血清對(duì)照組骨髓細(xì)胞的晚期凋亡率(8.77±0.51)和總凋亡率(19.25±1.23),兩組間比較,P0.05,差異顯著。第21天結(jié)果表明:地五養(yǎng)肝藥物血清組晚期凋亡(6.37±0.38)和總凋亡率(15.04±1.07),明顯低于空白血清對(duì)照組骨髓細(xì)胞的晚期凋亡率(10.64±0.84)和總凋亡率(21.45±1.45),兩組間比較,P0.05,差異顯著。Transwell腫瘤侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),地五養(yǎng)肝藥物血清為(60.00±6.25)明顯低于空白血清對(duì)照組(89.33±4.16)和正常對(duì)照組(96.66±5.03),組間差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR檢測(cè)β-catenin mRNA表達(dá)結(jié)果發(fā)現(xiàn):第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.63±0.19)、空白血清對(duì)照組(0.67±0.18)與正常對(duì)照組相比有所降低,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.38±0.16)、空白血清對(duì)照組(0.53±0.11)均明顯低于正常對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組亦明顯低于空白血清對(duì)照組,差異顯著,P0.05。GSK-3βmRNA表達(dá)結(jié)果顯示:第7天,地五養(yǎng)肝藥物血清組GSK-3β表達(dá)為(1.90±0.38)、空白血清對(duì)照組(1.61±0.35),兩組均明顯高于正常對(duì)照組(0.92±0.11),差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(3.35±0.66)、空白血清對(duì)照組(2.48±0.46),兩組均明顯高于正常對(duì)照組,三組間差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組亦高于空白血清對(duì)照組,P0.05,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(5.45±0.53)、空白血清對(duì)照組(4.85±0.52),兩組均明顯高于正常對(duì)照組,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清與空白血清對(duì)照組相比,差異顯著,P0.05。C-MYC mRNA表達(dá)結(jié)果:第7天,地五養(yǎng)肝藥物血清組C-MYC表達(dá)為(0.60±0.14)、空白血清對(duì)照組(0.69±0.13),兩組均低于正常對(duì)照組(0.93±0.18),差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.45±0.12)和空白血清對(duì)照組(0.65±0.15)均低于正常對(duì)照組,三組間差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組亦低于空白血清對(duì)照組,P0.05,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組和空白血清對(duì)照組均明顯低于正常對(duì)照組,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.22±0.04)與空白血清對(duì)照組(0.37±0.08)相比,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Cyclin D1 mRNA表達(dá)結(jié)果表明:第7天,地五養(yǎng)肝藥物血清組Cyclin D1表達(dá)為(0.78±0.05),明顯低于正常對(duì)照組(1.06±0.13),差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.53±0.12)和空白血清對(duì)照組(0.68±0.11)與正常對(duì)照組相比有所降低,差異顯著,P0.05。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.25±0.04)及空白血清對(duì)照組(0.39±0.07)與正常對(duì)照組相比有所降低,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組明顯低于空白血清對(duì)照組,組間相比,差異顯著,P0.05。Western Blot檢測(cè)β-catenin蛋白表達(dá)結(jié)果發(fā)現(xiàn):第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組β-catenin蛋白表達(dá)為(0.36±0.05),明顯低于正常對(duì)照組(0.76±0.13),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組蛋白表達(dá)亦明顯低于空白血清對(duì)照組(0.57±0.05),差異顯著,P0.05。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.24±0.03)和空白血清對(duì)照組(0.68±0.04)均低于正常對(duì)照組(0.82±0.02),經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,三組間比較差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組β-catenin蛋白表達(dá)亦低于空白血清對(duì)照組,差異顯著,P0.05。GSK-3β蛋白表達(dá)結(jié)果:第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組GSK-3β蛋白表達(dá)為(0.94±0.22),空白血清對(duì)照組為(0.71±0.12),均明顯高于正常對(duì)照組(0.45±0.06),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異顯著,P0.05。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組GSK-3β蛋白表達(dá)為(1.05±0.11)、空白血清對(duì)照組(0.76±0.06),均高于正常對(duì)照組(0.39±0.07),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組GSK-3β蛋白表達(dá)亦高于空白血清對(duì)照組,差異顯著,P0.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C-MYC蛋白表達(dá)結(jié)果表明:第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組為(0.34±0.03)、空白血清對(duì)照組為(0.57±0.06),兩組均低于正常對(duì)照組(0.73±0.03),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組c-MYC蛋白表達(dá)亦低于空白血清對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異顯著,P0.05。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組為(0.36±0.12)、空白血清對(duì)照組為(0.78±0.14),均低于正常對(duì)照組(0.89±0.15),經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P0.05,差異顯著;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組蛋白表達(dá)亦低于空白血清對(duì)照組,差異顯著,P0.05。Cyclin D1蛋白表達(dá)結(jié)果:第7天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.37±0.07)低于正常對(duì)照組(0.61±0.10),經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì),差異顯著,P0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第14天,地五養(yǎng)肝藥物血清組(0.23±0.04)和空白血清對(duì)照組(0.37±0.10)均低于正常對(duì)照組(0.50±0.02),差異顯著,P0.05;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組Cyclin D1表達(dá)亦低于空白血清對(duì)照組,經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異顯著,P0.05。第21天,地五養(yǎng)肝藥物血清組Cyclin D1表達(dá)(0.21±0.04)低于正常對(duì)照組(0.74±0.03),經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P0.05,差異顯著;同時(shí),地五養(yǎng)肝藥物血清組亦低于空白血清對(duì)照組(0.66±0.06),差異P0.05。結(jié)論:(1)通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)及Meta分析結(jié)果表明,臨床上運(yùn)用基于“補(bǔ)腎生髓成肝”肝癌三級(jí)預(yù)防方案防治肝癌較單純西醫(yī)治療,不僅療效顯著、不良反應(yīng)少,還可改善肝再生微環(huán)境來(lái)延緩疾病的進(jìn)程。(2)通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)地五養(yǎng)肝膠囊作用肝癌的相關(guān)機(jī)制可能跟Wnt信號(hào)通路密切相關(guān)。(3)通過(guò)2個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,地五養(yǎng)肝膠囊不管是單獨(dú)作用于人肝癌細(xì)胞還是在共培養(yǎng)體系中,其對(duì)肝癌細(xì)胞都有抑制其細(xì)胞增殖,降低其侵襲性、誘導(dǎo)其凋亡的作用,效果顯著。同時(shí),在共培養(yǎng)體系中發(fā)現(xiàn),地五養(yǎng)肝膠囊有保護(hù)骨髓干細(xì)胞、抑制肝癌細(xì)胞對(duì)骨髓干細(xì)胞凋亡的作用—“補(bǔ)腎生髓”作用。通過(guò)Western blot及RT-PCR檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn),地五養(yǎng)肝膠囊對(duì)肝癌細(xì)胞的具體作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制過(guò)度激活的Wnt信號(hào)通路來(lái)改善肝再生微環(huán)境從而防止肝癌的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1 PRISMA 流程圖4.1 納入 RCT 的特點(diǎn)共有 18 個(gè) RCT 合計(jì) 2213 例原發(fā)性肝癌患者（其中試驗(yàn)組 1336 例，對(duì)照組為 877 例），文獻(xiàn)中有 2 篇高質(zhì)量文獻(xiàn)，其余 16 篇為低質(zhì)量文獻(xiàn)全部試驗(yàn)均在國(guó)內(nèi)完成。發(fā)表年限從 2009 年-2018 年，樣本量從 33-60例不等，所有 RCT 均提及基線資料各組間具有可比性。其中原發(fā)性肝癌斷方面：2 個(gè) RCT[12,19]參照 2001 年中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)提出的發(fā)性肝癌診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)，2 個(gè) RCT[14,25]參照《中國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范》，1 個(gè) RCT[13]參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)的《臨床診療指南·腫瘤分冊(cè)》，1 個(gè) RCT[參照 2000 年第四屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議修正的原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，1 個(gè)RCT[21]參照 1993 年頒布的《中藥新藥治療原發(fā)性肝癌臨床研究指導(dǎo)原則1 個(gè) RCT[20]參照美國(guó)肝病研究協(xié)會(huì)診斷標(biāo)準(zhǔn)，1 個(gè) RCT[17]參照原發(fā)性肝癌[15][16,23,26,28]

臨床總有效率

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉德忠;常波;林飛翔;李學(xué)東;;β-catenin在肝癌組織中的表達(dá)及對(duì)肝癌患者預(yù)后的影響[J];癌變·畸變·突變;2017年04期

2 何娜娜;王冬梅;張新軍;;補(bǔ)腎健脾方聯(lián)合扶正抑瘤方治療原發(fā)性肝癌術(shù)后療效及對(duì)血清免疫因子水平的影響[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2017年21期

3 劉紅梅;劉世專;黃衛(wèi)俊;孫成暉;嚴(yán)偉紅;;化療聯(lián)合復(fù)方皂礬丸在中晚期原發(fā)性肝癌患者中的效果研究[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2017年18期

4 常明向;吳梅梅;李瀚e

本文編號(hào)：2731901