【摘要】：目的:通過應(yīng)用草花覆盆顆粒對IgA腎病大鼠進行藥物干預(yù)治療,觀察IgA腎病大鼠的一般情況、生化指標、病理改變以及核轉(zhuǎn)錄因子-kB(NF-kB)和纖維連接蛋白(FN)表達的變化,探討草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病的作用機制。方法:1.模型復(fù)制實驗:將20只體重在(150±30)g的清潔級(SD)大鼠在標準的實驗室環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機分為A(造模組)和B(空白組)兩組各10只,采用張靜等人的復(fù)合造模法(牛血清白蛋白(BSA)+脂多糖(LPS)+四氯化碳(CCL_4)復(fù)制IgA腎病大鼠模型,將BSA用蒸餾水配成100g/L,按照600mg/kg對造模組大鼠進行灌胃,隔日1次,持續(xù)12周;同時對造模組大鼠進行皮下注射CCL_40.1mL和蓖麻油0.3mL,1次/只/周,共12周。并在第8周對造模組大鼠進行尾椎注射LPS,0.5mg/只/次,在同一時段,空白組均在以上步驟中用等體積的蒸餾水灌胃,等體積生理鹽水注射。兩組大鼠于第12周末采集血液和腎臟組織后殺剪。通過比較兩組大鼠的一般情況、生化指標以及腎組織病理改變,確定模型復(fù)制是否成功。2.草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病大鼠實驗:將51只體重在(150±30g)的清潔級(SD)大鼠在標準的實驗室環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機分為空白組C(6),模型組D(15),科素亞組E(15),草花覆盆顆粒組F(15)四個組,按照上述造模方法進行造模。在持續(xù)12周造模結(jié)束后,從第13周開始每組進行灌胃給藥,連續(xù)8周,科素亞組給予科素亞,草花覆盆顆粒組給予科素亞聯(lián)合草花覆盆顆粒,正常組和模型組每日予以等量蒸餾水灌胃,等體積生理鹽水注射。實驗期間各組以普通飼料,凈化水喂養(yǎng)。在各組大鼠給藥期間,每日觀察大鼠實驗前后的身體癥狀、體征、活動狀態(tài);第12周、20周將各組大鼠置于代謝籠內(nèi)禁食、不禁水收集其24小時尿液,第20周末采集血液標本和腎臟組織后將大鼠殺剪。統(tǒng)計分析各組腎病大鼠24小時尿蛋白定量(Pro)、血清肌酐(SCr)、胱抑素(Cysc)等數(shù)據(jù),應(yīng)用免疫熒光法檢測IgA免疫復(fù)合物沉積情況和纖維連接蛋白FN表達情況,酶聯(lián)免疫吸附法觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB表達情況。結(jié)果:1.模型復(fù)制實驗:通過比較兩組大鼠的一般情況,生化指標、腎組織病理改變以及IgA免疫復(fù)合物沉積情況,確定模型復(fù)制成功。2.草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病大鼠實驗:2.1各組大鼠一般情況比較:空白組大鼠精神和毛色良好,反應(yīng)靈敏,飲食正常。模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒組造模前與空白組相同,造模第3周左右三組大鼠均出現(xiàn)毛色灰暗,精神不振,消瘦,懶動等癥狀。經(jīng)藥物干預(yù)后科素亞組和草花覆盆顆粒組兩組大鼠精神狀況和食欲較前有所改善,且草花覆盆顆粒組大鼠明顯優(yōu)于科素亞組。2.2各組大鼠24小時尿蛋白定量比較:藥物干預(yù)前模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒與空白組相比,Pro明顯升高,并且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。藥物干預(yù)后,科素亞組、模型組與空白組相比,24Pro有統(tǒng)計學意義(P0.05)。草花覆盆顆粒組與空白組相比沒有統(tǒng)計學意義,而草花覆盆顆粒組與科素亞組相比有明顯統(tǒng)計學意義(P0.01)。通過上表說明灌胃前后空白組大鼠沒有明顯變化,灌胃前的變化說明造模有意義。灌胃后草花覆盆顆粒組24Pro明顯低于科素亞組與模型組。說明在本次實驗中草花覆盆顆粒組在干預(yù)大鼠24小時尿蛋白定量的治療方面優(yōu)于比科素亞組。2.3各組大鼠血清肌酐(Scr)、胱抑素(Cysc)比較:藥物干預(yù)后:模型組、科素亞組肌酐含量與空白組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。草花覆盆顆粒組肌酐與空白組相比沒有統(tǒng)計學意義。草花覆盆顆粒組肌酐和模型組、科素亞組相比明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P0.01)�？扑貋喗M胱抑素和模型組相比沒有統(tǒng)計學意義。說明在本次實驗中草花覆盆顆粒組在干預(yù)肌酐和胱抑素的方面明顯優(yōu)于與科素亞組。2.4腎組織病理學觀察:光鏡下空白組腎小球大小形態(tài)正常,系膜及基質(zhì)無明顯病理改變。模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒與空白組比較系膜及基質(zhì)明顯增厚,科素亞組及草花覆盆顆粒較空白組增厚,但同模型組相比病理改變較小。Masson三色法顯示:空白組腎小球大小正常邊緣清晰,無明顯病理改變。模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒與空白組相比膠原纖維明顯增多并且融合�？扑貋喗M、草花覆盆顆粒模型組相比膠原纖維含量明顯減少,并且草花覆盆顆粒明顯優(yōu)于科素亞組。2.5各組大鼠NF-kB表達影響的比較:藥物干預(yù)后,模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒組與空白組相比,NF-kB表達升高有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且草花覆盆顆粒組與科素亞組更顯著(P0.01)。科素亞組、草花覆盆顆粒組與模型組相比有所改善,有統(tǒng)計學意義(P0.05)�？扑貋喗M與草花覆盆顆粒組相比改善明顯。說明在本次實驗中草花覆盆顆粒組和科素亞組都具有能夠降低NF-kB表達的作用,并且草花覆盆顆粒組比科素亞組療效更顯著。2.6各組大鼠FN表達的影響比較:藥物干預(yù)后草花覆盆顆粒組、科素亞組與模型組相比,FN表達明顯降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且草花覆盆顆粒組與科素亞組更顯著(P0.01)。從免疫熒光圖中看出:科素亞組、草花覆盆顆粒組與模型組相比熒光點明顯分散。草花覆盆顆粒組與科素亞組相比熒光點量更少更分散。說明草花覆盆顆粒組在調(diào)控FN表達方面的影響和科素亞組相比具有明顯的優(yōu)勢。結(jié)論:1.草花覆盆顆粒組能明顯改善IgA腎病大鼠的食欲、精神狀況及其腎組織病理損傷情況。2.草花覆盆顆粒能下調(diào)NF-kB表達,延緩IgA腎病的進展。3.草花覆盆顆粒能下調(diào)FN的表達并減少ECM的產(chǎn)生,延緩IgA腎病纖維化進展。
【學位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

3 肝功能指標與空白組相比，造模組 ALB、ALT、AST 等轉(zhuǎn)氨酶指標輕微升高，但是學意義（P>0.05）。說明該造模方法對造模組大鼠的肝功能無明顯損害。表 2 模型復(fù)制各組大鼠肝功能比較組別 n ALT(U/L) AST(U/L)白組 10 42.70283±11.738407 63.72783±10.3701模組 10 55.52514±19.325112 64.98900±18.64974 腎臟病理學檢查光鏡下空白組大鼠腎小球和腎小管形態(tài)結(jié)構(gòu)正常。造模組大鼠腎組織出球腫脹，體積增大，腎小球硬化，系膜細胞和基質(zhì)中至重度增生。見圖

各組大鼠HE染色情況（100×和400×）

【參考文獻】

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本文編號：2731572