【摘要】：目的:探討膝痛顆粒方對(duì)KOA的治療作用與SDF-1/CXCR4信號(hào)通路的相關(guān)性。方法:將60只7周齡的SD大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組:空白組、模型組、硫酸氨基葡萄糖組、膝痛顆粒方(分低、中、高濃度)組。予空白組大鼠的右膝關(guān)節(jié)注射50ul生理鹽水,向其他各組大鼠的右膝關(guān)節(jié)注射50ul濃度為40mg/ml碘乙酸鈉溶液建立KOA模型,確認(rèn)模型成功后,用不同藥物干預(yù)28天后取材。對(duì)各組大鼠右膝關(guān)節(jié)組織切片HE染色后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,評(píng)估其炎癥程度;通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA法)檢測(cè)血清中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)情況;通過免疫組化法檢測(cè)關(guān)節(jié)滑膜中趨化因子SDF-1蛋白及其關(guān)節(jié)軟骨中受體CXCR4的表達(dá)情況。結(jié)果:1.肉眼下大體觀察及HE染色讀片發(fā)現(xiàn):空白組大鼠的關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,滑膜細(xì)胞排列整齊,未見炎性細(xì)胞浸潤;模型組可見明顯的骨性關(guān)節(jié)炎的表現(xiàn),肉眼下可見嚴(yán)重軟骨破壞,負(fù)重區(qū)可見軟骨下骨,顯微鏡下可見絨毛上皮細(xì)胞增生,伸入關(guān)節(jié)腔;立方上皮細(xì)胞和滑膜細(xì)胞增生,并伴隨大量血管增生;視野中可見炎性細(xì)胞聚集,局部滑膜組織發(fā)生纖維化。其余各組均可見不同程度的軟骨破壞、滑膜增生纖維樣變及炎性細(xì)胞浸潤,均較模型組大鼠輕。藥物干預(yù)組中以膝痛顆粒方高濃度組大鼠的關(guān)節(jié)破壞程度最輕;2.ELISA法檢測(cè)結(jié)果分析顯示:與空白組相比較,模型組與藥物干預(yù)的各組的四項(xiàng)指標(biāo)均明顯升高,P0.05;且藥物干預(yù)組與模型組相比,四項(xiàng)指標(biāo)均不同程度的低于模型組,P0.05;陽性藥物硫酸氨基葡萄糖與不同濃度的膝痛顆粒方對(duì)比分析時(shí)發(fā)現(xiàn),A組與L組在炎癥因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的水均平近似,P0.05,A組與M組對(duì)比分析發(fā)現(xiàn),M組的炎癥因子水平及基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)水平明顯低于A組,除IL-1β意外,均見P小于0.05;H組則明顯優(yōu)于A組,P0.05;比較不同濃度的膝痛顆粒方組之間的炎癥因子和基質(zhì)金屬蛋白酶的水平時(shí)發(fā)現(xiàn),四項(xiàng)指標(biāo)具有相同的趨勢(shì),即L組M組H組,M組與L組,P小于0.05,M組與H組比較分析無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.免疫組化法檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果分析顯示:與空白組相比較,模型組與藥物干預(yù)的各組SDF-1和CXCR4的光密度值明顯高,即陽性細(xì)胞率明顯高于空白組,P0.05;且藥物干預(yù)組與模型組相比,陽性細(xì)胞率明顯要低,P0.05;陽性藥物硫酸氨基葡萄糖與不同濃度的膝痛顆粒方對(duì)比分析時(shí)發(fā)現(xiàn),前者的滑膜細(xì)胞表達(dá)SDF-1的陽性率及軟骨細(xì)胞表達(dá)CXCR4的陽性率明顯要高后者,P0.05;比較不同濃度的膝痛顆粒方組之間的SDF-1蛋白及其受體的細(xì)胞陽性率時(shí)發(fā)現(xiàn),基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1與其受體的表達(dá)有相同的趨勢(shì),即L組M組H組,H組與L組相比,P0.05。結(jié)論:膝痛顆粒方能降低OA關(guān)節(jié)中炎癥因子IL-1β、TNF-α的含量,減輕炎癥的級(jí)聯(lián)放大反應(yīng),抑制滑膜細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子SDF-1的表達(dá),從而抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路,下調(diào)MMP-3、MMP-13的表達(dá),抑制分解代謝,從而起到治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的作用。經(jīng)過組間數(shù)據(jù)比較,發(fā)現(xiàn)膝痛顆粒方的對(duì)于改善KOA相關(guān)指標(biāo)的效果優(yōu)于硫酸氨基葡萄糖膠囊。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

使用顯微鏡（ＤＭ３０００）觀察各組大鼠膝關(guān)節(jié)ＨＥ染色病理片可見：逡逑空白組：關(guān)節(jié)腔完整，關(guān)節(jié)軟骨面光滑，滑膜細(xì)胞排列整齊，未見炎性細(xì)胞。逡逑模型組：滑膜組織可見絨毛上皮細(xì)胞增生，伸入關(guān)節(jié)腔；立方上皮細(xì)胞和滑膜細(xì)生，并伴隨大量血管增生；視野中可見炎性細(xì)胞聚集，局部滑膜組織發(fā)生纖維化，缺損，負(fù)重區(qū)域明顯；逡逑硫酸氨基葡萄糖組：滑膜細(xì)胞增生，排列趨于規(guī)整，可見大量血管增生，軟骨面；逡逑膝痛顆粒方低劑量：滑膜細(xì)胞增生，排列紊亂，可見纖維化，局部血管增生；軟粗糙；逡逑膝痛顆粒方中劑量：滑膜細(xì)胞增生，仍可見大量血管增生，關(guān)節(jié)腔完整，軟骨面滑；逡逑膝痛顆粒方高劑量：滑膜細(xì)胞排列整齊，有少量增生。關(guān)節(jié)軟骨基本平滑。逡逑

圖２各組炎癥因子表達(dá)情況逡逑注：＃：與空白組比較ｐ＜０．邋０５，邋＃＃：邋ｐ＜０．邋０１；邋＊：與模型組比較ｐ＜０．邋０５，林：ｐ＜０．邋０１逡逑ＭＭＰ－３／ＭＭＰ－１３逡逑１５－逡逑ｉｉｍ逡逑４￥）逡逑ｇ邋１0＿邐＃＃邐Ｅｉｕ邐ＭＭ邋Ｐ－３逡逑Ｖ邐ｍ邐ｌｉ邐Ｂ邐ＭＭＰ－１３逡逑｜邐自邐＝－逡逑＾邐Ｓ邋ｍ邐甜邐＝＿Ｔ＿＃＃邋＾邋＊＊逡逑？５邐Ｓ邋＊＊邐＊＊邐＝白邋＊＊邋＊４邋白逡逑．ｓ邐＊＊邋＂ｉ├煎義希輳歟

本文編號(hào)：2731196